（佳木斯市食品药品检验检测中心 黑龙江佳木斯 154000）
【摘要】目的：探讨应用高效液相色谱法（HPLC法）测定普鲁卡因青霉素注射液的含量。方法：采用高效液相色谱仪对普鲁卡因青霉素注射液进行含量的测定。结果：供试品溶液同对照品溶液主峰的保留时间基本，普鲁卡因、青霉素在此色谱条件下分离良好。鲁卡因、青霉素的检测，其回收率良好，均在95％～105％之间。普鲁卡因含量精密度为0．86％，青霉素含量精密度为1．26％。结论：HPLC法可用于普鲁卡因青霉素注射液的质量控制，操作方便，快捷，结果准确，重复性好。
【关键词】高效液相色谱法；HPLC法；普鲁卡因青霉素注射液；含量测定
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）36-0310-02
普鲁卡因青霉素该产品是青霉素的普鲁卡因盐，其中青霉素是主要的抗菌活性成分。青霉素除对链球菌具有良好的抗菌活性，其它还有溶血性链球菌，肺炎链球菌和不产生青霉素酶的葡萄球菌等。该产品还具有抗流感嗜血杆菌和百日咳博德特氏菌的抗菌活性。青霉素通过抑制细菌细胞壁合成发挥杀菌作用[1]。将普鲁卡因青霉素注射液进行脱油并通过高效液相色谱（HPLC）进行测定其含量。
1.药品与仪器
1.1 仪器
采用高效液相色谱仪为美国lablliance公司；GR-202日本AND分析天平；CHB-1型抗生素效价测量仪。
1.2 药品
乙腈为色谱纯；对氨基苯甲酸、盐酸普鲁卡因、青霉素对照品；注射用普鲁卡因青霉素样品。
1.3 色谱条件
使用十八烷基硅烷键合的硅胶作为填料缓冲液（将14g磷酸二氢钾和40%四丁基氢氧化铵溶液溶解在约700mL水中，并用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH为7.0，进行加水稀释至 1000mL，混匀，缓冲液-水-乙腈为（52:23:25），流动相用1mol/L氢氧化钾溶液或10%稀磷酸溶液调节pH至7.5±0.05，检测波长为235nm。柱温30℃，流速1.65mL/min，进样量10μl。
1.4 系统适用性试验
取适量青霉素V钾对照品，用流动相溶解，稀释成每1mL含2.4mg青霉素V钾的溶液，将该溶液与参比溶液按体积比1:3混合，取10μL进入液相色谱仪。青霉素峰和青霉素对钾峰的分辨率应＞2.0。
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1.5 测定方法
取适量供试品，精确称量适量（相当于普鲁卡因青霉素70mg），置于50mL容量瓶中，加入流动相约30mL，超声溶解，采用流动相进行稀释到刻度，摇匀，精确测量10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；取适量青霉素对照品和盐酸普鲁卡因对照品，用流动相溶解稀释，每1mL制成约0.8mg青霉素，用同样方法测定普鲁卡因0.54mg溶液。通过外标法计算测试样品中普鲁卡因和青霉素的含量[2]。每1毫克青霉素相当于1780青霉素单位。
2.结果
加入普鲁卡因青霉素注射液，经过液相分离之后，色谱图中普鲁卡因同青霉素的主峰两侧无杂峰干扰；空白辅助剂，空白添加剂同混合参考色谱的色谱图比较具有可以满足鉴定和对其含量进和测定的要求。
测试得出青霉素含量浓度为0.8m/mL，范围为0.65～0.95mg/mL。实验结果表明在0.65～0.96mg/ml范围内，仪器测量的响应信号，同青霉素浓度之间关系为正比关系。测试得出普鲁卡因含量浓度为0.54mg/mL，范围显示在0.432～0.648mg/mL范围内，仪器测量响应信号，同普鲁卡因浓度之间关系为直接呈正比。
HPLC法测定的普鲁卡因含量准确度情况，制剂制备规格为10ml：300万单位，制剂测得值和回收率测分别为1号121.65mg/ml，102.15%；2号121.29mg/ml，101.85%；3号121.16mg/ml，101.85%；4号122.60mg/ml，102.95%；5号122.21mg/ml，102.60%；6号119.15mg/ml，99.83%；7号121.45mg/ml，101.98%；8号116.85mg/ml，98.13%；9号120.35mg/ml，101.05%；平均回收率为101.45，RSD为1.52%。
HPLC青霉素含量测定法准确度，制剂制备规格为10ml:300万单位，制剂测得值（单位/ml）和回收率测分别为1号305500，101.84%；2号302740，100.92%；3号301090，100.36%；4号306910，102.32%；5号305860，101.96%；6号292510，97.55%；7号298360，99.46%；8号288760，96.25%；9号301280，100.42%；平均回收率为100.15，RSD为2.05%。
对普鲁卡因、青霉素的检测，回收率结果良好，均在95%～105%之间。普鲁卡因含量测定精密度为0.86%，青霉素含量测定精密度为1.26%。
3.讨论
普鲁卡因青霉素是一种白色微晶性粉末，遇到酸、碱或氧化剂等会迅速失效。本药易溶于甲醇中，乙醇或氯仿中略溶，微溶于水中。本品为青霉索G的普鲁卡因盐。深部肌肉注射后，青霉素徐缓释放，因而起效缓慢，但较持久，给药量的60%至90%会肾排出体外。本品为有机酸与有机碱组成的盐，调节流动相pH值，使其中一个组分成分子状态，而另一组分成解离状态，选择合适的反离子，可同时测定两者的含量[3]。本法以氢氧化四丁基铵为离子对试剂，在pH7．5的磷酸盐缓冲液中，青霉素分子中的羧基解离成阴离子，与加入的反离子（四丁基铵阳离子）形成离子对，从而增大其在固定相中的分配系数，改善分离效果。同时，在弱碱性流动相条件下，普鲁卡因呈游离状态，在反相色谱柱上有一定保留，可以获得较好的色谱分离。
【参考文献】
[1]蔡金华，顾欣，金凌艳，刘雅妮.HPLC法鉴别普鲁卡因青霉素注射液及含量测定[J].《中国兽药杂志》,2009,43(9):1-4.
[2]吴桂英，林銮君，李惠妮.HPLC法测定普鲁卡因青霉素注射液中青霉素含量[J].《中国兽药杂志》,2008,42(5):24-25
[3]刘广桢，林林，李玉杰，杨娜.HPLC法分析注射用普鲁卡因青霉素有关物质[J].《中国药品标准》,2009,10(5):378-380.
论文作者:宋岳
论文发表刊物:《心理医生》2018年36期
论文发表时间:2019/1/11
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