新疆库车县第二人民医院检验科 842000
摘要：目的 探讨结核患者痰结核杆菌检验的方法。方法 采用回顾分析法对比2015年4月-2017年4月我院传染科收治的90例肺结核患者的晨痰及24h痰液的3种不同检测手段（直接涂片法、培养法、lamp法）的检出效果。结果 3种方法的24h痰液检出率高于晨痰检出率；涂片法和培养法两种痰液检测结果无统计学差异（P>0.05），与lamp法检测结果有统计学意义（P<0.05）。结论 lamp检测手段快速方便，检出率高，值得推广使用。
关键词：结核；痰结核杆菌检验；方法
引言
结核病是一种强传染性疾病，严重威胁人类健康，如不能及时诊断治疗，原发灶易向肾脏、肝脏转移，使病情加重和复杂，增加治疗难度。近年来此病发病率和患病率一直上升，传统以胸部X线检查能确定诊断，但部分患者影像学特征并不明显，PPD检验易出现假阴性[1]。如何通过有效的检查方法诊断结核病有重要意义，我科对结核患者的痰液采用直接涂片法、环介导等温扩增法（lamp）、培养法三种方法进行检验，对比分析其检查结果，报道如下。
1 资料和方法
1.1临床资料
选择2015年4月-2017年4月我院传染科收治的90例肺结核患者，回顾病史并按照检查方法随机分成三组，其中男52例，女38例，平均年龄（32.1±6.8）岁，涂片组（30例），PCR组（30例），培养组（30例），所有患者在入院时及住院后均摄胸片，有不同程度的低热、盗汗、乏力表现，均已通过病理报告确诊。3组患者的性别年龄无统计学差异（P>0.05）。
1.2方法
此次研究采用回顾性分析。一次性痰杯留取患者晨痰，24 h痰液用洁净的玻璃培养皿盛装送检。
1.2.1直接涂片抗酸染色法
24 h痰液高压灭菌后，离心沉淀，取其中干酪样或脓性部分，浓缩集菌法厚涂片，千燥，抗酸染色，显微镜下观察，在10一20个视野或连续10一20min观察，没有抗酸杆菌为（一），1一2条抗酸杆菌为（+），根据结核杆菌数量定为（+）—（+++）。试剂为抗酸染色液（珠海贝索生物技术有限公司）。
1.2.2培养法
取晨痰和24h痰液中干酪样或脓性部分近2 mL，置于消化管内，使用4.0 %的NaOH溶液2-4ml碱处理，使用涡旋振动器振动搅匀，静置15分钟，使用罗氏培养基接种培养，每个标本接种两管，37℃下培养4一8周，开始培养第3天和每个星期天观察记录结果[2]。试剂：酸性罗氏培养管（珠海贝索生物技术有限公司）。
1.2.3（lamp）
取60μL晨痰、24h痰液标本中的干酪样或脓性部分，置于加热管中，保持90 ℃加热5 min，再将其与吸附剂混匀，取30μL于反应管中，在67 ℃反应槽中放置40 min 后，加温到80 ℃5 min，再降低到67 ℃，将反应管拿出后放在荧光槽中，在荧光灯照射下与阳性阴性管对照比色。
1.3观察指标
对三种检验结果的差异性对比分析。
1.4统计学处理
数据采用SPSS17.0进行处理，检出率采用x Z 检验，认为p<0.05时差异有统计学意义。
2 结果
本次研究中，数据结果见表1，晨痰检测中，涂片法和培养法无统计学差异（p>0.05），涂片法和培养法分别与lamp法对比，差异有统计学意义（P<0.05）；24小时痰液检测中，晨痰和培养法无统计学差异（p>0.05），涂片法和培养法分别与lamp法对比，差异有统计学意义（P<0.05）。晨痰阳性率和24小时痰液阳性率对比，3种方法均有统计学差异（P<0.05）。
3讨论
结核病传染性强，对人类健康威胁大，在疾病早期，患者临床症状轻，缺乏典型的临床体征，胸片检查易出现假阴性的情况，造成疾病误诊漏诊，耽误治疗时机。而治疗不及时，可使肺结核向肾脏、肝脏等其他部位转移，漫长的病程使病情加重和复杂，引起器官的相应功能障碍，增加治疗难度。在国家卫生部门的介入下此病的治疗效果大有改善，但近年来，其发病率和患病率逐渐上升，临床表现多样，肺结核体征不明显，胸片检出率降低，且随着患者治疗次数增加结核杆菌耐药性发生率增加，对患者的诊断和治疗十分不利[3]。结核病的检查高度强调敏感度、特异度，且快捷方便、费用低，痰菌转阴率是诊断治疗和判断预后此病的重要措施和参考依据，具有高特异度、高敏感度、低廉、方便快捷的优点，临床上可以采用痰培养、直接涂片、（lamp）三种方法进行检验。但是痰涂片以及痰培养等检查方法阳性率低、灵敏度低，受到干扰因素多，相关报道显示在2004年痰涂片阳性检查率仅为40%-50%，涂片检菌阳性检出率为19.9%一3 5%。
痰液结核杆菌培养法是结核病病原学诊断的“金标准”，检出率虽与直接涂片法相近，且弱于PCR 法，但其需要进行菌型鉴定和药敏试验，能够鉴定菌型，发现耐药菌株，检测药物效果，在临床治疗过程中，其指导用药和制定治疗方案的作用非其他两种方法能够取代，但其耗时长，需要特殊设备。对于培养法，其简单快速、成本低廉，但是敏感性差，检查结果受痰中细菌数量、人为干扰因素影响。环介导等温扩增技术检测简单方便快速，准确率高，特异性好，排除了“气溶胶”的干扰，不用开盖就能够判读检测结果，有效防止了交叉污染，可以保护试验人员和环境的安全。
2 4 h痰液浓缩集菌法与晨痰检查结果对比发现前者检出率更高，且差异有统计学意义，但会增加传染的危险性。所以，必须要对标本先进行灭菌处理，确保检验人员的安全。本次研究中，涂片法晨痰检出率为23.3%，24h检出率为30%；培养法晨痰检出率为23.3%，24h检出率为33.3%；lamp法晨痰检出率为36.7%，24h检出率为50%。
临床中还可以通过胸膜活检及纤支镜等方法辅助检查，但是这些属于有创检查手段，检出率也不及环介导等温扩增技术，且费用高。结核杆菌可通过血液传播和淋巴传播，因此也可以使用外周血清结合P C R检测技术检测结核杆菌。
综上所诉，lamp法可以提高检出率，检测方便快速，值得推广使用。
参考文献：
[1]薛晓，周林，成诗明.结核分枝杆菌和艾滋病病毒双重感染患者治疗依从性检测方法及影响因素[J].中国防痨杂志，2011，6（6）：103-104.
[2]周玉娟，王飞.189例患者分泌物三种结核杆菌检测方法的对比分析[J].湖北中医杂志，2011，3（4）：10-11.
[3]樊丽娜.120例肺结核患者的痰涂片检测及结核杆菌耐药性分析[J].检验医学与临床，2012，9（14）：41-42.
论文作者:司万军
论文发表刊物:《健康世界》2017年第10期
论文发表时间:2017/7/31
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