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摘要目的研究香丹葡萄糖注射液中丹参的指纹图谱分析方法。方法以丹参素为对照峰，应用高效液相色谱（HPLC）法。色谱柱为Cromasil C18 （250mm×4.6mm，5μm），流动相为1%冰醋酸溶液-0.8%冰醋酸的甲醇溶液（线性梯度洗脱），检测波长为281nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，灵敏度0.01AUF。结果标示出香丹葡萄糖注射液中丹参的4个指纹特征峰，建立了香丹葡萄糖注射液中丹参的指纹图谱测定方法。结论本试验方法准确、重复性好，所建指纹图谱特征性强，为香丹葡萄糖注射液的指纹图谱质量控制提供了依据。
关键词香丹葡萄糖注射液；丹参素；高效液相色谱法；指纹图谱
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0336-01
【Abstract】Objective:Fingerprint analysis method of Salvia miltiorrhiza in Xiangdan Glucose Injection.methods：Taking Danshensu as the control peak, high performance liquid chromatography (HPLC) method was used.Chromatographic column is C18 Cromasil (4.6mm * 250mm, 5μm),The mobile phase is 1% glacial acetic acid solution -0.8% methanol solution of glacial acetic acid (linear gradient elution),The detection wavelength is 281nm, the flow rate is 1.0mL/min, the column temperature is 30, and the sensitivity is 0.01AUF.results：Marked the 4 fingerprint of Salvia miltiorrhiza in Xiangdan Glucose Injection,Method for the determination of fingerprint of Salvia miltiorrhiza in Xiangdan Glucose Injection is established.Conclusion:The test method is accurate and good reproducibility,Fingerprint pattern was built,Provide the basis for the quality control of Glucose Injection fingerprint Xiangdan.
【Key words】Xiangdan Glucose Injection; Danshensu; High performance liquid chromatography;Fingerprint
香丹葡萄糖注射液为丹参的水提物和降香水蒸气蒸馏饱和溶液与葡萄糖制成的灭菌水溶液，其主要成分为丹参水提物、降香挥发油饱和溶液及葡萄糖，剂型为大输液。具有活血化瘀，通脉舒络，理气止痛的功能。广泛用于治疗动脉硬化及高血压所致的冠状动脉供血不全等冠心病，胸中憋闷，心绞痛，心肌梗塞等，临床疗效较好[1]。
中药指纹图谱分析技术作为鉴别中药材及其制剂整体质量的有效手段得到越来越广泛的应用[2]，是国际公认的控制中药或天然药物质量的有效手段，也是我国中药走向现代化的一个重要内容。本文采用HPLC法研究了香丹葡萄糖注射液中丹参的指纹图谱，建立了丹参的高效液相色谱指纹图谱分析方法 , 并对所建立的方法进行了方法学考察。该方法能够更全面、更精确地控制香丹葡萄糖注射液的质量。
1、仪器与材料
1.1仪器惠普HP-1100高效液相色谱仪；惠普HP-1100jianc4器，色谱柱Cromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）(上海希维仪器有限公司)；十万分之一分析天平( 梅特勒-托利多仪器有限公司) ; T500型电子天平( 常熟市双杰测试仪器厂) ;；KQ-100DE 型数控超声波清洗器 （昆山舒美超声仪器有限公司）。
1.2材料香丹葡萄糖注射液（市售）；甲醇、乙腈( 色谱纯，Fisher公司) ; 冰醋酸( 分析纯，天津市富宇精细化工有限公司) ;纯化水,实验室自制，丹参素钠（批号20100608-3，复旦大学药学院天然药物化学教研室提供，供含量测定用）。
2、方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Alltech ODS（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：溶剂A:1%冰醋酸溶液和B:0.8%冰醋酸的甲醇溶液线性梯度洗脱：0分钟A:B=90:10，55分钟A:B=0:100。流速：1.0mL·min-1；检测波长：281nm；柱温：30℃，进样量：20μL。灵敏度0.01AUF。理论塔板数以丹参素峰计算应不低于2500。
2.2 参照物溶液的制备
精密称取丹参素钠对照品适量，用水溶解稀释制成每1mL含丹参素50ug的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取香丹葡萄糖注射液2ml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.4 测定方法
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
2.5 方法学考察
2.5.1 精密度试验取供试品溶液，连续进样6次，测定各色谱峰的保留时间
和峰面积，以丹参素为参照峰，计算主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果表明供试品中各共有峰相对保留时间的RSD在0.11％～1.23％，相对峰面积的RSD在1.06%~2.18%，表明仪器精密度良好。
2.5.2 重复性试验取同一批香丹葡萄糖注射液6份，按“2.3”中方法分别制备供试品溶液，测定各色谱峰的保留时间和峰面积，以丹参素为参照峰，计算主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果表明供试品中各共有峰相对保留时间的RSD在0.96％～1.68％之间，相对峰面积的RSD在1.29％～3.28％之间。说明该方法重复性良好，符合指纹图谱的检测要求。
2.5.3 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在制备后0、4、8、12、16、24h进样测定，记录色谱图。结果，供试品中各共有峰相对保留时间的RSD在0.29％～1.68％之间，相对峰面积的RSD在1.11％～2.93％之间，表明供试品溶液在24h内是稳定的。符合指纹图谱检测要求。
2.6样品测定取10 批香丹葡萄糖注射液，分别按供试品的制备方法处理测定，以丹参素的色谱峰为参照物峰，其相对保留时间为1 ，计算各共有峰的相对保留时间。标示出香丹葡萄糖注射液中的4 个共有峰，峰号及相对保留时间为：S（1），2（1.48+10%），3号（5.53+10%），4号（5.81+10%）。指纹图谱见图1。
2.7样品指纹图谱相似度评定取10批香丹葡萄糖注射液样品，按2. 3 项下方法制备供试品溶液，按2. 1 项下色谱条件，测定指纹图谱，以国家药典委员会发布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统( 2004 A版) 生成的对照指纹图谱作为参照，计算每个样品指纹图谱的相似度[3]，结果10批香丹葡萄糖注射液样品指纹图谱的相似度分别为0. 995 1. 000 0.9920.989 1. 0000.9930.9740.996 0. 999 0.997，此结果表明样品批次之间差异较小，质量较稳定。
3、讨论
3.1检测波长的选择丹参的水提取液成分较复杂[4]，其主要成分紫外吸收差异较大，参考2010版中国药典（一部）及文献[5,6]报道，采用HPLC-DAD对样品溶液进行200 ～ 400 nm全波长扫描，发现各色谱峰在281 nm处信号强，能满足有效指纹信息最大化原则，而且基线比较稳定，故选择281 nm为指纹图谱的检测波长。
3.2 流动相系统的选择分别以乙腈-1％冰醋酸、甲醇-1％冰醋酸、1％冰醋酸-0.8%冰醋酸的甲醇溶液等不同浓度、不同比例的流动相系统进行梯度洗脱试验，比较不同洗脱条件下的色谱图，选择分离效果好、峰形佳、峰数多、时间较短的最佳色谱条件，最终确定以1％冰醋酸-0.8%冰醋酸的甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱。
3.3 标准指纹图谱制定根据研究结果（图1），制定了香丹葡萄糖注射液中丹参的标准指纹图谱技术参数，峰号及相对保留时间：S（1），2（1.48+10%），3号（5.53+10%），4号（5.81+10%）。非共有峰面积不得大于总峰面积的5%。该方法准确，重复性好，可用于香丹葡萄糖注射液的质量控制。
3.4丹参药材指纹图谱研究按国家药品监督管理局颁发的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》 [7]，研究了10批丹参药材的指纹图谱，并制定了丹参药材的标准指纹图谱（图2），用以考察其注射液制剂指纹图谱与药材指纹图谱之间的相关性。
3.5指纹图谱相似度评价通过指纹图谱相似度的计算，发现10批样品的相似度较高，均具有相同的色谱特征峰，并且各色谱特征峰的保留时间稳定，此结果表明本试验所建立的HPLC指纹图谱具有一定的稳定性和可控性。
参考文献
[1] 刘建红,张秀云.香丹注射液的临床应用[J]. 西北药学杂志. 2008,23(4):253-254
[2] 杨颂,刘文,王群,司娜,陈龙富.中药指纹图谱的研究进展[J]. 贵阳中医学院学报. 2012,34(4):21-24
[3] 关洪月,李林,刘晓,殷放宙,蔡宝昌.中药指纹图谱相似度计算方法探析[J]. 中国实验方剂学杂志. 2011,17(18):292-297
[4] 周晓希，孔羽，魏宇昆，等. ＲP-HPLC-DAD 同时测定丹参及丹参片中6种水溶性成分的含量［J］．中药材，2014，37( 2) :337-339.
[5]国家药典委员会. 中华人民共和国药典［S］．一部. 北京: 中国医药科技出版社，2010:70-71
［6］陈天玲,毕昌琼等，贵州松桃产丹参水溶性成分指纹图谱及多指标成分同时定量研究［J］．中药材，2015，38（3）：536-539
［7］国家药品监督管理局 中药指纹图谱研究的技术要求（暂行）[J] 中国药品标准,2000,4:3-8.
论文作者:姚静 李学林
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年8月
论文发表时间:2016/10/26
标签：图谱论文; 指纹论文; 丹参论文; 注射液论文; 葡萄糖论文; 溶液论文; 色谱论文; 《中国医院药学杂志》2016年8月论文;