谢伟1 陈亚军2 周乐清1 张静3
（1韶关市韶钢医院 512122）
（2韶关市妇幼保健院 512026）
（3韶关市粤北第二人民医院 512026）
【摘要】目的 检测分析韶关地区乙型肝炎（下称乙肝）患者乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布及其与型别、HBV血清标志物和HBV DNA定量值的关系。方法 用聚合酶链反应（PCR）技术和反向点杂交技术相结合的基因及基因突变检测技术检测3 种HBV 基因型，ELISA法检测血清HBV标志物（两对半），荧光定量- 聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测血清HBV DNA 定量值，并对结果进行分析。结果 韶关地区206例乙肝患者HBV基因型分布：C型为主69.42%（143/206）、B型11.17%（23/206）、D型7.28%（15/206）、B+C混合型5.83%（12/206）、C+D混合型5.34%（11/206）、B+D混合型0.97%（2/206）。基因型男、女性别检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。基因型C与其它各基因型检出率比较差异有统计学意义（P＜0.01）。各基因型阳性组血清平均HBVDNA定量值大于1×106（copy/ml），各基因型阳性组与基因型阴性组血清平均HBVDNA定量值比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 韶关地区乙肝患者HBV基因型分布以C型为主。基因型阳性检出率从高到低依次为C、B、D、混合型（B+C型、C+D型、B+D型）。HBV基因型检出率与性别关系不明显，与HBV血清标志物和HBVDNA定量值有一定关系。
【关键词】乙型肝炎病毒 基因型 核酸杂交 聚合酶链反应 血清标志物
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）36-0126-02
乙型肝炎（下称乙肝）是严重危害人群身体健康的常见传染病，它是由乙型肝炎病毒（HBV）引起。HBV基因型检测对HBV的基础研究、分子流行病学调查、临床诊治和病情预后评估及预防有十分重要的意义。HBV基因型巳成为21 世纪HBV研究热点。本文用聚合酶链反应（PCR）技术和反向点杂交技术相结合的基因及基因突变检测技术，首次对韶关地区206 例乙型肝炎患者HBV基因分型，现将结果分析报道如下。
1 材料与方法
l.l 材料
l.l.l 血清标本来源 三家医院门诊和住院部送检的乙肝患者空腹血清，共计206例，其中男性121例、女性85例，年龄2-56岁，平均年龄23.5岁。检测HBV基因型血清标本-20℃冰箱存放,集中检测.
l.l.2 仪器 芬兰-雷勃 MK3 型酶标仪、洗板机、珠海黑马480基因扩增仪、TGL-16H高速离心机，上海DK-8D型电热恒温水槽，江苏MM-1型微量振荡器，美国BIO-RAD CFX96型荧光定量PCR扩增仪。严格按照仪器说明书操作。
l.l.3 试剂 乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒，深圳亚能生物技术有限公司生产，可分析基因型B-D型3种，HBV血清标志物“两对半”试剂盒（ELISA法），中山生物工程有限公司生产。HBV DNA荧光定量试剂盒，中山大学达安基因股份有限公司生产。严格按照试剂盒说明书操作。
l.2 方法 PCR-RDB法分析HBV基因型主要操作。
l.2.l 血清标本HBV DNA的提取及扩增。
l.2.2 核酸杂交及显色。
l.2.3 显色结果判定，显蓝色结果阳性。
l.3 统计学方法 组间率比较χ2 检验，均值比较t检验。
2 结果
2.l 206例乙肝患者HBV基因分型结果 男性、女性共检出基因C型143例、基因B型23例、基因D型15例、基因混合型25例（基因B+C型12例、基因C+D型11例、基因B+D型2例）。每种基因型男、女性别检出率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。基因型C与其它基因型比较差异有统计学意义（P＜0.01）。206例乙肝患者HBV基因型在不同性别检出率见表1。
表1 206例HBV基因型在不同性别检出率n(%)
*与基因型阴性组比较P＜0.01
2.2 206例乙肝患者HBV基因分型结果在HBV血清标志物HBeAg阳性模式组有基因C型135例、基因B型23例、基因D型14例、检出混合型基因25例，(其中B+C型12例、C+D型11例、B+D型2例)。在HBeAg阴性模式组有基因C型8例、基因D型1例、基因型在HBeAg阳性与HBeAg阴性组检出率比较差异有统计学意义(P＜0.01)。206例乙肝患者HBV基因型与HBV血清标志物检出率见表2。
2.3 HBV基因型C、B、D基因混合型与基因型阴性组的HBV DNA平均定量值比较差异有统计学意义(P＜0.01)。各基因型阳性组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)HBV基因型与HBV DNA定量值检测结果见表3。
3 讨论
根据全基因测序规定HBVDNA核苷酸序列异质性≥8%为一种基因型或根据S基因核苷酸异质性≥4%分型。1988年Okamoto、1994年Norder、2002年ArauZ-RuiZ等学者先后发现HBVDNA基因型A、B、C、D、E、F、G、H8种和混合基因型[1]。运用PCR-RDB方法能分析基因型B-D和基因混合型。韶关地区206例乙肝患者HBV基因分型结果:C型69.42%、B型11.17%、D型7.28%、混合型(B+C、C+D、B+D)占12.13%。基因型C与各基因型检出率比较差异有统计学意义。
国内对HBV基因型检出率报道不一，深圳地区基因型分布C型68.0%、B型10.0%、D型6.0%、F型2%、混合型B+C/B+C+D8%[2]；兰州地区C型67.0%、B型12.5%、混合型B+C18.2%、A+D型2.3%[3]；廉江巿C型73.2%、B型26.1%[4]；温州地区C型66.46%、B型20.49%、D型1.97%、混合型B+C/C+B11.08%[5]；浙江仙居地区C型80.2%、B型14.4%[6]。这些地巿报道在主要的单纯C、B、D分型比例中以基因C型为主，基因型检出率高低顺序是C＞B＞D。青岛巿报道基因型C型1.5%、B型89.7%、A型8.82%[7]；湖南省报道基因型检出率B型3.5%、C型26.5%[8]。这些地区以基因型B型为主，韶关地区基因型C型为主要检出型，同时检出3种混合型(B+C、C+D、B+D)，其种类多，检出率偏高这一特点提示，慢性乙肝漫长的病毒感染过程中，是病毒群体中不同毒株的变迁或者重叠感染不同的基因型HBV所致。
基因型分布存在一定地理区域性，文献报道[1]在中国以基因型C和B为主，北方以C型为主，南方以B型为主，D型仅见于少数民族的地理分布特点。从韶关地区和多个南方城巿基因型分布以C型为主调查报道证明不完全支持南方以B型为主基因型的地理分布状况。韶关地区的基因型分布具有北方流行特点、又有少数民族的基因型D和B+D、C+D混合型，值得研究。
基因型C在HBV血清标志物HBeAg阳性、HBeAg阴性中检出率分别是68.52%和88.89%，与范金水等检测长春等8个城市HBsAg阳性、HBsAg阴性基因C为主，分别是62.8%和61.5%的报道基本相同。韶关地区HBeAg(+)的基因型分析见HBV基因型C、B、D外，混合基因型B+C、C+D、B+D均见，而HBeAg(-)的基因型统计中仅见基因型C和D，未见其它型，有可能HBeAg(-)的基因型统计样本少有关。近年国内外对基因型C、B研究较多，在HBeAg阴性病例基因C型HBV前C区/基本C基因启动子变异发生率高于B型，变异后毒株的DNA水平明显高于非变异株。
基因型阳性者在HBeAg阳性组检出率高，而含有HBeAg阳性标志物模式组HBV DNA定量值明显高于其它模式组。HBV基因型阳性血清平均HBV DVA定量值1×106copy/ml以上，以混合基因型HBV DVA定量值增多明显。基因型阳性与基因型阴性血清标本HBV DNA定量值比较差异有统计学意义(P＜0.01)。HBV基因分型对乙肝患者分子流行病学调查有重要意义。
参考文献
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论文作者:谢伟1,陈亚军2,周乐清1,张静3
论文发表刊物:《医药前沿》2013年第36期供稿
论文发表时间:2014-3-12
标签：基因型论文; 基因论文; 检出论文; 血清论文; 乙型肝炎论文; 阳性论文; 韶关论文; 《医药前沿》2013年第36期供稿论文;