李霞
永州市疾病预防控制中心 湖南永州 425000
【摘 要】目的：分析应用3种流感病毒检测方法检测流感样病例病原结果。方法：选取永州市疾控中心2015年1月～2016年1月采集到的100份流感样病例（influenza—like illness，ILI）样品作为研究对象，分别采用胶体金法、逆转录-聚合酶链式反应法（reverse transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）、细胞培养法对样品进行检测，比较三种方法阳性检出率，并用RT-PCR法分析流感病毒分型。结果：在对100份ILI样品分别进行胶体金法、RT-PCR法、细胞培养法检测后，阳性检出率分别为85%、61%、33%，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）；RT-PCR法分析病毒分型结果分别为B型（27%）、H3N2型（31%）、H1型（3%），年龄分布以20岁～29岁为主21株（21%）。结论：综上所述，胶体金法检测流感病毒敏感性最高，其次为RT-PCR法、细胞培养法。但胶体金法检测流感病毒容易出现假阳性[5]， RT-PCR法用于检测流感病毒特异性最高，流感病毒的分型须用RT-PCR法进行。
【关键词】流感样病例；胶体金法；逆转录-聚合酶链式反应法；细胞培养法
流行性感冒病毒（influenza virus）简称为流感病毒，为正粘病毒科（Orthomyxoviridae）的代表，根据目前临床研究证实，流感病毒共包含甲型流感病毒（Influenza A virus）、乙型流感病毒（Influenza B virus）、丙型流感病毒（Influenza C virus）三个类型[1]。随着不良生活习惯、失衡的饮食结构等因素影响，机体免疫力处于下降趋势，在应对流感病毒的侵袭时无法做出有效抵抗，使得流感患者发病率呈现出显著上升态势，已经成为世界范围内的公共健康问题之一。由于流感病毒亚型数量日益多元化，使得流感病毒带来的危害性与日俱增，给疾控工作带来较大压力。流感样病例病原结果以及型别鉴定逐渐成为疾控工作内容的重中之重[2]。鉴于此，本次研究围绕3种流感病毒检测方法检测流感样病例病原结果展开深入分析，现将结果报道如下：
1 资料与方法
1.1一般资料
选取永州市疾控中心2015年1月～2016年1月采集到的100份ILI样品作为研究对象，其中男性58例、女性42例；患者年龄6个月～65岁，平均年龄（35.5±1.5）岁；ILI样品采集时体温38℃～42℃，平均体温（40.0±1.0）℃。纳入标准：①流感样病例诊断标准符合中国疾病预防控制中心（Chinese Center For Disease Control And Prevention，CDC）颁布的《全国流感监测方案（2010年版）》内容者；②体温≥38℃者；③伴有明显咳嗽、咽痛之一或二者兼具者。排除标准：①体温正常者；②经实验室诊断证实为流感者。
1.2方法
本次研究采集到的100份ILI样品分别采用胶体金法、RT-PCRF法、细胞培养法进行检测。胶体金法：采用上海之江生物科技股份有限公司生产的甲、乙型流感病毒核酸联合测定试剂盒进行现场检测。RT-PCR法：采用上海之江生物科技股份有限公司生产的流感病毒A+B及甲型流感病毒H1N1亚型、H3N2亚型核酸测定试剂盒进行检测，流感病毒型别鉴定采用RT-PCR法进行。上述病毒检测方法所有操作步骤严格按照试剂盒说明书要求进行。细胞培养法：采取狗肾传代细胞培养法（Madin-Darby canine kidney，MDCK）进行检测，病毒类型鉴别采用血凝实验和血凝抑制实验进行测定[3]。
1.3观察指标
此次研究选取的观察指标为流感病毒阳性检出率、病毒分型及年龄分布。
1.4统计学方法
本次研究当中的所有数据均采用SPSS17.0统计软件进行处理，计数资料采用率（%）表示，以卡方检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1流感病毒阳性检出率比较
在对100份流感样病例样品分别进行胶体金法、RT-PCR法、细胞培养法检测后，阳性检出率分别为85%、61%、33%，组间差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表1所示。
3 讨论
流感病毒具有起病隐匿、发病突然、传播性强、易于诱发严重并发症等特征，如果没有得到有效治疗而导致病情迁延、进一步恶化，则将会诱发病毒性肺炎、合并呼吸衰竭、多脏器功能损伤等重症疾病，甚者危及患者生命安全[4]。因此，永州市地处中亚热带大陆性季风湿润气候区，全面降水充沛、一年四季分明，给流感病毒的滋生与传播提供了天然的“温床”，并且该地区地形以山地为主，空气流通性较差，进一步增加了流感传播的危害性。因此，针对流感病毒进行快速检测并准确分型，给予其对症治疗成为提高流感病毒患者临床治疗效果的关键之所在。
本次研究中通过收集100份ILI样品，分别采用胶体金法、RT-PCR法、细胞培养法对流感病毒进行检测，结果发现，胶体金法对流感病毒敏感性最高，阳性检出率85%，其次为RT-PCR法，阳性检出率61%，而当前该市疾控中心日常监测所采用的细胞培养法阳性检出率仅为33%，三种流感病毒检测方法阳性检出率相比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。在对分离出的流感病毒株进行分型鉴定后发现，该市流感病毒以H3N2型为主，占比31%，其次为B型，占比27%，而H1型仅为3%，比较少见。患者年龄分布集中在20岁～29岁，占比为21%，提示永州市疾控中心应加强此年龄段人群的流感病毒监测。就检测结果而言，细胞培养法虽然是目前日常监测最为常用的检测方法，具有操作简便、易于判断等特征，但是受制于检测技术的限制以及样品存储、运输等因素影响，其阳性检出率仍然有待于进一步提高，以此来降低流感病毒检测假阴性率。而胶体金法在检测上对于流感病毒具有较高的敏感性及特异性，对样品运输及保存要求较低，可以作为今后流感病毒检测工作的首选方法[5]。
综上所述，胶体金法检测流感病毒敏感性最高，其次为RT-PCR法、细胞培养法。而胶体金法检测流感病毒容易出现假阳性， RT-PCR法用于检测流感病毒特异性最高，流感病毒的分型须用RT-PCR法进行。
参考文献：
[1]王芳，孙宇，朱汝南，等.流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用[J].中国循证儿科杂志，2012，10（04）：289-292.
[2]张巍巍，张丽荣，胡钰.3种流感病毒检测方法的比较和应用[J].中国实验诊断学，2012，11（09）：1642-1645.
[3]颜玉炳，蒋丽娜，刘红莲，等.流感样病例中流感病毒阳性检出率的相关因素分析[J].中华疾病控制杂志，2015，14（03）：310-312.
[4]蒋小娟，刘新凤，李治平.兰州市流感样病例选择对流感病毒检出率的影响因素分析[J].中国病毒病杂志，2014，10（01）：39-42.
[5]唐保晖，黄丽华，韦晓仙.实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的应用研究[J].中国热带医学，2013，12（01）：22-24.
论文作者:李霞
论文发表刊物:《航空军医》2016年第11期
论文发表时间:2016/7/25
标签：流感论文; 病毒论文; 胶体论文; 阳性论文; 检出论文; 病例论文; 永州市论文; 《航空军医》2016年第11期论文;