·论 著·
大鼠脑组织电导率及相关生化指标与死亡时间的关系
孙凯，郑哲，李永林，赵琳琳，莫耀南
（河南科技大学法医学院，河南 洛阳 471003）
摘 要： 目的 探究大鼠脑组织浸渍液电导率（electrical conductivity，EC）及其相关生化指标与死亡时间（postmortem interval，PMI）的关系，探讨应用EC推断PMI的机制。方法 将40只健康SD大鼠处死后保存于25℃左右的环境中，分别于死后0、1、2、3、4、5、6、7d提取全脑组织，制成匀浆浸渍液，测定脑组织浸渍液EC及其相关生化指标（钾离子、钠离子、氯离子、钙离子、无机磷、镁离子、尿酸、尿素氮及肌酐），并分析浸渍液EC、相关生化指标以及PMI三者之间的关系。结果 大鼠死后7d内脑组织EC随PMI的延长而逐渐增大，其浸渍液中尿酸、尿素氮、无机磷的含量随PMI的延长而逐渐升高。EC、尿酸、尿素氮、无机磷与PMI的相关性均较好（R2为0.95～0.99），且EC与尿酸、尿素氮及无机磷的含量变化呈线性相关（R2为0.97～0.99）。其他6种生化指标在大鼠死后7d内随PMI的变化不显著（P＞0.05）。结论 大鼠脑组织EC、尿素氮、尿酸及无机磷与PMI的相关性较好，联合多指标可以提高PMI推断的准确性。
关键词： 法医病理学；死亡时间；电导率；脑；生化指标；大鼠
死亡时间（postmortem interval，PMI）推断是法医病理学研究的难点问题，国内外法医学者对PMI的研究多集中于早期PMI的推断，对晚期PMI的推断缺乏既简单、精确又行之有效的方法[1-2]。由于尸体腐败受到自身与环境因素的影响，使得晚期PMI的推断变得极其复杂[3]。近年来，尽管越来越多的方法和技术已应用于PMI推断研究，但多数方法处于理论研究阶段。采用各种方法推断出的PMI也只是一个大致时间，误差较大。因此，寻找一种简便、快捷、经济的PMI推断方法是当前法医病理学的重要任务。
“对企业来说，发展需要资金，相比银行贷款，基金的借用手续更加简单，也无需任何抵押，”石柱县财政局谭文会副局长说，“根据《实施意见》规定，基金的主要使用方向要围绕乡村旅游、特色产业发展及其他能够为重点贫困户带来稳定资产性收益的项目进行。而其收益也分为固定收益和效益收益，其中，固定收益是指基金借用单位要以借用资金乘以同期银行贷款基准利率来分配给重点贫困户，而效益收益则是基金借用单位要按照借用资金产生效益的40%分配给重点贫困户，另有10%用于基金管理机构的管理费用。同样，如若借用单位因财务制度不健全等原因导致年终效益无法核实的，也应按照基金借用额度的4%进行分配。”
前期研究结果[4]表明，大鼠脑组织电导率（electrical conductivity，EC）随晚期PMI的延长而逐渐增大，展现出了利用组织器官EC推断晚期PMI的良好应用前景。然而，EC最初是食品科学中检测肉类腐败程度的一种电化学指标，其测定值的大小为样本中各种导电离子的总和。因此，本研究旨在观察大鼠脑组织浸渍液EC及其相关生化指标的变化，在研究多指标联合推断PMI的基础上，进一步探究EC电化学变化的内在机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
由河南科技大学动物实验中心提供的健康无病原体SD大鼠40只，雌雄不限，体质量为（280±20）g。适应性饲养1周后，在同一时间点采用颈椎脱臼法将大鼠全部处死后，随机分成8组，每组5只，将大鼠尸体保存于25℃左右的室内环境中。本研究经动物伦理委员会批准。
1.4.1 试验用药物 小儿化食口服液，由广州市香雪制药股份有限公司生产，规格10 mL/支，产品批号201304002。小儿化食口服液模拟剂，由广州市香雪制药股份有限公司提供，规格10 mL/支，产品批号201304002。
大鼠死后7d内脑组织浸渍液中各生化指标的测定值见表2。结果显示：大鼠脑组织浸渍液中尿酸、尿素氮、无机磷的含量在大鼠死后1d内均无明显变化，而在2～7 d随PMI的延长开始快速上升，其整体变化规律均与EC大致相同；钾离子、钙离子、镁离子、肌酐4种生化指标与PMI的相关性均较差，在测定区间内离散度较大，整体变化无明显规律性，其中钾离子在测定区间内始终保持稳定，钙离子、镁离子和肌酐虽然有一定的变化，但在测定区间内这3种物质的变化规律无统计学意义，与PMI的相关性较差；钠离子、氯离子仅在2d内测定出结果，而2d后未检测出其浓度值。
1.2 主要仪器
大鼠死后7 d内脑组织浸渍液EC的测定值见表1。脑组织EC随PMI的延长而逐渐增大，其中：0～1d，EC值增大无统计学意义；2～7d，EC值随PMI的延长快速增大。脑组织EC（x）与PMI（y）的二次回归方程为：y=48.22x2+14.31x+1181.46（R2=0.96，P＜0.05）。
1.3 脑组织EC及化学成分的测定
分析EC与尿酸、尿素氮及无机磷的线性关系，结果显示：EC与尿酸、尿素氮及无机磷的一次回归方程拟合度均较高。3种生化指标（x）与EC（y）的线性方程分别为 y=0.02 x1-15.54（R2=0.97），y=0.005 x2-5.71（R2=0.99），y=4.98x3+1.15（R2=0.97），其中x1为尿酸、x2为尿素氮、x3为无机磷。
1.4 数据分析
数据均以
±s表示，采用SPSS 16.0软件对不同时间点各组测定数据进行重复测量方差分析，检验水准α=0.05。以EC为自变量（x），PMI为因变量（y），建立EC与PMI的二次回归方程。筛选出与死亡时间具有相关性的指标，设为自变量（x），分别以PMI和EC为因变量（y），建立回归方程，分析生化指标的变化与PMI和EC之间的线性关系。
2 结 果
2.1 脑组织浸渍液中EC与PMI的关系
FE30精密电导率仪（瑞士Mettler Toledo公司），ZY-1280全自动生化分析仪（上海科华生物工程股份有限公司），Discovery电子天平（美国Ohaus公司），KFR-26GW变频空调（珠海格力集团有限公司）。
表1 脑组织EC随PMI的变化（n=5，
2.2 脑组织浸渍液中各生化指标与PMI的关系
国内市场经济的持续发展必须有健康、有效的注册会计师行业的予以保障。伴随信息化的持续发展，不少行业的运行形式产生了重大变革，这就对注册会计师的工作给予了更高的要求。不少的相关知识必须注册会计师去了解、去掌握。为了可以更好地约束公司，维护个人的权威性，会计师还必须掌握新增加的法律法规。包括以上的情况还有不少，总之，国内的注册会计师务必要在服务质量上持续改善、有所提升，这就务必要注册会计师持续掌握新知识，提升个人的专业能力和服务水平。
对死后不同时间点脑组织中尿酸、尿素氮、无机磷的测定值（x）进行重复测量方差分析，其与PMI（y）的二次回归方程分别为y=1.04 x12+1.68 x1+13.16（R2=0.97，P＜0.05），y=0.24 x22-0.04 x2+0.59（R2=0.99，P＜0.05），y=0.05 x32-0.01 x3+2.39（R2=0.95，P＜0.05），其中x1为尿酸、x2为尿素氮、x3为无机磷。
表2 脑组织浸渍液各生化指标随PMI的变化 （n=5，
2.3 脑组织浸渍液中EC与尿酸、尿素氮及无机磷的关系
于死后不同时间点（0、1、2、3、4、5、6、7d）提取大鼠的全脑组织并准确称量，将脑组织置于研钵中研磨，并与去离子水混合制成质量浓度为0.1g/mL的匀浆浸渍液，将浸渍液用0.45 μm滤膜过滤并均分成2份。其中1份浸渍液用电导率仪即刻测定其EC值并记录（温度补偿系数设定为2%/℃），同时利用全自动生化分析仪对另1份浸渍液中的钾离子、钠离子、氯离子、钙离子、无机磷、镁离子、尿酸、尿素氮及肌酐共9种化学物质的含量即刻进行测定并分析。
3 讨 论
EC的测定方法简便、快速、准确，其最初为食品科学中评价肉类产品新鲜程度及货架期的研究指标，已广泛用于食品卫生部门对肉类的检测[5-7]。食品科学的研究对象为肉制品，法医学的研究对象为尸体，两者均为肉类腐败变质的过程。因此，将EC的测定用于法医学中PMI的推断是一种重要的研究思路[8]。本课题组前期已研究了大鼠不同组织EC与PMI的关系[4]，结果显示，大鼠不同组织EC随PMI变化显著，其EC随PMI延长均呈现增大的趋势。由于脑组织结构相对封闭，受外界因素影响相对较少，且距离肠道组织较远，是推断PMI的理想组织，因此本研究选取脑组织为研究对象，测定脑组织浸渍液EC及相关生化指标的变化，研究EC及多种生化指标的变化与晚期PMI的关系，并进一步探究EC电化学变化的内在机制。
本研究测定了大鼠死后不同时间间隔脑组织浸渍液EC及相关化学成分的含量，研究并分析了EC及相关生化指标随PMI的变化关系。结果显示：脑组织浸渍液EC、尿酸、尿素氮、无机磷随PMI的延长而逐渐增大，R2为0.95～0.99，浸渍液中钾离子、钠离子、氯离子、镁离子、钙离子、肌酐随PMI的变化差异无统计学意义（P＞0.05）。其中，大鼠脑组织EC随PMI的变化规律与前期研究[9]结果一致：0～1d，其EC值均无明显变化，处于平台期；2～7 d，均随PMI的延长而快速增大，体现了EC变化的稳定性。脑组织浸渍液中尿酸、尿素氮的含量随PMI延长而逐渐增加，其可能原因为：大鼠死后随着腐败的进行，其组织内蛋白质逐渐降解为一系列含氮类的碱性物质[9]，如尿酸、尿素氮等。因此，此两种物质的含量变化与EC类似，在0～1d无变化而在2～7d快速增加。同时，脑组织中磷脂的含量丰富，其相应的磷脂结合蛋白含量较其他组织多，因此，随着腐败的进行其无机磷含量逐渐增加。本研究还分析了大鼠脑组织浸渍液EC与尿酸、尿素氮、无机磷3种生化指标变化的线性关系，结果显示，此3种生化指标的变化与EC的一次回归方程拟合度较好，R2为0.97～0.99。此结果侧面反映出与大鼠腐败相关的生化指标和EC变化的一致性，从而初步探究了大鼠脑组织浸渍液EC电化学变化的内在机制。脑组织浸渍液中钾离子、钙离子、镁离子、肌酐4种指标随PMI的变化无统计学意义（P＞0.05），其可能原因为：此4种物质在组织细胞内含量较为稳定，本实验采用物理方法（研磨）将组织细胞彻底打破。因此，大鼠尸体的腐败程度对此4种指标的含量变化影响较小。钠离子、氯离子仅在2d内可测定出结果，而2d后以现有的生化分析仪检测不出其含量，具体变化机制有待于进一步研究。
如果孩子丢失了，家长应该怎么办？第一，去跟孩子约定好的会合地点，例如服务台、售票口等有工作人员、标志性地点且孩子熟悉好找的地方。第二，寻找工作人员或志愿者守住商场、超市游乐场所等出口，并对出入者仔细盘查。第三，在孩子丢失地点的四个不同方向进行寻找，每个方向最少找20分钟。第四，拨打报警电话，并准确说明孩子丢失情况，保持手机畅通。
综上所述，本研究探讨了大鼠脑组织EC及其相关生化指标随PMI的变化关系，初步探究了EC推断PMI的内在变化机制，尸体腐败过程中蛋白质降解产生的其他含氮类物质（除尿酸、尿素氮外）的变化规律是本课题组下一步的研究方向。同时，由于尸体的腐败受到个体与环境因素的双重影响，因此，多指标、多因素、多数据的联合应用将是PMI研究的重点方向。
参考文献：
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Relationship between Electrical Conductivity and Related Biochemical Indicators of Rat Cerebrum Tissues and Postmortem Interval
SUN Kai,ZHENG Zhe,LI Yong-lin,ZHAO Lin-lin,MO Yao-nan
（School of Forensic Medicine,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,Henan Province,China）
Abstract： Objective To explore the relationship between the electrical conductivity（EC）and biochemical indicators of rat cerebrum tissues and postmortem intervals（PMIs） and discuss the mechanism of applying EC to infer PMI.Methods Forty healthy Sprague-Dawley rats were sacrificed and stored in an environment of about 25℃.The whole cerebrum tissues of rats were removed respectively at different PMIs of 0,1,2,3,4,5,6,and 7 d,and then made into homogenized impregnation solution.The EC and related biochemical indicators（potassium,sodium,chloride,calcium,inorganic phosphorus,magnesium,uric acid,urea nitrogen and creatinine）in cerebrum tissue impregnation solution were determined,and the relationships among EC in impregnation solution,related biochemical indicators and PMI were analyzed.Results The EC in cerebrum tissues increased gradually with the extension of PMI,and the content of uric acid,urea nitrogen and inorganic phosphorus in its impregnation solution also increased gradually with the extension of PMI.The correlation of EC,uric acid,urea nitrogen,and inorganic phosphorus with PMI was relatively good（R2was 0.95-0.99）,and there was a linear correlation between the content change of uric acid,urea nitrogen,inorganic phosphorus and EC（R2 was 0.97-0.99）.The changes of the other 6 kinds of biochemical indicators with the extension of PMI within 7 d after the rats’death were non-significant（P＞0.05）.Conclusion The correlation between EC in cerebrum tissues,uric acid,urea nitrogen,inorganic phosphorus and PMI were relatively good,and combining various indicators can also improve the accuracy of PMI estimation.
Keywords： forensic pathology；postmortem interval；electrical conductivity；brain；biochemical indicator；rats
中图分类号： DF795.1
文献标志码： A
doi： 10.12116/j.issn.1004-5619.2019.04.002
文章编号： 1004-5619（2019）04-0393-03
基金项目： 河南省研究与院士工作站资助项目（13610002）
作者简介： 孙凯（1991—），男，硕士研究生，主要从事法医病理学研究；E-mail：kaisun1992@126.com
通信作者： 莫耀南，男，教授，硕士研究生导师，主要从事法医病理学和法医临床学研究；E-mail：forensic@haust.edu.cn
（收稿日期 ：2018-05-11）
（本文编辑：张建华）