（杭州民生药业有限公司；浙江杭州311100）
【摘要】目的：建立玻璃酸钠滴眼液分子量与分子量分布测定方法，为处方、工艺研究和包装设计提供参考。方法：采用分子排阻色谱法检测玻璃酸钠滴眼液的分子量和分子量分布，并考察其在高温、光照、酸、碱、氧化条件下的变化情况。结果：方法专属性良好，对照品30.5万～235万分子量范围内线性良好（r=0.994），精密度RSD=0.68%（n=6）；重复性RSD=0.91%（n=6）；溶液24小时稳定性RSD=0.54%（n=8）；玻璃酸钠分子量在高温、光照和酸性条件下分子量呈不同程度的下降，碱性和氧化条件下趋势尤其明显。结论：分子排阻色谱法专属性、线性、精密度、重复性、溶液稳定性良好，可用于滴眼液分子量及分子量分布的测定和影响因素考察。处方、工艺设计时需考虑各种影响因素对质量的影响，包装设计时需考虑遮光。
【关键词】玻璃酸钠；分子量；分子排阻色谱法；影响因素
[ 中图分类号 ]R969[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2019）01-0347-02
玻璃酸钠系鸡冠或微生物[马疫链球菌]发酵液中提取的酸性黏多糖，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基葡萄糖双糖单位构成的糖胺聚糖的钠盐。玻璃酸钠滴眼液是以玻璃酸钠为主要成分制成的滴眼剂。主要用于：干燥综合症，斯.约二氏综合症，干眼综合征等内因性疾患；手术后、药物性、外伤、佩戴隐形眼镜等外因性疾患。由日本参天制药株式会社率先生产上市并获准进口国内，商品名：爱丽®。根据其说明书，玻璃酸钠的重均分子量（Mw）应为50万～120万道尔顿，但其进口注册标准JX20130296中并未制订分子量的测定方法。本文参考WS1-(X-072）-2011Z标准方法，建立了玻璃酸钠滴眼液的分子量和分子量分布测定方法，并考察了滴眼液在高温、光照、酸、碱、氧化条件下分子量和分子量分布的变化情况。
1、仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱系统（2414检测器、1525泵、EMPOWER色谱工作站、GPC分析软件，Waters公司），Shodex SB-806HQ（8.0mm×300mm）多糖测定用凝胶色谱柱（昭和电工），XS205DU电子天平（梅特勒-托利多），SHH-300GD-2药品强光照射试验箱（重庆永生），LH-213恒温恒湿箱温（爱斯佩克）。
1.2试药
玻璃酸钠滴眼液（规格：5ml:5mg，日本参天制药株式会社）、聚苯乙烯磺酸钠（北京润汇源环境治理技术发展有限公司）、氯化钠（AR）、叠氮化钠（AR）、盐酸（AR）、氢氧化钠（AR）、过氧化氢（AR）、纯化水。
2、方法与结果
2.1分子量和分子量分布测定
2.1.1色谱条件 色谱柱：Shodex SB-806HQ（8.0mm×300mm）多糖测定用凝胶柱；流动相：0.2mol/L氯化钠溶液（取氯化钠11.9g，叠氮化钠0.1g，加纯水使溶解并稀释至1000ml）；柱温：35℃，流速：0.5ml/min，检测器：示差折光检测器；进样量：100μl。
2.1.2对照品溶液制备 分别取峰位分子量（Mp）为30.5万、67.9万、97.6万和235万道尔顿的聚苯乙烯磺酸钠盐对照品适量，加适量流动相放置过夜使溶解完全，加流动相稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液作为系列对照品溶液。
2.1.3供试品溶液制备 取玻璃酸钠滴眼液1ml，加流动相稀释至10ml，摇匀，放置过夜，作为供试品溶液。
2.1.4测定法 取上述各对照品溶液100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，由GPC软件进行普适校正计算线性回归方程，对照品K值为0.00018，α值为0.65；供试品K值为0.00057，α值为0.75。取供试品溶液100μl，同法测定，用GPC软件计算出供试品的重均分子量（Mw）及分子量分布（Mw/Mn）。
2.1.5辅料和空白干扰 精密吸取空白流动相、辅料溶液各100μl分别注入色谱仪，记录色谱图。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆结果空白流动相和辅料不干扰检测结果，专属性良好。
2.1.6线性关系考察 精密吸取各对照品溶液100μl分别注入色谱仪，记录色谱图，由GPC 软件进行普适校正计算得线性回归方程：log(MolWt「n」)=1.59e+0.01-5.68e-0.01T∧1（r=0.994）；结果表明聚苯乙烯磺酸钠的分子量在30.5万～235万道尔顿范围内，峰保留时间与Mp分子量的对数线性关系良好。
2.1.7精密度 精密量取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算重均分子量，重复进样6次，结果表明方法的精密度良好，RSD=0.68%，n=6。
2.1.8重复性 取6支滴眼剂，分别按“2.1.3”制备供试液，按“2.1.4”测定、计算重均分子量，结果RSD=0.91%，n=6。
2.1.9溶液稳定性 供试品溶液在室温条件下分别放置1、2、3、4、8、12、24h后进样，记录色谱图，计算重均分子量，结果RSD=0.54%，n=8。
2.1.10检测结果 玻璃酸钠滴眼液分子量Mw约为95.9万，分子量分布MW/ Mn为1.9，与其说明书规定的50万～120万道尔顿的要求相符。
2.2影响因素考察
取样品分别经高温、光照、冻融，酸（1mol/L HCl），碱(1mol/L NaOH)和氧化（3% H2O2）破坏后测定分子量及分子量分布，结果如下：
2.2.1高温 样品于60℃试验箱温中10天，按“2.1.3”制备供试液依法测定，结果Mw：78.2万，Mw/Mn:1.8。 2.2.2光照 将包装、去外包装两种样品置5000LX光照箱中10天，按“2.1.3”制备供试液依法测定，包装样品Mw：93.8万，Mw/Mn:1.9，去外包装样品Mw：82.7万，Mw/Mn:1.8。
2.2.3冻融 样品依次于-18℃、40℃冻融3个循环，按“2.1.3”制备供试液依法测定，结果Mw：93.4万，Mw/Mn:1.9。
2.2.4酸 样品加1mol/L HCl 1.0ml，放置过夜用1 mol/L NaOH中和pH至6.5，加水至50ml，结果Mw：80.6万，Mw/Mn:1.8。
2.2.5碱 样品加1mol/L HCl 1.0ml，放置过夜用1 mol/L NaOH中和pH至6.5，加水至50ml，结果Mw：50.8万，Mw/Mn:1.7。
2.2.6氧化 样品加3% H2O2 1.0ml，放置过夜，加水至50ml，结果Mw：33.7万，Mw/Mn:1.6。
2.2.7结果讨论 经酸、碱、氧化、高温、光照和冻融试验，玻璃酸钠分子量均呈下降趋势，但下降程度各不相同，碱性和氧化条件下降尤为显著。进口注册标准规定本品pH应为6.0～7.0，可防止酸、碱对分子量的影响，处方中添加依地酸二钠作为稳定剂螯合金属离子，降低氧化对分子量的影响。纸盒包装的遮光作用可显著降低光照对分子量的影响，处方和包装设计合理。此外高温对分子量也有影响较大，工艺设计时还需予以考虑。
3讨论
通过专属性、线性、精密度、重复性和溶液稳定性试验，结果表明玻璃酸钠滴眼液的分子量及分子量分布测定方法可行。处方、工艺开发和稳定性研究过程中，可采用分子排阻色谱法测定滴眼液中玻璃酸钠的分子量和分子量分布，考察各种因素对产品质量的影响，指导药品研发。
[参考文献]
[1]参天制药株式会社.爱丽®玻璃酸钠滴眼液说明书；
[2]国家食品药品监督管理总局．进口药品注册标准JX20130296．玻璃酸钠滴眼液；
[3]国家食品药品监督管理局．国家药品标准WS1-(X-072)-2011Z．玻璃酸钠。
论文作者:应建辉 朱婷
论文发表刊物:《医师在线》2019年1月1期
论文发表时间:2019/4/1
标签：分子量论文; 溶液论文; 酸钠论文; 色谱论文; 玻璃论文; 滴眼液论文; 样品论文; 《医师在线》2019年1月1期论文;