1哈尔滨市红十字中心医院 黑龙江哈尔滨 150000；2黑龙江省医院 黑龙江哈尔滨 150000
【摘 要】目的：分析流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床意义。方法：采用流式细胞术对急性白血病细胞进行免疫分型结合传统细胞形态学检查，对2种检测结果进行分析。结果：1、临床初诊52例白血病患者中，FAB分型AML27例，ALL25例。流式细胞术检出单纯型AML19例，伴淋系6例；单纯型ALL14例，伴髓系10例；双表型2例，未分化型1例。2、AML 形态学分型与免疫分型完全符合率66.7%、部分符合率22.2 %；ALL 形态学分型与免疫分型完全符合率56 %，部分符合率40%。结论：利用流式细胞术，识别白血病细胞分化抗原（CD）系列的特异性荧光素标记的McAb鉴别膜、浆与核的抗原，对白血病的诊断及分型具有重要作用，是FAB分型的重要补充，两者结合可提高诊断准确率。
【关键词】流式细胞术（FCM）；急性白血病；免疫分型
Reserch on the clinical significance of flow sytometry in the classification of acute leukemia
1Wang Hongyan，2Xu Xinglu
（1Ha Erbinred cross center hospital，Hei Longjiang，Ha Erbin150000；2Hei Longjiang Provincial Hospital，Hei Longjiang，Ha Erbin150000）
【Abstract】 Objective：Analyze the clinical significance of flow cytometry in the classification of acute leukemia.Methods：2 kinds of detection results were analyzed by using flow cytometry to detect the expression of ALL cells in combination with traditional cell morphology.Results：1、52 cases diagnosed leukemia patients，among these，FAB typing AML27 cases，ALL25cases，detect by flow cytometry，AML19 cases，Ly +AML6 cases；ALL14 cases，My +ALL10 cases；HAL2 cases，UAL1 cases. 2、In AML the accordance rate and part accordance rate of the two phenotypes was 66 .7% and 22 .2%.In ALL the accordance rate was and part accordance rate was 56% and 40%.Conclusion：Using flow cytometry，identification of a series of leukemia cell differentiation antigen（CD）- specific fluorescein labeled McAb to identify the membrane，cytoplasm and nuclear antigen，plays an important role in leukemia diagnosis and typing，and also is an important supplement of FAB typing，the combination can improve the accuracy of diagnosis.
Key words：flow cytometry；acte leukemia；immunophenotype
白血病是严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一，是造血干细胞的恶性克隆性疾病，因白血病细胞自我更新增强、增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，而停滞在细胞发育不同阶段，白血病细胞大量增殖积聚，致使造血功能不能正常进行[ 1]。白血病的正确分型在白血病的诊断，治疗，预后及疗效观察均有十分重要意义。目前，主要诊断白血病主要依据国际标准的FAB形态学分类法和流式细胞术（FCM）免疫学分类。流式细胞术，基于血液细胞抗原的表达与细胞系列及其分化程度相关的特异性，从免疫学角度对白血病进行快速准确分型，为进一步针对性的治疗提供依据。文章将2015年6月到2016年6月期间在本院接受治疗的52例白血病患者作为研究对象，现报道内容如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
将2015年6月到2016年6月期间在本院接受治疗的52例白血病患者作为研究对象。患者中男性28例，女性24例，患者年龄在5岁到76岁之间，年龄均数为（42.31±0.27）岁。
1.2仪器与试剂
欧琳巴斯显微镜BX41，流式细胞仪所用各类试剂均为BD公司提供，BD FACSCalibur 全自动多色分析流式细胞仪系统，细胞染液采用BOSO的瑞氏-吉姆萨染色液。
1.3标本采集方法
基于无菌操作要求抽取200μl骨髓液，制作而成形态学检查，抽取2ml骨髓液用EDTA-K2或者肝素抗凝，实施免疫分型，随抽随检。
1.4 形态学方法
瑞氏-吉姆萨染色，融合POX、PAS、NAKP以及铁染色等实施组合染色，并在显微镜的辅助下，观察细胞形态，实施白血病FAB分型。
1.5 流式细胞术
调节标本白细胞浓度为5×109/L，编号试管1-8，每管为50μl。按照表1，采用单克隆抗体进行四色（FITC，PE，PerCP，APC）直接荧光标记抗体试剂，混匀后避光孵育20分钟。分别加入溶血素对红细胞进行溶解，避光溶血时间达到5-10分钟。开机流式细胞仪（FCM）开机预热20分钟后，用标准荧光微球进行光路校正，保证仪器荧光补偿度的规范性。荧光信号变异系数控制在2%以内，采用四色荧光标记，实施同一种类型的阴性对照分析，侧向散光和CD45，需要对散点图上的圈定细胞群进行计数与分析。根据抗原检测的结果，调节明确白细胞浓度标本，融入到CD45中，基于试剂盒的标准进行分析。
1.6结果判定
1.6.1细胞形态学分类
按照FAB急性白血病的分型系统，原始细胞占全部骨髓有核细胞（ANC）≥30%为AL的诊断标准[2]。
1.6.2 免疫学分型
参照欧洲急性白血病免疫分型组（EGIL）的积分标准[3]，免疫分型诊断A LL 又同时存在髓系抗原表达阳性但又不够急性混合细胞白血病诊断标准，视为伴髓系抗原表达的ALL（My +A LL），AUL 即不表达任何和髓系、淋系相关的抗原[4]。
2. 结果
2.1 FAB分型
52例白血病患者中初诊AML27例，其中M2亚型发病最多10例占37%，其次是M3有8例占29.6%，M0，M7未统计到，M1最少1例，M4，M5分别是4例和3例，还有1例不能分型；ALL25例，L2占却大多是23例占ALL发病率的92%，L3统计2例占8%，L1未见，结果如表2。
2.2 免疫学分型
52例白血病患者中，初诊AML的患者，经FCM免疫学分型得到：单纯型AML19例，伴淋系6例，B +髓系1例，未分化型1例；初诊ALL的患者，经FCM分型得到：单纯型ALL14例，其中T型2例，B型12例，伴髓系ALL10例，双表型检出B +髓系1例。结果如表2。
2.3免疫分型与形态学分型的关系
FAM分型的27例AML，形态学分型与免疫分型完全符合率66.7%、部分符合率22.2 %，其中M3型，形态学分型与免疫学分型结果完一致；25例ALL 形态学分型与免疫分型完全符合率56 %，部分符合率40%。
3. 讨论
随着免疫学、细胞遗传学的快速发展，对血液系统肿瘤的分类与诊断提出了更高的要求。及时检查、明确分型，能够通过针对性的治疗方式，避免急性白血病患者疾病的进一步发展[ 5]。
骨髓图片，进行细胞形态学分型，是诊断AL的主要依据和必做检查。多数骨髓象有核细胞显著增生，以原始细胞为主，而较成熟中间细胞缺如，并残留少量中间细胞。在各类白血病的临床诊断技术中，形态学分型可谓是应用范围较高的诊断方式，但是基于大量的实践研究能够发现，形态学分型方式具有一定的局限性特点，在很大程度上需要依赖检验者的个人经验，主观性特点比较突出。同时，由于白血病细胞的异质性与多态性，判断率不够理想[6]。
白血病免疫分型主要以流式细胞术为主，能够通过多种荧光标记的方式实施细胞标记，识别白血病细胞分化抗原（CD）系列的特异性荧光素标记的McAb鉴别膜、浆与核的抗原，对白血病的诊断及分型具有重要作用，并有效提升细胞检测的客观性，增强细胞检验的准确率[7、8]。
实验结果显示，27例AML，形态学分型与免疫分型完全符合率66.7%、部分符合率22.2 %，符合率达到了88.9%，其中M3型，形态学分型与免疫学分型结果完一致；25例ALL，形态学分型与免疫分型完全符合率56 %，部分符合率40%，符合率达到了96%，仅1例不符合。
在骨髓图片，不能进行FAB分型的AML，利用FCM，进行免疫分型为髓系伴淋系型，弥补了FAM分型的不足。同时发现双表型B+髓的患者两例，一例为AML中的M2，另一例为ALL中的L2，成为是FAB分型的重要补充。在FCM 免疫学分型中发现，不能分化的患者1例，在FAM分型为M2，可见两种分型方法对白血病的诊断及分型互为补充。
综上所述，对急性白血病患者进行骨髓涂片，进行FAB分型和利用流式细胞术，进行免疫学分型免疫分型中，两者结合可提高诊断准确率，为急性白血病患者进一步的临床治疗活动奠定良好的基础。
参考文献：
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论文作者:王红艳1,许兴路2
论文发表刊物:《航空军医》2016年第21期
论文发表时间:2016/11/22
标签：细胞论文; 白血病论文; 免疫论文; 学分论文; 流式论文; 白血论文; 抗原论文; 《航空军医》2016年第21期论文;