四川省眉山市仁寿县中医医院 620500
摘要：目的 通过微生物盲样考核，提高实验室病原微生物的检测能力和应对突发事件的能力。方法 对2011年-2015年国家及区级微生物盲样检测结果和实验室的内部质控进行回顾分析。结果 连续5年收到微生物盲样33份，检测结果合格率100%。结论 开展微生物盲样考核，能更好地提高微生物检验能力。
关键词：微生物盲样考核；检验结果；经验交流
提高卫生检验能力是保证检验结果及时和准确的前提，而上级业务主管部门组织的能力验证和内部质控考核是衡量和评价检验工作质量与水平的重要方式。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1样品 连续5年33份微生物考核盲样，其中2011年—2015年每年收到中国疾病预防控制中心营养与食品安全所以乳粉为基质的盲样1份，共计3份，每份样品中含有3种以下的未知菌。本单位内部控制考核盲样每年2份，共计14份。上级主管部门和本单位的样品用半固体保存管保存，每份样品含有1种未知菌。
1.1.2检验项目 食源性病原菌、肠道常见腹泻病原菌。
1.1.3检验依据 感染性腹泻诊断标准【1】、食品安全国家标准微生物学检验【2】、腹泻症候群监测技术方案。
1.1.4试剂 商品培养基由广东环凯试剂有限公司提供（均在有效期内使用）。自配培养基按GB4789中的方法配制。API系统生化鉴定编码条由梅里埃诊断产品（上海）有限公司提供。沙门菌诊断血清、志贺菌诊断血清均由宁波天润生物药业有限公司生产。沙门氏菌显色培养基、弧菌显色培养基、单增李斯特菌显色培养基、阪崎肠杆菌显色培养基均有郑州博赛生物技术股份有限公司提供。
1.2方法
1.2.1直接分离 将盲样（乳粉用无菌生理盐水稀释）直接接种各种选择性培养基：EMB、麦康凯、0157显色平板、改良麦康凯、孟加拉红平板、弧菌显色平板、TCBS、金黄色葡萄球菌显色平板、蜡样芽孢杆菌显色平板、MYP平板、单增李斯特氏菌显色平板、阪崎显色平板、CN平板、耶氏平板及嗜盐平板上，37℃培养18h-24h。因盲样量较少，因此，在接种上述培养基的同时，再接种一个TSA（胰蛋白胨大豆琼脂），以备查。
1.2.2增菌培养 将盲样分别接种营养肉汤、肠道菌增菌肉汤、MM（氯化镁孔雀绿增菌液）、SG（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）GN（革兰阴性杆菌增菌液）、碱性蛋白胨、SBG增菌、改良PBS冷增菌、APW增菌液中按相应实验条件进行增菌后，再分别转种到对应的选择性培养基中进行分离培养，同时接种相应的显色培养基。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆从各种分离平皿上挑取不同形态的菌落接种双糖（KIA）琼脂斜面上37℃培养18h观察结果，同时进行纯培养。
1.2.3镜检 挑取可疑菌落进行革兰染色镜检和直接在暗视野显微镜下观察细菌的运动情况。
1.2.4生化反应 取KIA上的培养物分别与沙门菌属、志贺菌属、O157H7大肠埃希菌及其致泻性大肠埃希氏菌菌属、霍乱弧菌诊断血清做凝集实验、确定细菌种类和菌型。取KIA上的培养物接种于糖、醇、氨基酸、水解酶、氧化酶、盐利用实验等生化培养基上，按各试验条件进行培养后观察结果。取可疑细菌接种API系统生化鉴定编码条。
2结果
2011年-2015年共收到考核盲样33份，其中中国疾病预防控制中心营养与食品安全所下发3份，共检出8种菌。本单位内部质控考核盲样14份，共检出14种菌。连续7年33份考核盲样的合格率为100%。33份考核盲样中通过生化反应、血清学、API系统生化编码鉴定条共检出沙门菌6株：沙显上呈紫色菌落，生理盐水不凝，A-F多价凝集，其中肠炎沙门菌2株，鼠伤寒沙门菌4株，均符合盲样考核结果，API编码为6704752。检出志贺氏菌8株：XLD上呈无色透明菌落，志贺菌多价凝集，其中宋内志贺菌4株，福氏志贺氏菌4株，均符合盲样考核结果，API编码为0104102。检出单增李斯特菌3株：单增显色培养基上呈浅蓝色的带晕轮很有特征，极易辨认【3】的菌落，鼠李糖+，G+短杆菌，SIM动力伞状生长，API编码为6510。检出阪崎肠杆菌5份：阪崎显色上呈黄色菌落，API编码为3305373。检出副溶血弧菌2份：弧菌显色培养基上呈蓝绿色，耐盐实验符合，有拉丝现象。检出金黄色葡萄球菌8份：金黄色葡萄球菌显色培养基上呈紫红色，菌落周围有晕环，血浆凝固酶实验+，G+球菌。检出侵袭性大肠埃希氏菌1份（OK多价2）；检出产毒性大肠大肠埃希氏菌1份（O78：K180（B））有3份未检出任何菌：所有培养基上均无菌生长，符合盲样考核结果。
3讨论
通过5年连续盲样考核有一下几点体会：
（1）增菌及分离培养基配制在盲样考核中至关重要，直接影响目的菌的分离，由于盲样中细菌未知，在检验中应按其要求充分考虑到各种增菌液及鉴别培养基，满足分离不同细菌的需要。
（2）充分利用现有的显色培养基和生化培养基的特性。
（3）在分离培养时，一定要将培养皿表面孵干（不含冷凝水），以便分离出单个菌落，避免菌落不纯。必须用纯的细菌培养物作鉴定。
（4）镜检在盲样检测中也起重要作用，通过直接镜检和染色镜检，可观察细菌的运动情况、形态及染色反应，初步断定盲样中存在几种类型的细菌，为下一步分离鉴定提供依据。
（5）生化试验、血清学试验在细菌学鉴定中起关键作用，试验中常遇到交叉凝集现象，因此一定要和生化反应与血清学试验结果结合起来判断才能得出正确结论。如变形杆菌与伤寒沙门菌易发生交叉凝集，变形杆菌在2h-4h快速分解尿素，而伤寒沙门菌不分解尿素。
（6）观察分离培养基上菌落所产生色素及拉丝等现象，对鉴定细菌也很重要，如阪崎肠杆菌产黄色色素，副溶血弧菌挑取菌落有口香糖质感、拉丝现象。
（7）阪崎肠杆菌和侵袭性大肠埃希氏菌同时长在阪崎显色培养基上都产生黄色素，只是阪崎肠杆菌是乳黄色，且菌落较大。而侵袭性大肠埃希氏菌是稍带绿色的乳黄色，且菌落较小。
（8）应做好培养基的质量控制。在做考核样的同时，用标准菌株做对照，用空白平板做阴性对照，以防污染菌介入，影响考核结果的正确性。
参考文献：
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[3] 巣国祥 徐勤 朱炳炎等 扬州市2002-2003食源性致病菌检测研究 中国卫生检验杂志2004，14（4）
论文作者:范勇
论文发表刊物:《健康世界》2016年第15期
论文发表时间:2016/9/5
标签：培养基论文; 显色论文; 菌落论文; 检出论文; 杆菌论文; 平板论文; 弧菌论文; 《健康世界》2016年第15期论文;