刘庆生, 王小奇, 蔡丹莉, 叶彬, 来丽群[1]2013年在《益气活血法对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响》文中研究指明目的:观察益气活血法对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响。方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组8只和造模组56只,采用以MNNG损伤为主的综合法复制大鼠胃癌前病变模型,随机处死10只大鼠经病理确定造模成功后,再将46造模组大鼠随机分为模型组12只、益气活血高、低剂量组各12只和胃复春组10只,分别给予益气活血方、胃复春混悬液灌胃治疗12周。免疫组化Envision法测定大鼠NF-κB、cyclinDl和p16的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织NF-κBp65/IκBα明显升高(P<0.01)。药物治疗后与模型组比较,益气活血高剂量组、胃复春组大鼠胃组织NF-κBp65表达较模型组明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达较模型组明显升高(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织cyclinD1和p16明显升高(P<0.01,P<0.05);药物治疗后与模型组比较,益气活血高剂量组及胃复春组大鼠胃组cyclinDl表达明显降低(P<0.01,P<0.05);益气活血高剂量组大鼠胃组织P16表达明显升高(P<0.01)。结论:益气活血法可能通过减少致炎因子激活NF-κB信号通路抑制cyclinDl,上调p16表达防治胃癌前病变,这可能是其防治胃癌前病变的作用机制之一。
魏明[2]2015年在《复方莪术散对子宫内膜异位症患者CA125、CA199、CyclinD、P16的影响》文中指出子宫内膜异位症(内异症)是多发病,是日趋增多的生育年龄妇女的常见病,大约有10%~15%的发病率,且有明显上升趋势,最常侵犯卵巢,继发性痛经是最典型的临床症状,50%的患者合并不孕[1]。国内外学者对内异症的的恶性肿瘤类似的生物学行为已经开始进行研究,其中恶变涉及的部位包括腹膜、卵巢、输卵管、膀胱等,恶变率为0.33%~1.5%[2],[3]。血清糖类癌抗原125、199(CA125、CA199)水平对诊断内异症均有一定的价值[1]。其在子宫上皮组织表达率高于其他组织,因此在内膜相关疾病中可发现检测高于正常范围,也可作为评价疾病严重程度的指标[4]。学者对内异症的发病研究表明,从肿瘤学的发病角度能在一定程度上说明内异症的发生发展。大量的研究表明细胞周期的不正常改变与恶性肿瘤发生发展有一定关系,同时内异症与细胞周期的国内外研究也受到关注,结果提示了其与细胞周期蛋白的异常的关系是可能的发病的机制。细胞周期蛋白D(CyclinD)是细胞周期的正性调节因子,与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶结合可加速细胞通过G1检查点,促进其进入S期[5]。P16是最直接抑制肿瘤发生的细胞固有成分,通过与CyclinD1(CyclinD的亚型)竞争,特异性地与CDK4及CyclinD1-CDK4复合物结合,来抑制CDK4活性,阻止细胞从G1期至S期的转变和DNA合成启动,最终发挥对细胞周期的负性作用[6],与异位子宫内膜的不正常生长、增殖、浸润及转移等恶性生物学表现有关。导师曹保利教授研制的中药方剂复方莪术散,结合了疾病的基本病症肾虚血瘀和自己的临床治疗经验。该课题选择血清CA125、CA199、CyclinD1、P16作为检测指标,观察内异症患者血清CA125、CA199水平以及异位内膜组织和在位内膜组织中的CyclinD1及P16表达程度,研究复方莪术散的治疗效果,为复方莪术散治疗内异症提供实验基础和指导。目的:1.观察内异症患者的血清CA199及CA125的水平,探讨其在内异症中的诊断价值及复方莪术散的疗效。2.检测CyclinD1及P16在内异症患者异位内膜和在位内膜组织中的表达程度,研究CyclinD1及P16对内异症的发生发展影响;观察口服中药复方莪术散内异症患者的异位和在位内膜组织的CyclinD1、P16表达水平,研究其对内异症发展的影响,为进一步的基础研究提供方向,并为该方剂对疾病的治疗提供实验数据和证实。方法:1.2013年1月至2014年1月期间,于天津市南开医院妇产科,接受腹腔镜或开腹手术治疗,并且经过临床及病理诊断为内异症或其他妇科疾病的患者共99人。69人诊断为内异症,予以口服中药方剂复方莪术散颗粒剂3个月后进行手术治疗的患者35人(用药组),3个月内未接受内异症相关治疗且仅进行手术治疗的患者有34人(观察组);其他妇科疾病,包括单纯卵巢囊肿、输卵管系膜囊肿、不孕患者30人(对照组),且术前未经内异症相关治疗直接手术。术前检测血清ca199及ca125表达水平,且术后检测异位及在位内膜组织的cyclind1及p16的表达。结果:1.与对照组相比,用药组和观察组检测出的血清ca199及ca125均升高,差异均有统计学的意义(p〈0.05)。且用药组患者血清ca199水平低于观察组,有统计学差异(p〈0.05)。2.与对照组相比,用药组、观察组于术中取得的异位内膜组织及在位内膜组织的cyclind1表达均增高,且有统计学意义(p<0.05);用药组术中取得的子宫异位内膜组织的cyclind1表达低于观察组,但差异无统计学意义(p>0.05);用药组子宫在位内膜组织的cyclind1表达低于观察组,且有统计学意义(p<0.05)。与对照组相比,用药组和观察组的p16表达均有统计学意义(p<0.05);用药组子宫异位内膜组织的p16表达低于观察组,差异有统计学意义(p<0.05);用药组子宫在位内膜组织的p16表达低于观察组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:1.在卵巢内异症患者中血清ca125、ca199水平表达明显增高。同时中药方剂复方莪术散治疗卵巢内异症患者,可有效降低血清ca125、ca199水平。2.在卵巢内异症患者内膜组织中有cyclind1的高表达,同时伴p16低表达,表明p16表达下降可能会促进cyclind1高表达,引起细胞周期的异常和细胞的不正常增生,提示其在内异症的发生发展中的作用,揭示了内异症的恶性生物学行为的基础。口服复方莪术散在降低卵巢内异症患者在位内膜组织中的cyclind1表达程度的同时,增高卵巢内异症患者异位内膜组织及在位内膜组织中的p16的表达程度。提示复方莪术散在抑制细胞周期进程中发挥作用,抑制内异症的恶性生物学行为,减缓疾病的发展过程,同时为内异症患者的治疗及预防复发提供了理论依据。
朱伯谦[3]2018年在《p16甲基化在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制研究》文中提出第一部分p16对阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移作用的影响目的:研究阿托伐他汀对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖迁移及凋亡的作用,以及p16在其中发挥的作用。方法:原代培养大鼠主动脉VSMCs并进行免疫荧光鉴定;以不同浓度阿托伐他汀(0、0.5、1.0、2.0μM)干预VSMCs,CCK-8检测阿托伐他汀对VSMCs增殖的作用;Transwell小室检测阿托伐他汀对VSMCs迁移的作用;Annexin-V/PI双染色法检测阿托伐他汀对VSMCs凋亡的作用;q-PCR及Western blot检测阿托伐他汀对p16、p53表达的影响;用短发夹RNA(sh RNA)沉默p16基因,观察p16介导阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的影响。结果:(1)与对照组相比,阿托伐他汀以浓度依赖性方式抑制VSMCs增殖迁移(P<0.05);(2)与对照组相比,阿托伐他汀以浓度依赖性方式促进VSMCs凋亡,并上调p53蛋白表达;(3)与对照组相比,阿托伐他汀以浓度和时间依赖性方式上调p16 m RNA及蛋白表达(P<0.05);(4)沉默p16基因后,阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的抑制作用均被逆转(P<0.05)。结论:阿托伐他汀通过调控p16表达影响VSMCs增殖迁移及凋亡。第二部分DNA甲基化介导阿托伐他汀调控p16表达的机制研究目的:研究DNA甲基化在阿托伐他汀调控p16表达中的作用及机制。方法:以不同浓度阿托伐他汀(0、0.5、1.0、2.0μM)、5-氮杂胞苷(5-Azacytidine,AZA)(0、0.5、1.0μM)干预VSMCs,q-PCR及Western blot检测DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)及p16的表达,亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16启动子区Cp G岛甲基化水平;建立DNMT1过表达与沉默细胞模型,q-PCR及Western blot检测p16的表达。结果:(1)与对照组相比,AZA及阿托伐他汀组DNMT1表达明显下调,而DNMT3a和DNMT3b表达无明显改变;(2)与对照组相比,AZA组p16 m RNA及p16蛋白表达上调(P<0.05);(3)与对照组(20.0%)相比,AZA(10.9%)及阿托伐他汀(7.3%)组p16启动子区Cp G岛甲基化水平(10.9%)明显降低;(4)与对照组相比,DNMT1过表达组p16 m RNA水平及蛋白表达表达明显下调;相反,DNMT1沉默组p16 m RNA水平及蛋白表达表达明显上调(P<0.05);(5)与对照组相比,阿托伐他汀升高p16 m RNA水平,DNMT1过表达可逆转上述效应,而DNMT1沉默则进一步增强该作用(P<0.05)。结论:阿托伐他汀通过下调DNMT1表达,降低p16启动子区甲基化水平,进而调控p16表达。第叁部分MAPK通路参与阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移的机制研究目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路对DNMT1及p16的表达,以及在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制。方法:以不同浓度阿托伐他汀(0、0.5、1.0、2.0μM)干预VSMCs,Western blot检测JNK、ERK、p38-MAPK以及他们各自磷酸化蛋白的表达;阿托伐他汀(1.0μM)联合MAPKs抑制剂(p-JNK抑制剂SP600125、p-ERK抑制剂AZD6244及p-p38抑制剂SB203580)干预VSMCs,Western blot检测p-JNK、p-ERK、p-p38、DNMT1及p16的表达水平,CCK-8检测、Transwell小室检测VSMCs增殖迁移情况。结果:(1)与对照组相比,阿托伐他汀组JNK、ERK、p38-MAPK蛋白水平无明显改变,而p-JNK、p-ERK、p-p38蛋白水平明显增加;(2)与单用阿托伐他汀组相比,阿托伐他汀联合p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现DNMT1表达上调及p16表达下调;(3)与单用阿托伐他汀组相比,阿托伐他汀联合p-JNK抑制剂/p-ERK抑制剂/p-p38抑制剂组均出现VSMCs增殖迁移增加(P<0.05)。结论:阿托伐他汀激活MAPKs通路,抑制DNMT1表达,促进p16表达,进而抑制细胞增殖迁移。第四部分阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的影响目的:研究阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生及p16表达的影响。方法:SD雄性大鼠分叁组:(1)假手术(Sham)组(2)球囊损伤组(3)球囊损伤+阿托伐他汀组,HE染色观察血管壁形态及内膜增生情况,q-PCR及Western blot方法检测损伤的动脉组织中p16 m RNA及蛋白表达情况,亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16启动子区Cp G岛甲基化水平。结果:(1)Sham组颈总动脉壁各层结构完整清晰,未见新生内膜增生,中膜VSMCs排列整齐;球囊损伤组可见血管壁明显增厚,管腔狭窄,有大量新生内膜形成,其中可见增多的VSMCs;球囊损伤+阿托伐他汀组新生内膜增生明显减轻;(2)与sham组相比,球囊损伤组p16 m RNA水平及蛋白表达明显下调;与球囊损伤组相比,球囊损伤+阿托伐他汀组p16 m RNA水平及蛋白表达明显上调(P<0.05);(3)与sham组相比,球囊损伤组p16启动子区Cp G岛甲基化水平升高;与球囊损伤组相比,球囊损伤+阿托伐他汀组p16启动子区Cp G岛甲基化水平降低。结论:阿托伐他汀能通过降低p16启动子区Cp G岛甲基化水平促进p16表达,有效抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生。
韩康[4]2016年在《p16表达下调对hUC-MSCs和APP+鼠的抗衰老作用》文中研究表明阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是以进行性认知功能障碍和行为损害为主要临床表现的中枢神经系统退行性病变,具体表现为记忆能力降低、执行能力降低等行为的改变。随着年龄的增加,AD的发病率也逐年增加,目前我国正面临日趋严重的人口老龄化问题,60岁以上老人达到2.1亿。因此,寻求AD有效的防治疗法是亟待解决的重大问题。人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)是一类具有高度自我更新和分化潜能的成体干细胞,来源于脐带沃顿胶(Wharton’s Jelly)组织,具有来源广泛、低免疫反应、使用安全可靠、无伦理争议以及体外易于培养等特点,是组织工程和干细胞替代疗法的种子细胞,为AD治疗带来希望。课题组前期研究发现hUC-MSCs移植治疗AD可以改善AD的学习记忆功能,延缓衰老。但是随着传代次数的增加,干细胞不仅在形态上表现出衰老的特征,增殖和分化能力也随之减弱。因此,临床和基础研究多选用3-5代的干细胞进行移植,有限的细胞数量极大地限制了干细胞的使用。因此,研究调控干细胞衰老的关键基因,改善干细胞微环境是提高干细胞活性和疗效的关键。p16基因是美国冷泉实验室Kamb等于1993年发现的肿瘤抑癌基因,同时又是细胞周期的关键调控基因。p16能够阻遏周期蛋白D(cyclinD)与周期蛋白依赖性蛋白激酶4/6(CDK4/CDK6)的结合,抑制视网膜母细胞瘤(RB)的磷酸化,而未磷酸化的RB则不能与E2F结合启动DNA的复制,从而将细胞周期阻断在G1/S检查点,导致细胞周期停滞。课题组前期研究发现p16基因高表达能导致293细胞的衰老,但是p16与hUC-MSCs和AD鼠的衰老关系还不清楚。因此,本课题通过体内体外实验研究p16表达下调对hUC-MSCs和APP+鼠衰老的调控。目的本研究以p16基因为切入点,以慢病毒为载体,利用RNAi技术下调P15hUC-MSCs中p16基因的表达,进而观察p16基因表达下调对hUC-MSCs衰老的影响;同时,在体内实验中,以APP+鼠为研究对象,研究p16表达下调的p15huc-mscs对app+鼠的神经修复和抗衰老作用。方法1靶向下调p16基因表达的sirna片段的筛选和慢病毒构建取剖腹产健康新生儿脐带,体外分离培养huc-mscs,流式细胞仪检测huc-mscs细胞表面标记物cd44、cd90、cd34和cd45的表达,收集3、10、15代的细胞,qrt-pcr检测p16的表达,β-半乳糖苷酶染色检测不同代数huc-mscs的衰老程度。筛选有效下调p16基因表达的sirna(sip16),构建包含sip16的慢病毒(lv-shp16),lv-shp16感染huc-mscs观察绿色荧光表达以及检测p16蛋白表达。2p16基因表达下调对huc-mscs衰老的影响体外实验分为四组,分别为p3组、p15组、lv组和lv-shp16组。cck-8法检测各组细胞的增殖;pi染色和fitc染色检测各组细胞的周期和凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞的衰老状态;qrt-pcr和westernblot检测各组细胞中细胞周期关键基因(cdk4、cdk6、rb1、p-rb1)以及衰老相关基因(p16、p53、p21、pcna、sirt1、sirt2)的表达变化。3p16表达下调的huc-mscs对app+鼠神经功能的修复作用体内实验中,取4月龄app+雄鼠40只,随机分为5组,分别为p3huc-mscs移植组(p3组)、空白组(ad组)、p15huc-mscs移植组(p15组)、lv感染的p15huc-mscs移植组(lv组)、lv-shp16感染的p15huc-mscs移植组(lv-shp16组),同时以遗传背景相同的非转基因的野生鼠作为正常对照组(wt组)。p3组、p15组、lv组、lv-shp16组均采用尾静脉注射huc-mscs的方式治疗,每只app+鼠注射细胞量为1x106个cell/200ul,每周注射一次,连续注射四周,其余各组注射生理盐水。细胞移植28天后,morris水迷宫实验检测小鼠行为学的改变;心脏取血,tba法和羟胺法检测小鼠血清中丙二醛(malondialdehyd,mda)和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)的活力变化;免疫组化检测小鼠脑组织mab1281的表达,检测双肾上腺皮脂激素(dcx)、βⅢ微管蛋白(βⅢ-tubulin)以及淀粉样前体蛋白(app)的表达;提取小鼠海马组织rna和蛋白,qrt-pcr和westernblot检测细胞周期关键基因(cdk4、cdk6、rb1、p-rb1)、衰老相关基因(p16、p53、p21、pcna、sirt1、sirt2)、凋亡相关基因(caspase-3、bcl-2)以及tau、p-tau的表达变化。结果1、随着传代次数的增加,huc-mscs细胞逐渐呈现出形态扁平化,易脱壁的特点,β-半乳糖苷酶染色发现阳性细胞率明显增加(p<0.05);qrt-pcr结果显示p3、p10、p15huc-mscs中p16mrna的表达逐渐增加(p<0.05)。2、成功筛选出能有效下调p16表达的sirna,合成包含此sirna的慢病毒并成功感染huc-mscs;与p15组相比,lv-shp16能促进p15huc-mscs的增殖、促使细胞周期进入s期、抑制p15huc-mscs的早期凋亡、降低huc-mscs的衰老程度(p<0.05);同时,lv-shp16组中p16、p53、p21mrna和蛋白表达降低,rb1mrna和蛋白表达不变,而pcna、sirt1、sirt2、cdk4、cdk6、p-rb1mrna和蛋白表达升高(p<0.05)。3、细胞移植期间,app+鼠生长状态良好,无不良反应;与ad组相比,各处理组均有一定的抗衰老作用;与p15组相比,lv-shp16组小鼠逃避潜伏期减少、逃避潜伏期距离缩短,穿越平台次数、第一象限停留时间增加(p<0.05);lv-shp16组血清sod活力升高,mda活力降低(p<0.05);lv-shp16组海马组织中p16、p53、p21、caspase-3、p-tau蛋白表达降低,pcna、sirt1、sirt2、cdk4、cdk6、p-rb1、bcl-2蛋白表达升高(p<0.05),rb1、tau蛋白表达变化不明显;此外,lv-shp16组脑组织中mab1281阳性细胞明显增多,dcx、βⅢ-tubulin的表达增加,而app的表达减少(p<0.05)。结论1、随着细胞传代次数的增加,huc-mscs开始出现衰老,p16的表达与衰老呈正相关。2、下调p15huc-mscs中p16基因的表达能调节细胞周期关键基因(cdk4、cdk6、p-rb1)以及衰老相关基因(p53、p21、pcna、sirt1、sirt2)的表达,延缓和改善huc-mscs的衰老,促进huc-mscs的增殖。3、通过调节cdk4、cdk6、p-rb1、p53、p21、pcna、sirt1、sirt2等基因的表达,LV-shp16能促进hUC-MSCs的迁移和神经分化、抑制神经细胞凋亡,进而改善hUC-MSCs对APP+鼠的治疗效果。
辛志峰[5]2007年在《FHIT、P53和P16在子宫颈病变中的表达及意义》文中研究表明目的：检测宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌(CC)中脆性组氨酸叁联体(FHIT)、P53、P16蛋白的表达，探讨叁者在宫颈炎、CIN和CC发生发展中的作用、意义及相互关系。方法：应用组织芯片技术和免疫组织化学染色方法检测17例宫颈炎、65例CIN和98例CC中FHIT和p53、P16的表达。对所得结果应用SPSS13.0统计分析软件进行卡方检验、spearman等级相关检验和Nemenyi秩和检验。结果：①在宫颈炎中FHIT表达为100％，其在GINⅠ、Ⅱ、Ⅲ的下降或缺失率分别为25.0％、42.9％和66.0％；在宫颈癌中FHIT下降或缺失率为61.2％，其中鳞癌低表达率为64.0％，较腺癌的50.0％无差异(P＞0.05)，临床各期的缺失率分别为56.1％、74.2％和50.0％，组织学分级G1、G2和G3的缺失率分别为78.6％、54.3％和72.4％，临床各期与组织学各分级之间比较均无显着性差异(P＞0.05)。②P53在对照组无阳性表达；其CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ期阳性率分别为11.1％、28.6％和46.7％；CC组其阳性率为71.4％，且随着临床期别的增高、细胞分化程度的降低以及淋巴转移而进一步上升。P53在CINⅠ与CINⅢ之间有差异(P＜0.05)；CINⅠ与CINⅡ组、CINⅡ与CINⅢ组之间无意义(P＞0.05)。对照组与CC组、CIN组与CC组比较有显着性差异(P＜0.01)；临床分期中Ⅰ期与Ⅱ期之间的表达差异有意义(P＜0.05)；临床分型鳞癌P53表达率(75.3％)明显高于腺鳞癌(33.3％)，两者之间有显着差异(P＜0.01)；年龄≤40岁组P53表达率57.1％明显高于年龄＞40岁组P53表达率82.1％，两年龄组之间差异有极显着统计学意义(P＜0.01)；P53阳性表达与组织学分级、淋巴结有无转移(P＞0.05)均无关。③在对照组、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及CC组P16阳性率分别为35.3％、47.2％、64.3％、80％、91.8％，对照组与CINⅢ组、CINⅠ与CINⅢ组之间差异有意义(P＜0.05)；除此之外各组之间无差异(P＞0.05)；其随细胞分化程度的降低依次降低，在高、中及低分化宫颈癌中其过表达率分别是100％、91.1％和70％，高与低分化、中与低分化之间两两比较均有差异(P＜0.05)；高与中分化之间表达差异无意义(P＞0.05)；临床分型鳞癌组P16阳性表达率(94.4％)明显高于腺鳞癌组(66.7％)且两组之间有显着差异(P＜0.01)；其过表达与淋巴结转移有关，淋巴结转移与无淋巴结转移组P16过表达率分别是100％、85.3％且两组之间有差异(P＜0.05)；其过表达与年龄、临床分期无关(P＞0.05)。④在CIN中，经spearman等级相关分析发现FHIT、P53及P16相互之间无相关性。⑤spearman等级相关检验提示在CC中FHIT与P16呈正相关关系(R=0.743，P=0.000)而FHIT与P53无相关性。结论：①FHIT基因下降或缺失与P53过度表达是宫颈癌的频发事件，测定宫颈CIN中FHIT可作为宫颈癌的高危人群筛选指标，FHIT与P53检测还可作为宫颈癌的预后指标。②P16蛋白高表达是宫颈癌的早期表现，而P53蛋白的高表达是宫颈癌的晚期表现。同时监测宫颈癌组织中P16、P53蛋白的表达情况，筛选出临床上高危患者，有选择地进行早期治疗，采用更积极主动的有效措施，提高宫颈癌的治愈率和生存率。③FHIT、P53与宫颈癌发生和发展有关，可作为判断预后的辅助指标。
古学文[6]2008年在《白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤免疫作用的影响》文中研究说明恶性肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病,寻找有效的抗癌药物和方法,是世界医学面临的重要课题。祖国医学认为热毒是恶性肿瘤的主要病因病理之一,正气虚衰、热毒内聚是癌症的重要病理基础,热毒与痰湿或水湿胶结成为癌症的主要病机。本课题组近年从热休克蛋白(heat shock protein HSP)与中医热证的关系着手进行了一系列研究,提出清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70免疫原性发挥其抗肿瘤的作用,并从免疫学角度研究白花蛇舌草对恶性肿瘤HSP70免疫原性的诱导机制。前期实验主要通过观察荷瘤鼠腹水H22肝癌细胞HSP70表达及外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞表达,从整体方面研究发现清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70免疫原性发挥其抗肿瘤的作用。随着医学的发展,对HSP70研究的逐渐深入,人们发现HSP70在肿瘤特别是在恶性肿瘤中有较高表达。故近年来将其用在肿瘤方面的研究也越来越多,尤其是在肿瘤免疫方面的研究。目前主要观点认为HSP70可以携带多种肿瘤抗原肽,这些抗原肽被称为“热休克蛋白70多肽复合物”(HSP70-PC),主要起“分子伴侣”的作用,将肿瘤多肽分子直接或间接呈递给机体T淋巴细胞,从而引起机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应。近年来,分子生物学技术被广泛应用于肿瘤的研究,人们已经认识到肿瘤的发生与纽胞基因组的变化密切相关。主要观点认为是由于控制细胞生长和分化的基因失活所致。P16是近年发现的一种抑癌基因,正常情况下P16蛋白通过与细胞周期关键酶周期素依赖性激酶4(CDK4)结合,拮抗CDK4的作用,从而阻止细胞由G1期进入S期(DNA合成期),使细胞增殖受阻。P16基因蛋白失活,就会引起细胞周期失控,从而引起癌变。目前研究发现在大多数肿瘤中有P16基因的突变和缺失,说明P16基因功能的失活可导致肿瘤细胞的无限性生长。因此,进一步明确P16基因与肿瘤的关系有助于揭示肿瘤发生机制,对中医临床的诊断、治疗和预后等方面都有着重要的意义。本部分课题主要承接前面的实验,目的:探讨清热解毒类中药白花蛇舌草可能通过诱导HSP70、P16的表达而发挥其免疫原性抗肿瘤的作用及抑制和杀灭肿瘤细胞的作用,并从免疫学、分子生物学的角度研究白花蛇舌草对恶性肿瘤HSP70、P16的诱导机制。方法:本实验承接前期实验,首先采取经中药治疗后的小鼠腹水肝癌细胞各分为封闭组和未封闭组,封闭组给予HSP70单克隆抗体封闭癌细胞表达的HSP70抗原,未封闭组用经中药治疗后的H22肝癌细胞,以相同剂量分别免疫小鼠两次后给小鼠接种体外培养的H22肝癌细胞,同时设1640缺省对照组。形成瘤体后制成石腊切片。经HE染色后对小鼠肿瘤组织、脾组织和胸腺组织进行病理形态学观察,采用免疫组化标记法对实体瘤组织中的CD4~+、CD8~+、HSP70、P16进行检测。结果:1、白花蛇舌草未封闭组肿瘤组织坏死灶较其它各组更为明显,并见较多淋巴细胞浸润;白花蛇舌草未封闭组胸腺皮质增厚;脾脏白髓增厚、组织致密,见大量巨噬细胞。白花蛇舌草封闭组,党参未封闭和封闭组胸腺及脾脏病理改变与空白对照组比较,除脾脏可见少量巨噬细胞外,未见其它明显不同。2、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8~+、封闭组CD4~+表达明显上调、党参封闭组CD4~+表达也明显上调;党参未封闭及封闭组CD4~+、CD8~+表达与空白对照组比较也有所增高,但差异无显着性意义;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8~+表达明显上调。3、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组和党参未封闭组HSP70蛋白表达明显上调;与党参未封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组HSP70蛋白表达上调更明显。4、与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组、封闭组P16表达明显上调;党参未封闭组、封闭组P16表达也上调,但效果没有白花蛇舌草组明显。与空白对照组比较无明显改变,差异无显着性意义。结论::1、白花蛇舌草可诱导恶性肿瘤HSP70的高表达,增强机体的CD4~+、CD8~+CTL反应而达到对肿瘤的主动免疫杀伤作用。2、白花蛇舌草可诱导恶性肿瘤P16的高表达而达到有抑制癌细胞的增长的作用。3、经白花蛇舌草治疗后的具有HSP70、P16高表达的腹水肝癌细胞确可诱导小鼠对该肿瘤的主动免疫作用和抑制癌细胞的增长或直接杀灭癌细胞的作用,其机理可能通过提高机体CD4~+、CD8~+CTL反应和提高机体P16的表达而实现。
吉爱军, 陆建伟, 李苏平, 井昶雯[7]2015年在《树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖及CyclinD1、p16表达的影响》文中指出目的探讨树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖及CyclinD1、p16表达的影响,进一步研究其抗胃癌的可能机制。方法培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞法检测树舌多糖对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。实时荧光定量法检测树舌多糖作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后CyclinD1及p16的表达情况。结果随着树舌多糖浓度增高和作用时间的延长,对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比有显着性差异(P<0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡,其凋亡率随树舌多糖浓度增加而提高。实时荧光定量法检测显示,随着树舌多糖浓度的增加,CyclinD1表达逐渐减少,p16表达逐渐增加。树舌多糖浓度0.5mg/ml,1.0 mg/ml时,CyclinD1及p16表达存在显着性差异(P<0.05)。结论树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,CyclinD1呈现低表达,p16呈现高表达,由此推测,CyclinD1表达下调与p16表达上调可分别发挥细胞周期的正、负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。
陈靓, 崔开宇, 吴勇, 杨伟峰[8]2017年在《补肾活血方对老年大鼠心脏自由基代谢及p16蛋白表达的影响》文中研究说明目的观察补肾活血方对老年大鼠心脏自由基代谢和p16蛋白表达的影响,探讨其对衰老大鼠心脏的保护作用机制。方法 100只大鼠随机分为青年对照组、老年对照组和补肾活血方高、中、低剂量组,每组20只。各给药组给予相应药物灌胃,每日1次,连续16周。末次给药后1 h,将大鼠麻醉后取血清和心脏。测定血清和心肌组织一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;免疫组化检测心肌组织β-半乳糖苷酶和p16蛋白表达。结果与老年对照组比较,补肾活血方高剂量组大鼠血清NO含量和CAT、SOD活性显着升高(P<0.05),补肾活血方各剂量组MDA含量显着降低(P<0.01);补肾活血方高剂量组大鼠心肌组织NO含量和SOD活性显着升高,MDA含量显着降低(P<0.05),补肾活血方各剂量组CAT活性显着升高(P<0.05,P<0.01);补肾活血方各剂量组心肌组织β-半乳糖苷酶和p16蛋白表达降低。结论补肾活血方通过抗氧化损伤和抑制抑癌基因p16表达,发挥抑制老年大鼠心肌老化的作用。
韩鹦赢, 沈鹏[9]2017年在《长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因1在肺腺癌中的表达及生物学意义研究》文中认为目的探讨长链非编码核醣核酸牛磺酸上调基因1(lncRNA-TUG1)在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法选取2012年1月-2014年12月间于天津市第一中心医院胸外科行手术切除的肺腺癌患者的肿瘤组织及对应癌旁组织40例。运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测lncRNA-TUG1在组织中的表达水平,分析lncRNA-TUG1表达与患者临床病例资料间的相关性;通过si RNA沉默人肺腺癌A549细胞中lncRNA-TUG1的表达,采用噻唑蓝实验检测沉默lncRNA-TUG1后A549细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,qRT-PCR及Western blot检测P16表达变化。结果 lncRNA-TUG1在肺癌组织中表达水平高于对应癌旁组织(t=3.873,P=0.000),肺癌组织中lncRNA-TUG1高表达与肿瘤直径增大(P=0.033)及高TNM分期(P=0.045)相关;lncRNA-TUG1特异性si RNA转染A549细胞后可抑制细胞增殖(P=0.041)并上调凋亡细胞比例(t=3.206,P=0.007);qRT-PCR及Western blot结果证实,沉默lncRNA-TUG1后可促进P16 m RNA及蛋白表达水平(P=0.000)。结论 lncRNA-TUG1在肺腺癌组织中表达上调并与肿瘤恶性临床病理特征有关,lncRNA-TUG1可能通过下调抑癌基因P16的表达来促进肺腺癌生长。
庞荣清, 王力, 刘春生, 曹现宝, 张悦[10]2003年在《环磷酰胺对喉癌Hep-2细胞端粒酶活性及p16表达的影响》文中研究指明目的 观察环磷酰胺对人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞端粒酶活性及其p16表达的影响 ,以揭示环磷酰胺的抗癌机制。方法 运用体外细胞培养、端粒酶重复序列扩增 酶联免疫吸附法 (TRAP ELISA)及流式细胞技术观察、分析不同浓度的环磷酰胺作用 72h的Hep 2细胞。 结果 环磷酰胺能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞 p16基因的表达增强。端粒酶活性下调与p16基因表达紧密相关。 结论 环磷酰胺能下调端粒酶活性、诱导细胞增强p16的表达 ,这可能是环磷酰胺抗癌作用的重要机制之一
参考文献：
[1]. 益气活血法对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响[C]. 刘庆生, 王小奇, 蔡丹莉, 叶彬, 来丽群. 第二十五届全国中西医结合消化系统疾病学术会议论文集. 2013
[2]. 复方莪术散对子宫内膜异位症患者CA125、CA199、CyclinD、P16的影响[D]. 魏明. 天津医科大学. 2015
[3]. p16甲基化在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制研究[D]. 朱伯谦. 东南大学. 2018
[4]. p16表达下调对hUC-MSCs和APP+鼠的抗衰老作用[D]. 韩康. 郑州大学. 2016
[5]. FHIT、P53和P16在子宫颈病变中的表达及意义[D]. 辛志峰. 青岛大学. 2007
[6]. 白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤免疫作用的影响[D]. 古学文. 广州中医药大学. 2008
[7]. 树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖及CyclinD1、p16表达的影响[J]. 吉爱军, 陆建伟, 李苏平, 井昶雯. 中国肿瘤外科杂志. 2015
[8]. 补肾活血方对老年大鼠心脏自由基代谢及p16蛋白表达的影响[J]. 陈靓, 崔开宇, 吴勇, 杨伟峰. 中国中医药信息杂志. 2017
[9]. 长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因1在肺腺癌中的表达及生物学意义研究[J]. 韩鹦赢, 沈鹏. 中国现代医学杂志. 2017
[10]. 环磷酰胺对喉癌Hep-2细胞端粒酶活性及p16表达的影响[J]. 庞荣清, 王力, 刘春生, 曹现宝, 张悦. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2003
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