张承武[1]2003年在《人源性神经营养素-6的基因克隆表达和功能鉴定》文中进行了进一步梳理神经营养素(neurotrophin，NT)是一类由神经组织或其靶组织产生的小分子蛋白质。自从20世纪50年代初发现神经生长因子以来，人们已经先后发现了神经生长因子(nerve growth factor，NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)、神经营养素-3(neurotrophin-3，NT-3)、神经营养素-4/5(neurotrophin-4/5，NT-4/5)、神经营养素-6(neurotrophin-6，NT-6)和神经营养素-7(neurotrophin-7，NT-7)共六种NT家族成员。由于它们在促进神经元的发生、分化、存活、对抗神经元的凋亡、保护并修复发生病变或受损伤的神经元等诸多方面均具有重要作用，所以，有关NT的研究一直受到神经科学界的高度重视，是神经生物学领域的热点研究课题。目前，国内外关于NT的研究主要集中在NGF、BDNF、NT-3和NT-4/5，而有关NT-6的研究报道较少；而且，迄今为止尚未见任何有关人源性NT-6的报道。因此，我们拟克隆人源性NT-6的基因，并对NT-6结构和功能加以探讨。 本研究由流产胎儿脑组织获取总RNA，采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcript-polymerase chain reaction，RT-PCR)的方法扩增获取人的NT-6基因；并将其重组到载体质粒pBK-CMV中，构建NT-6基因表达载体，在原核细胞进行了表达。在此基础上，我们将NT-人源性神经营养素一6的基因克隆表达和功能鉴定—中文摘要6成熟肤编码区的基因进行亚克隆，构建了含有该基因的融合表达载体pGEX‘NT一6，诱导表达后获得纯化的NT一6成熟肤片段。利用离体培养的乳鼠海马神经元和大鼠面运动神经元逆行溃变的动物模型，对NT一6成熟肤片段的功能在细胞水平及整体动物水平进行了研究。实验结果表明，我们成功地克隆了人源性NT一6基因;氨基酸序列比较和叁维结构分析显示，人源性NT一6具有该家族蛋白结构的固有特性。含有NT一6成熟肤片段基因的融合表达载体，在异丙基一p一D一硫代半乳糖普(isopropylp一D一thiogalaetoside，IPTG)诱导的条件下，表达了NT一6成熟肤片段。经分离纯化的NT一6成熟肤，可以促进离体培养海马细胞的存活，对抗由于面神经损伤引起的面运动神经元的逆行溃变。该项研究不仅有助于拓展人们对NT这一类重要小分子蛋白质的神经生物学特性的认识，同时也为探讨临床上退行性神经疾病及神经损伤的防治措施提供了重要的理论依据。
张承武, 蔡青松, 李自成, 翟朝阳, 郑煜[2]2005年在《人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化》文中指出为了得到人源性神经营养素-6(N eurotroph in-6,NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Po lym erase cha in reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX 1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy l-βD-th ioga lactos ide,IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM 109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化。结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX 1-NT-6;与带有pGEX 1-λT质粒的细菌相对照,pGEX 1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM 109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD。获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的NT-6成熟肽。本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础。
参考文献：
[1]. 人源性神经营养素-6的基因克隆表达和功能鉴定[D]. 张承武. 四川大学. 2003
[2]. 人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化[J]. 张承武, 蔡青松, 李自成, 翟朝阳, 郑煜. 生物医学工程学杂志. 2005