大庆油田总医院 检验科 163001
摘要：目的 研究分析红细胞冷凝集对血液分析仪检测的影响和处理方法。方法 此次研究的对象是选择20例红细胞冷凝集标本，在3种不同条件下使用全自动血细胞分析仪XE-5000进行检测：①普通室温（20 ℃）；②37 ℃水浴30 min后；③25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min后。测定3种不同条件下红细胞﹑血红蛋白﹑红细胞各项参数﹑白细胞﹑血小板的值。结果 20 ℃条件下，20例标本红细胞、白细胞和血小板均有异常报警；37 ℃水浴30 min后，其中15例标本无异常报警，5例标本红细胞、白细胞和血小板均有异常报警；25 ℃条件下37 ℃水浴30 min，20例标本均无异常报警。3种条件下检测结果中，血红蛋白（HGB）、白细胞（WBC）和血小板（PLT）差异无统计学意义（P>0.05）；红细胞（RBC）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均红细胞体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）差异有统计学意义（P<0.05）。结论 红细胞冷凝集对WBC、HGB和PLT检测结果基本无影响。对RBC、HCT、MCV、MCH和MCHC检测结果有影响，在日常工作中，应引起重视，并对红细胞冷凝集标本进行科学处理。
关键词：冷凝集；血细胞分析仪；冷凝集素
[Abstract] Objective To study and analyze the effect of red blood cell cold agglutination on the detection of blood analyzer and the treatment methods. The object of this research method is to select 20 cases of red blood cells using cold agglutination specimens under 3 different conditions of the automatic blood cell analyzer to detect XE-5000：common room temperature（20 DEG C）；the 37 DEG C water bath after 30 min；the temperature of 25 DEG C，37 C water bath for 30 min. The parameters of red blood cells，hemoglobin，red blood cells，white blood cells and platelets were measured under 3 different conditions. The temperature of 20 DEG C，20 samples of red blood cells，white blood cells and platelets were abnormal alarm；37 DEG C water bath for 30 min，of which 15 cases were no abnormal alarm，5 samples of red blood cells，white blood cells and platelets were abnormal alarm；the temperature of 25 DEG C for 37 DEG C water bath for 30 min，20 cases were no abnormal alarm. Under the 3 conditions of detection results，hemoglobin（HGB），white blood cell（WBC）and platelet（PLT）showed no significant difference（P>0.05）；red blood cell（RBC），hematocrit（HCT），red cell mean corpuscular volume（MCV），mean corpuscular hemoglobin content（MCH）and the mean corpuscular hemoglobin concentration（MCHC）difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion the cold agglutination of red blood cells has no effect on the results of WBC，HGB and PLT. It has an impact on the results of RBC，HCT，MCV，MCH and MCHC. In the daily work，attention should be paid to the scientific treatment of the cold agglutination specimens of red blood cells.
[Key words] condensation collection；blood cell analyzer；cold agglutinin
血细胞分析仪是临床实验室检查常用的检验仪器之一，血细胞分析结果的质量直接关系到对病人的诊断和分析，但在血常规的日常检测中经常会遇到很多影响因素，例如：血小板假性减少症，红细胞凝集（冷凝集），脂血/溶血，有核红细胞，白细胞增多，疟疾，采样、抗凝不当等。因此，在血常规的检测过程中做好质量控制是至关重要的。在血细胞分析中我们发现有些患者的红细胞极容易发生凝集，使RBC、HCT假性降低，MCV、MCH、MCHC假性升高。造成血常规的检验结果不正常，对临床做出错误的引导。为了及时发现和准确排除红细胞冷凝集对血细胞分析仪的影响，该实验选择了从2013年1月—2014年5月共20例红细胞冷凝集的标本在3种不同条件下检测：①普通室温（20 ℃）；②37 ℃水浴30 min后立即检测；③25 ℃条件下37 ℃水浴30 min后立即检测，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 仪器与试剂 日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪及配套原装试剂、日本奥林巴斯光学株式会社生产的双筒显微镜。原厂配套正常浓度和高浓度质控品。
1.1.2 标本 从2014年1月—2016年5月我院住院患者血常规标本中，通过镜检筛选出20例红细胞冷凝集标本。所有标本均按常规全血细胞检测，血细胞分析仪每半年校准一次。每日测定正常浓度和高浓度2个浓度的质控品，结果均在控。标本通过静脉采血2 mL，加入EDTA-K2抗凝的真空管内，轻轻地颠倒混匀。于采集后4 h内，在XE-5000全自动血液分析仪检测完毕。其中男性12人，女性8人。其中包括肺炎支原体10例，传染性单核细胞增多症3例，多发性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病 2例，恶性淋巴瘤2例。
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1.2 方法
将20例红细胞冷凝集的标本采用不同的方法处理后，在日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血液分析仪检测。血液分析仪所使用的试剂为原厂配套。显微镜为日本奥林巴斯光学株式会社生产。瑞士吉姆萨染液由贝索生物技术公司提供。①普通室温（20 ℃）；②37 ℃水浴30 min；③25 ℃条件下，37 ℃水浴30 min。记录3种不同条件下红细胞﹑红细胞压积、血红蛋白﹑红细胞各项参数﹑白细胞﹑血小板的值。该仪器以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，电阻抗法测定红细胞和血小板，比色法测定血红蛋白。以上3种方法检测的同时观察管壁红细胞聚集的情况，检测各推两张血涂片，瑞士吉姆萨染色，双筒显微镜镜检。
1.3 统计方法
使用SPSS17.0软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验。
2 结果
红细胞冷凝集的标本在3种不同的环境下检测时可发现：普通室温时，红细胞、白细胞、血小板均有异常报警（Agglut和Turb/Hb）。红细胞直方图可见异常的大红细胞峰。管壁上有细砂粒样凝集颗粒；血涂片发现血膜上有许多细小颗粒，显微镜下可见红细胞大量聚集在一起。
37 ℃水浴30 min后，15例标本未发现抗凝管管壁有凝集颗粒，试管壁上的小片状凝块消失，红细胞分布图形正常，无报警信息。镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。其余5例标本仍然提示红细胞、白细胞、血小板有异常报警（Agglut和Turb/Hb），红细胞直方图异常。
室温25 ℃时，标本37 ℃水浴30 min后，20例标本均未出现报警信息。管壁无凝集颗粒，镜检血涂片，可见红细胞均匀分布。
①普通室温（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义（P>0.05）。而红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）的差异有统计学意义（P<0.05）；②37℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min的结果比较，WBC、HGB、PLT差异无统计学意义（P>0.05）。而红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）的差异有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
冷凝集素是冷反应型抗红细胞抗体，在受冷后可使红细胞出现聚集[1]。在0～4 ℃时最易和红细胞膜抗原结合，是较强的使红细胞凝集的一种自身免疫性抗体，可存在于正常人的血清中，抗体多数是IgM型。低效价的冷凝集素一般无临床意义，通常16 ℃以下可使红细胞发生凝集，30 ℃以上不发生凝集[2]。这种自身凝集反应是可逆的，当环境温度升高后，凝集的红细胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗体，但滴度较低，在1∶16以下。正常情况下，不会导致不良反应。但当机体处于感染等病理情况时，机体的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反应[4]。很多疾病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原体感染、癌症、白血病、妊娠等都可以出现冷凝集反应[5]。
该实验中，20例标本在普通室温（20 ℃），37 ℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min 3种条件测定时，WBC﹑PLT﹑HGB的计数结果差异无统计意义（P>0.05）。在研究中发现，当标本出现冷凝集时，数个红细胞凝集在一起，血细胞分析仪只对体积相当的红细胞或小红细胞进行了分析，而大红细胞团块完全被忽略，这就导致了不合逻辑的红细胞计数降低和高MCV。而HGB是红细胞溶解后采用比色方法测定，故冷凝集对HGB无影响。对于由RBC、HGB、HCT计算的参数MCV、MCH、MCHC则造成假性偏高。很多文献[6-7]报道了标本发生冷凝集时的处理方法，如经37 ℃水浴不同时间后立即进行检测，进行血浆置换，重新采血后立即测定。37 ℃水浴后在不同的仪器上检测。对试剂和样本进行双重加温，这些方法使冷凝集的标本得到了很好地处理。在本实验中，37 ℃水浴30 min纠正了15例冷凝集标本，但仍存在5例标本出现冷凝集现象。而在水浴的同时提高室内温度到25 ℃，对于5例冷凝集素效价高﹑红细胞聚集程度强的标本得到了很好地处理。从表中可以看出，20例标本在37 ℃水浴30 min和25 ℃条件下37 ℃水浴30 min两种条件检测时，红细胞、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）的差异有统计学意义（P<0.05）。这与石恩荣在冷凝集对血液分析仪检测结果的影响的报道是一致的。在该实验中WBC、HGB、PLT差异无统计学意义（P>0.05）。由于XE-5000是以半导体激光器流式细胞技术结合荧光染色技术检测白细胞，故对WBC没有影响。冷凝集对PLT的影响报道并不一致，该实验显示PLT计数未受影响。在冷凝集的标本检测中，重新采血不但增加了患者的压力，而且病房标本立即检测很难做到。进行血浆置换可造成血小板和白细胞的丢失，置换次数越多丢失现象越严重。这可能与吸弃血浆时WBC﹑PLT被一起吸掉有关。在该实验中，水浴的同时升高温度避免了让患者重新采血的压力，避免了血浆置换WBC﹑PLT的丢失，且操作简单，对冷凝集的处理效果较好。一般的实验室很容易做到。
综上所述当遇到疑似冷凝集标本，如RBC，HGB比例严重不符时（正常人HGB和RBC的比例为30∶1），首先观察试管内标本状态，仔细观察红细胞分布的直方图和出现的报警信息，同时检测冷凝素的效价。当标本确定为冷凝集后，37 ℃水浴30 min后，可以利用空调提高室内的温度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影响。在日常工作中，尤其是冬天温度较低的时候，经常会遇到标本发生冷凝集情况。正确识别和处理冷凝集标本的异常检测结果，对临床准确评估患者的病情非常重要。可避免发出错误的检验报告，影响临床检验治疗
参考文献：
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[5]丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社，1997：40-41.
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[7]杨宏霞，江政松，焦连亭.一例红细胞冷凝集在2台血液分析仪上检验结果的分析[J].检验医学，2012，27（1）：75-76.
论文作者:庞玉军
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年第3期
论文发表时间:2018/4/13
标签：红细胞论文; 标本论文; 水浴论文; 血红蛋白论文; 血细胞论文; 条件下论文; 白细胞论文; 《中国误诊学杂志》2018年第3期论文;