营养米粉类食品检测阪畸肠杆菌前增菌方法的探讨论文_刘全生,陈礼忠,彭军,杨伟兴

营养米粉类食品检测阪畸肠杆菌前增菌方法的探讨论文_刘全生,陈礼忠,彭军,杨伟兴

刘全生 陈礼忠 彭军 杨伟兴 (广西壮族自治区桂平市疾病预防控制中心 537200)

【摘要】目的 提高营养米粉类食品中阪畸肠杆菌的检出率。方法 对同一份营养米粉类样品,用两种方法进行前增菌,一种方法是现行有效的国家标准GB 4789.40—2010,另一种方法是在取检样相同的情况下,比GB 4789.40—2010所规定的BPW稀释液多4倍进行前增菌,目的是确保增菌液的液体状态,相同时间相同温度前增菌后,再用同样的方法进行mLST—Vm增菌,再接种阪畸肠杆菌显色培养基,转种TSA平板进行色素试验,再进一步生化鉴定。综合菌落形态和生化特征,判断是否阪畸肠杆菌。结果 用两种前增菌方法对97份婴幼儿配方食品类的营养米粉进行前增菌培养,按国家标准GB 4789.40—2010所规定的前增菌方法的阪畸肠杆菌的检出率是8.25%(8/97)。另一种前增菌方法的检出率是14.43%(14/97),两种增菌方法的差异有统计学意义(P﹤0.05)并且国家标准GB 4789—2010所规定的前增菌方法未检出阪畸肠杆菌的,通过增加前增菌液BPW后,能检出阪畸肠菌杆。 结论 在取样品量不变的前提下,对吸水性较强的检样,增加前增菌液BPW后,能提高阪畸肠杆菌的检出率 。

【关键词】营养米粉类食品 阪畸肠杆菌 前增菌 检出率

【中图分类号】R15 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2013)34-0098-02

阪畸肠杆菌是肠杆菌科的一种,1980年由黄色阴沟肠杆菌更名而来,属革兰氏阴性杆菌。阪畸肠杆菌在自然界分布广泛,繁殖迅速属条件致病菌。在一般情况下,不对人体健康产生危害,但对于免疫力低下者和婴幼儿,新生儿,尤其是早产儿,低体重儿可以致病。能引起严重的新生儿、早产儿脑膜炎,小肠结肠炎和菌血症,死亡率较高。许多病例报告表明婴幼儿配方食品是目前发现阪畸肠杆菌的主要感染渠道。2008年我国将阪畸肠杆菌检验列入国家卫生标准[1]。2010年又将国家卫生标准进一步修改 [2] 。 根据最新的国家卫生标准GB 4789.40—2010的有关规定,检测取样100g(ml)加入到900ml的缓冲蛋白胨水BPW中,这种样品量和BPW稀释液的比例在遇到样品是婴幼儿配方食品中的“营养米粉”类食品时,因“营养米粉”类食品的吸水性很大,如果按上述比例进行前增菌稀释,将导致前增菌液变成“糊状” 的半固体状态。这样不利于前增菌液的混匀,不利于目标菌阪畸肠杆菌的增菌,也不利于下一步取1ml的BPW转种于10ml的mLst-Vm肉汤中。本次探讨的是在不增加检样量100 g (ml)的情况下,为提高阪畸肠杆菌的检出率提供客观依据。

材料与方法

一、检验的样品

2009年度至2012年度的“营养米粉”类的婴幼儿配方食品共97份。

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二、设备和材料

1、恒温培养箱:25℃、36℃、44℃各一台

2、冰箱:5℃

3、恒温水浴箱:44℃

4、天平:感量0.1g

5、振荡器

6、无菌吸管:1ml(具0.01ml刻度),10ml(具0.1ml刻度)

7、无菌锥形瓶:容量100ml、200ml、2000ml

8、无菌培养皿:直径90mm

9、精密PH试纸

三、培养基和试剂

1、缓冲蛋白胨水(buffer peptone water , BPW)

2、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤—万古霉素

(modifed lauryl sulfate tryptose broth-vancomfcin medium, mLST-Vm)

3、阪畸肠杆菌显色培养基

4、胰蛋白胨大豆琼脂(trypticase soy agar ,TSA)

5、生化鉴定试剂盒

四、操作步骤

1、对每一份“营养米粉”类检样,同时采取如下的两种方法进行前增菌,最后比较检测结果。

前增菌方法一(以下简称方法一):取营养米粉类检样100g加入已预热至44℃装有900ml缓冲蛋白胨水(BPW)的锥形瓶中,混匀溶解,36℃培养18h。

前增菌方法二(以下简称方法二):取营养米粉类检样分4次称取,每份样品共取样4×25g=100g分别加入到4瓶已预热至44℃每瓶装有975ml缓冲蛋白胨水的锥形瓶中,用手缓缓地摇摆至充分溶解混匀,36℃培养18h。

2、增菌:从每瓶BPW前增菌液中移取1ml转种于10ml的mLST-Vm肉汤中。44℃培养24h。

3、分离:

取mLST-Vm肉汤培养物1环,分别划线接种于两个阪畸肠杆菌显色培养基平板,36℃培养24h。挑取5个可疑菌落,划线、接种于TSA平板。25℃培养48h。

4、自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落,进行生化鉴定。阪畸肠杆菌的主要生化特征参照“食品安全国家标准-食品微生物检验-阪畸肠杆菌检验GB 4789.40—2010的表一”。

五、结果

对婴幼儿配方食品中的“营养米粉”类样品进行检验阪畸肠杆菌项目时,取100g样品加到900ml缓冲蛋白胨水BPW的阪畸肠杆菌的检出率是8.25%(8/97);对每一份样品分4次称取25g共计称取100g样品分别加入到4瓶975ml/瓶的缓冲蛋白胨水BPW的阪畸肠杆菌检出率是14.43%(14/97),二者的检出率差异有显著意义(P<0.05)。并且前一种前增菌方法未检出阪畸肠杆菌的,后一种前增菌方法能检出。检出率提高了6.18%(14.43-8.25%)。

六、讨论

由于阪畸肠杆菌是条件致病菌,仅是对特定的人群致病,很长的时间来,没有引起人们足够的重视,1980年才由黄色阴沟肠杆菌更名而来,我国一直到2008年才制定出阪畸肠杆菌检验国家标准(GB 4789.40—2008),相对于中华人民共和国国家标准GB 4789内的其它致病菌来说,阪畸肠杆菌的检验方法是较晚纳入国家标准的。另一方面,随着人们生活水平的提高,多元化食品不断推向市场,“营养米粉”类的食品也是近几年来才出现的针对特殊人群的食品,“营养米粉”类食品吸水性很强的特点是其他食品无法比拟的。再者,由于阪畸肠杆菌在自然界中分布广泛,繁殖迅速,在食品加工生产过程中很容易污染阪畸肠杆菌。营养米粉的主要吸食对象是婴幼儿、年老体弱等免疫力较低人群。基于上述三个因素,想方设法提高食品中阪畸肠杆菌的检出率是相当重要的。从本次检验探讨比较中可以看出,在没有增加样品取样量的情况下,对“营养米粉”类吸水性强的食品,通过增加前增菌液的量可以提高阪畸肠杆菌的检出率,检出率分别是8.25%(8/97)与14.43%(14/97)。二者的检出率差异有显著意义(P<0.05)。造成检出率差异的主要原因是由于营养米粉类食品的吸水性很强,如果按照国家标准GB 4789.40—2010规定的缓冲蛋白胨水的量进行前增菌,就会导致缓冲蛋白胨水在加入100g的营养米粉类食品后,变成“浆糊”状的半固体状态,不利于阪畸肠杆菌的繁殖,下一步的检验又仅仅是取1ml的缓冲蛋白胨水转种前增菌,导致检出率低。

通过上述探讨,可以看出,在营养米粉类食品中检验阪畸肠杆菌时,增加前增菌液缓冲蛋白胨水的量,确保在液体状态下增菌,对提高检出率是相当必要的。同时也说明:国家标准GB 4789.40—2010所规定的阪畸肠杆菌的检验增菌方法由于发布实施时间不长,有待于在实践工作中进一步修改及补充完善。

参考文献

[1]中华人民共和国国家标准GB/T 4789.40—2008 中华人民共和国卫生部与中国国家标准化管理委员会共同发布.

[2]中华人民共和国国家标准GB 4789.40—2010中国标准出版社出版发行.

论文作者:刘全生,陈礼忠,彭军,杨伟兴

论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第34期供稿

论文发表时间:2014-1-22

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