韩玉刚 张浩（解放军第206医院临床药学科 吉林通化 134000）
【摘要】目的 探讨人参多糖注射液对体外培养的胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用。方法 采用MTT比色法，测定药物在不同浓度下的抑制率。结果 人参多糖注射液在不同浓度时的抑制率不同，且随浓度的升高抑制作用增强。结论 人参多糖注射液对胃癌细胞SGC-7901有一定的抑制作用。
【关键词】人参多糖 抗癌细胞SGC-7901 MTT法 抑制作用
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）33-0103-02
【Abstract】Objective:To study the inhibitory effect of ginseng Polysaccharide Injection on gastric cancer cellSGC-7901. Methods:by MTT colorimetric assay,determine the impressive rates of the different concentraion. Results:Ginseng Polysaccharide Injection gets the different impressive rates on the diffferent concentration; the effect is related with the drug concentration. Conclusion:Ginseng Polysaccharide Injection has impressive effect on gastric cancer cell SGC-7901.
【Key words】GPS Gastric cancer cell SGC-7901 MTT impressive effect
人参多糖注射液，曾用名癌得安注射液，在临床作为免疫调节和肿瘤治疗的辅助用药，用于减轻肿瘤放、化疗引起的副作用。其主要成分为人参多糖。人参多糖由人参淀粉和人参果胶两部分组成，药理活性部分主要是人参果胶。人参果胶主要由半乳糖醛酸（GalA）、半乳糖（Gal）\阿拉伯糖（Ara）残基少量鼠李糖（Rha）残基组成。实验证明，人参多糖能刺激机体的体液免疫和细胞免疫功能，对S—180、ESA和u—14等动物移植肿瘤均有明显的抑制作用。张丽辉等在研究复方人参多糖（主要含人参多糖）对老年晚期非小细胞肺癌患者免疫功能和生活质量的影响时，临床病例观察证实该药对提高人体免疫功能有显著的作用。胃癌细胞SGC—7901是国内已经建立的人类肿瘤细胞系，本研究以该癌细胞为体外培养的模型，采用（Methy1 thiazoly1 tetrazolium,MTT）比色法，研究人参多糖对胃癌细胞SGC—7901生长抑制作用，以期望扩展人参多糖在治疗胃癌上的新应用。
1 实验部分
1.1材料
1.1.1试剂和样品
人参多糖注射液（长春博奥生化药业有限公司生产，国药准字H22024889），0.25%胰蛋白酶（Amresco产品），DMEM(加10%新生牛血清)（ DMEM、新生牛血清均为HYCLONE产品）,MTT(Sigma产品)，分析纯盐酸（烟台三和化学试剂有限公司产品），分析纯异丙醇（天津市富宇精细化工有限公司产品），0.9%氯化钠注射液（解放军第206医院提供）。
1.1.2试验器材
培养瓶，24孔细胞培养板，10ml;离心管，Pasteur piperre(100-1000μl，10-200μl,5-50μl)，吸管，滴管，酒精灯，镊子，铝盒，HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司生产），202-2型电热恒温干燥箱（天津市泰斯特仪器公司生产），BCD-197M澳柯玛电冰箱，JHT-SD净化工作台（济南空气净化设备厂生产），HH CP-T型二氧化碳培养箱（伤害福玛实验设备有限公司生产），XDS-1B型实验室倒置生物显微镜（重庆市光电仪器有限公司生产），80-1型离心沉淀器（江苏省金坛市正基仪器有限公司生产），Elx800型酶标仪（美国Bio-tek公司生产），酶标板。
1.1.3胃癌细胞SGC-7901（冷冻储藏），购于中国医科大学病理生理研究室。
1.2实验准备
培养瓶，10ml离心管，吸管，滴管洗净，蒸馏水浸泡后，干燥，高温灭菌，待用。配制含有0.1moi/L盐酸的异丙醇溶液。按5mgMTT:1ml0.9%氯化钠注射液的比例，配置MTT溶液10ml。试剂、样品保存在4℃电冰箱内。
1.3细胞复苏及培养
从液氮中取出装有胃癌细胞SGC-7901的冷冻管，迅速置37～38℃水浴锅中，使其融化（时间控制在1分钟左右）。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。低速离心10分钟。去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
胃癌细胞SGC-7901复苏后，置37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。每48h换一次培养液，经常补加蒸馏水。
一般来说，上皮性的肿瘤细胞为多角形，细胞聚集时呈铺路石列排列，胞浆略少，核圆形或卵圆形，有2-4个核仁。
1.4MTT比色法检测人参多糖注射液对SGC-7901的抑制作用
将胃癌细胞SGC-7901用0.25%胰酶洗脱，制成混悬液，每孔200μl加入24孔培养板内。实验设胃癌细胞空白对照组及设5个不同浓度的人参多糖注射液试验组，分别加载24孔培养板内，5个梯度剂量依次是10μl、20μl、40μl、80μl、160μl，药物的每个剂量及对照分别设3个平行孔，最后每孔加DMEM至400μl。37℃5%二氧化碳培养箱孵化24h。取出吸弃上清夜，每孔加DMEM180μl，MTT20μl，再孵化3h。出现蓝紫色颗粒（甲臜），吸去100μl溶液，每孔加含有0.1mol/L盐酸的异丙醇溶液100μl，反复吹打至颗粒溶解。最后转移至96孔酶标板，按对照和由低到高的浓度的顺序成纵列排列，平行3列。在自动酶标读数仪测定每孔A值（测定波长490nm，参比波长630-690nm）。然后，根据A值，计算抑制率。
抑制率（IR）=(1-实验组A值/对照组A值)×100%
若IR>70%为高度敏感，IR>50%为中度敏感，IR<50为不敏感。
2 结果及分析
由实验得到对照及各浓度药物平行做3次的吸光度值，并计算平均值。如下表： 
由以上数据可知，药物对胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，而且随着药物浓度的升高抑制率也不断增强。IR<50%，因此胃癌细胞SGC-7901对药物在以上浓度时不敏感。但是可以看到随着药物浓度的成倍增加，药物的抑制率也在大幅度的增加，而且增长的幅度不断增大。所以，如果继续增大药物的浓度，药物的抑制率可能会超过50%。
3 讨论
目前，对恶性肿瘤的治疗，除手术、放疗和化疗三大治疗手段之外，以免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为重要的肿瘤辅助治疗方法。正常人的免疫系统能识别和杀死恶性肿瘤细胞，免疫防护能力差或者不正确细胞识别能力差，均能导致癌症的发病率增高。因此，免疫刺激剂和免疫调节剂被认为是潜在的抗癌剂。而作为多糖三大部分之一的植物多糖，可通过对荷瘤肌体的免疫调节作用达到抗肿瘤的效果已经得到世界的公认。植物多糖的免疫作用主要是通过增强NK细胞（天然杀伤细胞）的活性、增强巨噬细胞识别功能、促进外周血中的单核细胞在体外分泌肿瘤坏死因子TNF并增强其活性、诱生IL22、增强IL22/LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞)的抗肿瘤作用、增强细胞免疫作用等途径得以实现。
人参多糖来源于中药人参，而且有相关文献报道人参多糖可能是通过阻止肿瘤细胞进入增殖周期、诱导细胞因子（主要是TNF、INF-γ）产生、增强T细胞核NK细胞和LAK细胞的活性、含有p30抑癌基因的途径抗肿瘤；通过对巨噬细胞的作用、对抗体和补体的作用、对免疫器官的作用调节免疫机能。因此，人参多糖可以作为生物反应调节剂起到抗癌作用。另外，人参多糖作为中药补药人参的组成部分，其毒性很小，口服应用十分安全。扩展人参多糖在抗肿瘤方面的作用，正好能满足人们希望从中草药、植物等天然资源中寻找选择性高、活性强、毒副作用小、作用独特的抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药物的愿望。
实验研究证明，人参多糖对正常肌体和荷瘤肌体的免疫功能都有增强作用，是一种免疫刺激剂，可以增强网状内皮系统的吞噬功能，对血清补体及抗体生成具有促进作用，对肿瘤细胞具有抑制作用，但无直接杀伤作用，也缺乏明显的量效关系。
因此，本实验室着手通过MTT法检测出人参多糖对胃癌细胞SGC-7901的量效关系，以便能更好的指导临床用药控制胃癌患者的病情并促进达到治愈目的。由于实验中药物浓度偏低，使得实验结果（抑制率）偏低，使药物呈现对胃癌细胞SGC-7901不敏感的情形。但是，本实验的结果对以后深入研究人参多糖对胃癌细胞SGC-7901的量效关系有指导作用。
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论文作者:韩玉刚,张浩
论文发表刊物:《医药前沿》2013年11月第33期供稿
论文发表时间:2014-1-13
标签：多糖论文; 人参论文; 细胞论文; 胃癌论文; 作用论文; 抑制论文; 注射液论文; 《医药前沿》2013年11月第33期供稿论文;