1哈尔滨市胸科医院 哈尔滨 150000；2桂林医学院附属医院病理科 桂林 541001
摘要：目的 胸水沉渣包埋细胞块中应用免疫组化方法进行组合性抗体检测，探讨其表达在转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤诊断及鉴别诊断中的应用价值。
关键词：沉渣包埋；免疫组化；转移性腺癌；恶性间皮瘤
1 材料与方法
1.1 材料 收集哈尔滨市胸科医院2013年1月—2014年5月间60例肿瘤性胸水标本，采用常规细胞涂片法和胸水沉渣包埋免疫组化染色进行检测，所有病例在抽取胸腔积液前未经过放、化疗，之后均经病理活检证实。其中肺腺癌53例，胸膜恶性间皮瘤7例。肺腺癌中男性23例，女性30例，年龄33-80岁，平均年龄64岁；恶性间皮瘤中男性4例，女性3例，年龄32-77岁，平均年龄61岁。60份胸水中一侧胸腔有胸水58例，双侧胸水2例；胸水外观性状呈黄色53例，呈血性7例。
1.2 方法
1.2.1 常规细胞涂片 取胸水15ml于试管，3000r/min，离心10min，弃上清液，取沉渣涂片2张，95%乙醇固定，HE染色，光镜观察。
1.2.2 沉渣包埋切片 取胸水100ml，4000r/min，离心，弃上清液，加入4%中性甲醛液固定，取沉渣用滤纸包好，常规脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察。
1.2.3 免疫组化 采用全自动免疫组化染色系统Autostainer Link 48（产品标准号YZB/USA2016-2012）。
1.3 结果判定 CK、CEA、CK5/6 和CK7 以胞质着棕黄色为（+），MC以细胞膜着棕黄色为（+），CR以胞核和胞质着棕黄色为（+），TTF-1以细胞核着棕黄色为（+）。
1.4 统计学分析 采用SPSS13.0统计学软件进行统计分析，四格表和Fisher确切概率计算法进行对比。
2 结果
2.1 常规细胞学涂片⑴转移性肺腺癌：癌细胞堆叠成团，具有三维立体感、呈桑葚样或花环样排列，核大，深染，染色质不均匀，核仁明显，胞质较少。也可见单个散在癌细胞，胞核圆形或椭圆形，核仁明显增大，胞质部分有空泡（图1）。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆⑵恶性间皮瘤：瘤细胞呈散在或环状排列，单个瘤细胞比正常间皮细胞大，核大呈空泡状，含有明显的核仁，有时常有多个核仁，胞质丰富、红染；成团的瘤细胞排列较松散，细胞间较少重叠
2.2 沉渣包埋切片与常规涂片相比，沉渣包埋切片中细胞更丰富，细胞在同一平面上，染色清晰。⑴转移性肺腺癌：癌细胞核大、深染、畸形，染色质粗，核质比较高或倒置，胞质内可见空泡，有时可见黏液，把核挤向一侧呈印戒状。三维立体感不如涂片显著。⑵恶性间皮瘤：瘤细胞呈散在或环状排列，核呈空泡状，核膜不规则，可见病理性核分裂象，立体感不明显。
2.4 诊断分类比较 60例胸水中，常规细胞涂片法：肺腺癌35例，恶性肿瘤细胞6例，可疑恶性肿瘤细胞19例；胸水沉渣包埋切片免疫组化法检测组合性抗体表达后诊断分类
3 讨论
在胸腔积液中，转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤的肿瘤细胞在形态上非常相似，光镜下难以判别，故需要进一步检查才能明确诊断。常规细胞学涂片具有简便、快速和经济等优点，但是由于涂片厚薄不均造成肿瘤细胞重叠、结构不清，肿瘤细胞常伴有退变导致细胞肿胀增大、核浆比失调，且往往出现血性背景覆盖肿瘤细胞等现象，给诊断带来很多干扰。采用胸水沉渣包埋法，因其镜下细胞结构清晰、背景清楚，而联合免疫组化法进行组合性抗体检测，可得到明确分类诊断。
3.1 诊断 胸膜恶性间皮瘤的组织结构多种多样，瘤细胞可呈管状、乳头状、实性巢状等，间质可呈丰富的水肿黏液样，光镜下很难与腺癌鉴别，尤其是罕见类型的恶性间皮瘤（如印戒型、黏液型）［1］。本组中有1例胸水在常规细胞涂片示肿瘤细胞成团排列紧密，细胞大小不一，胞质少且含有空泡，核偏向一侧，涂片法诊断腺癌，经沉渣包埋切片免疫组化法诊断为恶性间皮瘤。本组常规涂片法诊断6例未分类的恶性肿瘤细胞，通过免疫组化法诊断为5例肺腺癌、1 例胸膜恶性间皮瘤；常规涂片法诊断19例可疑恶性肿瘤细胞，通过免疫组化法有14例诊断为肺腺癌，5例诊断为恶性间皮瘤。可见，沉渣包埋切片免疫组化法对胸水中分化差、形态不典型的恶性肿瘤细胞也能准确的分型。与常规涂片法相比，沉渣包埋块易于保存，可连续切片，便于进行免疫组化染色，对判断肿瘤的类型和鉴别诊断有重要意义。
脱落细胞学对转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤的诊断不能仅以细胞形态为依据，需要结合免疫组化方法才能做出明确诊断，这在临床病理诊断中已得到证实。选用CEA、TTF-1、NapsinA、CK7、MC、CR、CK5/6 和CK一组抗体，对胸水中转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤进行诊断和鉴别诊断，结果显示抗体TTF-1、CEA、NapsinA、MC、CR和CK5/6 阳性对转移性肺腺癌与胸膜恶性间皮瘤的鉴别诊断有重要意义。TTF-1 表达于肺及甲状腺起源的腺癌中［2，3］，本组TTF-1在转移性肺腺癌中阳性率为84.9%，间皮瘤阴性，表明TTF-1可作为诊断肺腺癌的特异性指标之一［4］。CEA 在腺癌尤其是消化道腺癌和肺腺癌中有较高表达，本组53 例转移性肺腺癌阳性率为79.2%，间皮瘤阴性。
3.2 鉴别诊断 胸水中除了以上转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤间的鉴别诊断，还要注意与其他少见恶性肿瘤相鉴别。
综上所述，胸水细胞学检查在常规涂片中发现恶性肿瘤细胞或可疑恶性肿瘤细胞时，沉渣包埋切片免疫组化法检测一组抗体能较好地解决单纯依靠形态学难以解释的诊断困惑，且其结果与组织学相似，所以联合应用具有高度敏感性抗体CEA、TTF-1、NapsinA、MC、CR和CK5/6 进行标记，对转移性肺腺癌和胸膜恶性间皮瘤的鉴别诊断具有重要意义，从而可以帮助一些难以接受支气管镜或胸腔镜检查以及非手术适应症肿瘤患者进行明确诊断，并通过进一步耐药指标检测及基因检测，指导临床的化疗和个体化靶向治疗。
参考文献：
［1］ 刘复生主编． 中国肿瘤病理学分类［M］． 北京：科学技术文献出版社，2001，122．
［2］ 张艳梅，付红，张颖． 免疫组化在胸膜上皮性恶性肿瘤鉴别诊断中的价值［J］．中国肺癌杂志，2007，10（7）：320－323．
［3］ Padgent DM，Cathro HP，Wick MR，et al． Podoplanin is a better immunohistochemical marker for sarcomatoid［J］． Am J Surg Pathol，2008，32（1）：123－127．
［4］ 周晓明，冯学威，赵立． 胸腔积液脱落细胞免疫组织化学染色检测相关抗体对胸膜转移性肺腺癌和恶性胸膜间皮瘤的鉴别诊断价值［J］．中国全科医学，2012，15（12B）：4075－4078．
论文作者:杨浩,,纪滨英,,王硕,,郑锦花
论文发表刊物:《健康世界》2015年1期
论文发表时间:2015/9/18
标签：间皮瘤论文; 腺癌论文; 细胞论文; 涂片论文; 沉渣论文; 胸膜论文; 免疫论文; 《健康世界》2015年1期论文;