【摘要】人乳头瘤病毒是一种嗜人体皮肤和黏膜组织细胞的DNA病毒，可广泛感染人类皮肤及生殖道、呼吸道上皮组织，它与人类多种良恶性肿瘤密切相关。目前已知HPA有近200多种型别，约40种型别与人类常见生殖道疾病相关。其中，高危型HPA被认为与宫颈癌及其癌前病变相关，低危型HPA与生殖道湿疣等良性病变有关。本实验采用第二代杂交捕获试验（HC-Ⅱ）检测宫颈脱落细胞的高危型和低危型HPA，对临床妇科门诊1790例就诊者进行筛查，分析不同临床诊断疾病队列中HPA的检出率、病毒载量高低和年龄分布状况，为预防和控制宫颈癌的发生发展提供可靠的依据。
【关键词】妇科临床；人乳头瘤病毒
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）16-0037-01
一、引言：
为了对妇科临床病例人乳头状瘤病毒感染情况进行分析，文章采用第二代杂交捕获法（HC-Ⅱ）对1790份妇科门诊收集的宫颈组织样本进行HPA的初筛检测，应用SPSS13.0Ｓ软件进行数据分析，HPA阳性率的组间比较采用χ２检验。其结果，1790份标本中检测出708份HPA阳性标本，阳性率４０．０％。在临床诊断为病毒性疣／尖锐湿疣患者中HPA阳性率为45.6%（377／826），与健康查体组的阳性率间差异有统计学意义（Ｐ＜0.01）。在临床诊断为病毒性疣／尖锐湿疣组中HPA高载量的患者例数与该组患者总例数之比为18.2％（150／826），与健康查体组的ＨＰＶ高载量间差异有统计学意义（Ｐ＝0.006）。
（一）材料
选择2017年６月至2018年６月某医院妇科门诊就诊的1790例患者进行HPA的检测。年龄最小15岁，最大70岁，临床诊断分别为尖锐湿疣、病毒性疣、梅毒、阴道炎、子宫颈炎和健康查体。
（二）方法
首先，仪器与试剂。采用美国Ｄｉｇｅｎｅ公司开发生产的ＨＣ－Ⅱ试剂盒，基于分子杂交和化学发光信号放大的原理，无需基因扩增，属于线性级数放大。该技术将靶DNA变性为单链后，与RNA探针杂交形成DNA－RNA杂交体，再被抗DNA－RNA杂交体抗体的微孔板捕获，再与二抗结合，通过酶化学发光仪测定信号强度。标本采集。采样在非月经期进行，采样前３ｄ内无阴道用药史，采样前１ｄ禁性生活。受检妇女由医生用美国Ｄｉｇｅｎｅ公司提供的取样刷缓缓插入阴道，遇到阻力后（约6ｃｍ）顺时针旋转刷子3～5圈，刷子取出后放入贴有标签的试管中，瓶内装有保存液，送到实验室放４℃冰箱内保存。标本室温下可保存２周，2～8℃可保存３周，－２０℃可保存３个月或更长时间。检测方法。第一，裂解：配置裂解液，加５滴指示剂于裂解液中混匀，加入样本管（标准样本：阴阳性质控）；加入细胞保存液（患者标本），振荡，水浴65℃45ｍｉｎ。目的为标本双链ＤＮＡ变性后为单链。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆第二，杂交：配置探针（RNA），RNA探针加探针稀释液，在干净的试管或ＥＰ管内振荡，混匀。取７５μｌ已水浴的对照样本（阴性、阳性质控ＤＮＡ）振荡，放置于微孔板内加２５μｌ配好的探针稀释液，于20～25℃孵化１０ｍｉｎ，贴上封面胶膜，于振荡器上振荡，１１００转／ｍｉｎ，３ｍｉｎ，置于加热器内６５℃孵化６０ｍｉｎ。变为ＤＮＡ／ＲＮＡ杂交体。第三，捕获：将微孔板内反应物转移到捕获板上，９６孔捕获板每一孔壁上已附有第一抗体，第一抗体将ＤＮＡ固定在酶标板上，贴上封面胶膜，振荡，１１００转／ｍｉｎ，２０～２５℃，６０ｍｉｎ，丢弃反应后的废液，继续反应。配置冲洗液（冲洗液＋蒸馏水）。第四，抗原抗体反应：加７５μｌ反应液１至捕获孔，２０～２５℃孵化３０～４５ｍｉｎ，丢弃反应后的废液，洗板６次。第五，信号放大：加７５μｌ反应液２于捕获孔内，置于黑暗处，２０～２５℃孵化１５ｍｉｎ，直接放入ＤＭＬ２０００光度计中，判读放大信号。另外，结果判断标准。标本检测结果以光量读数与标准阳性测定值比值（ＲＬＵ／ＰＣ）作为报告数值，当ＲＬＵ／ＰＣ≥１时，ＨＰＶ阳性，反之则为阴性，ＲＬＵ／ＰＣ数值越高，表示标本所含病毒载量越高。根据ＨＲ－ＨＰＶ检测值将病毒载量分为低、中、高３组，低病毒载量组１≤ＲＬＵ／ＰＣ≤９，中病毒载量组９＜ＲＬＵ／ＰＣ≤９９，高病毒载量组ＲＬＵ／ＰＣ＞９９。最后，统计学处理。
二、结果
（一）不同临床诊断疾病组中ＨＰＶ检出率
在不同的临床诊断疾病组中，应用ＨＣ－Ⅱ法检测出的HPA阳性例数及阳性率如表１所示，临床诊断为病毒性疣／尖锐湿疣患者中HPA阳性率为45.6％（377／826），与健康查体组的阳性率间差异有统计学意义（Ｐ＜0.01）。临床诊断为梅毒／宫颈炎／阴道炎患者ＨＰＶ阳性检出率与健康查体组之间差异无统计学意义[1]。
（二）ＨＰＶ载量在不同临床诊断疾病中的变化
在临床诊断为病毒性疣／尖锐湿疣组中HPA高载量的患者例数与该组患者总例数之比为18.2％（150／826），与健康查体组的ＨＰＶ高载量之间差异有统计学意义（Ｐ＝0.006）。
病毒性疣和尖锐湿疣是由HPA感染人体所引起的表皮肿瘤样增生，是国家法定的８种性病之一，其病原体是人类乳头瘤病毒。随着分子生物学技术的发展，发现更多的HPA型别与病毒性疣和尖锐湿疣发生有关。HPA主要通过性接触传播，除可以导致病毒性疣和尖锐湿疣的发生，还可以引起宫颈上皮肉瘤和宫颈癌等疾病。在女性人群中，HPA感染率为２０％～４６％，本文检测结果健康查体组阳性率为３３．９％。
HPA感染在妇科门诊就诊者中是比较常见的，虽然HPA感染具有较强的自限性，大部分可以通过自身免疫系统将其逐步清除，但是，由于HPA是宫颈癌、癌前病变和尖锐湿疣等良恶性瘤的病原体，针对26-35岁年龄段尖锐湿疣等患者进行HPA筛查显得尤为重要，并建议给予适龄人群接种HPA疫苗。另外，近期文献报道，患尖锐湿疣的女性患者的心理负担普遍较重。
参考文献：
[1]刘敏，李东宁，孙健，等．外阴HPA相关疾病中ｐ５３，ｃｙ－ｃｌｉｎＤ１和ｋｉ６７蛋白表达及其与HPA感染的关系[J].中国皮肤性病学杂志，2017,26(12):1063-1064.
论文作者:孟晓青,齐立慧
论文发表刊物:《医师在线》2018年第16期
论文发表时间:2018/11/17
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