王玉红 刘侠 孙秀荣（河南省安阳市中心血站 河南安阳 455000）
【摘要】目的 观察ACP215血细胞处理机洗涤制备解冻去甘油红细胞使用羟乙基淀粉20NACL与不使用羟乙基淀粉20NACL的效果，并对其检测结果进行初步分析。方法 采用48袋Rh（D）阴性400毫升全血，先甘油冰冻保存，然后解冻将其随即分成两组，实验组不采用羟乙基淀粉20NACL制备解冻去甘油红细胞，对照组采用羟乙基淀粉20NACL制备解冻红细胞。按照相关标准分别对实验组和对照组的血红蛋白含量，游离血红蛋白含量，甘油含量，残留白细胞含量试验进行检测分析。结果 实验组去除甘油残余量、游离血红蛋白明显低于对照组，差异具有统计学意义（P〈0.05)。但是两种方法制备产品中白细胞残余含量，血红蛋白的差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 不使用羟乙基淀粉20NACL制备解冻去甘油红细胞操作简单，易行，且符合国家标准，值得推广。
【关键词】 羟乙基淀粉20NACL ACP215血细胞处理机 Rh（D）阴性 解冻去甘油红细胞
【中图分类号】R197.39 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）34-0070-02
Smith首先发现低温保存红细胞方法 ,并采用甘油作为保护剂冷冻保存红细胞试验成功以来 ,该方法经过多年的研究,得到不断的改进 ,现已成为现代输血中唯一能长期保存红细胞的方法,保存期可达几年至几十年[1]。目前最常见的红细胞冻存保护剂为甘油，而且使用冻存的红细胞前须经过一定的洗涤程序才能将甘油彻底去除。国内主要采用的ACP215血细胞自动处理仪洗涤制备解冻去甘油红细胞，制备过程采用梯度法去甘油，使用9%浓盐液、羟乙基淀粉20NACL、0.9%等渗生理盐水处理，此方法操作耗费羟乙基淀粉20NACL原材料、操作繁琐。在了解羟乙基淀粉20NACL的作用后，本站采用了ACP215血细胞自动处理仪，制备过程中不应用羟乙基淀粉20NACL液体，两种不同液体组洗涤制备解冻去甘油红细胞，具体方法比较如下。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 9%氯化钠（160ml北京博得桑特输血器材科技开发中心），0.9%氯化钠（山东威高集团高分子制品股份有限公司），羟乙基淀粉20NACL(500ml,山东华鲁制药有限公司)去甘油耗材（美国血液技术公司），无菌接口机（日本泰尔茂），电子秤，热合机（韩国森通），ACP215血细胞处理机（美国血液技术公司）。
1.2 方法 本血站采用采集的6d内且各项指标检测均合格的48袋Rh（D）阴性全血（400ml/袋）制备成冰冻红细胞，并将其置于-80℃条件保存。洗涤前将其置于38℃恒温水浴箱解冻，解冻去甘油红细胞用两组不同液体操作方法，并将其随机等分成2组，采用机器自动化进行操作，每组24袋。对照组ACP215血细胞处理机使用羟乙基淀粉20Nacl洗涤制备解冻去甘油红细胞；实验组ACP215血细胞处理机不使用羟乙基淀粉20NACL洗涤制备解冻去甘油红细胞。
1.2.1对照组ACP215血细胞使用羟乙基淀粉20Nacl处理机洗涤制备解冻去甘油红细胞
1)将冰冻红细胞放入38℃水箱中融化（一个单位10分钟，两个单位14分钟）然后称重。
2)打开血细胞电源，并通过自检。
3)耗材中红色管道无菌对接血液。
4)按MODLFY PROJRAM键选择DE—GLYCEROLIIATION (去甘油化)程序，按YES键确认。
5)装入耗材
6)蓝色管道连接9%氯化钠，黄色管道连接羟乙基淀粉20NACL（羟乙基淀粉20NACL添加400毫升后换0.9%氯化钠）。按YES键确认。
7)按NO键不作校准
8)确认离心机盖是否锁，按YES键继续。
9)测试离心机，等待一分钟，如果没有噪音，按YES键确认。
10)按YES键启动耗材核对表。
11)确认管道位于管路感知器中，按YES键继续。
12)确认离心杯正确安装在离心机中，按YES键继续。
13)打开添加液封口，按YES键确认。
14)红细胞于红色纹理管道无菌连接，按YES键确认。
15)红细胞固定在摇床上，按YES键确认。
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16)按SAVE PROGRAME 两次保存姓名。
17)按MODLFY PROJRAM键设置参数（称重红细胞量减去30g皮重）。
18)按两次START 键开始。
19)完毕后解除耗材，关机。
处理解冻红细胞过程中的依次液体添加：
1)向血液中添加9%氯化钠160毫升（2单位）。
2)向血液中添加羟乙基淀粉20NACL400毫升（2单位）。
3)向血液中添加0.9%氯化钠1360毫升（两个单位血液的量）。血液经过生理盐水稀释两次，洗涤六次。
4)向血液中添加240毫升添加液（添加液为0.9%生理盐水）。
1.2.2实验组ACP215血细胞不使用羟乙基淀粉20NACL处理机洗涤制备解冻去甘油红细胞
a)将冰冻红细胞放入38°C水箱中融化（一个单位10分钟，两个单位14分钟）然后称重。
b)打开血细胞电源，并通过自检。
c)耗材中红色管道无菌对接血液。
d)按MODLFY PROJRAM键选择DE—GLYCEROLIIATION (去甘油化)程序，按YES键确认。
e)装入耗材
f)蓝色管道连接9%氯化钠，黄色管道连接0.9%氯化钠。按YES键确认。
g)按NO键不作校准
h)确认离心机盖是否锁，按YES键继续。
i)测试离心机，等待一分钟，如果没有噪音，按YES键确认。
j)按YES键启动耗材核对表。
k)确认管道位于管路感知器中，按YES键继续。
l)确认离心杯正确安装在离心机中，按YES键继续。
m)打开添加液封口，按YES键确认。
n)红细胞于红色纹理管道无菌连接，按YES键确认。
o)红细胞固定在摇床上，按YES键确认。
p)按SAVE PROGRAME 两次保存姓名。
q)按MODLFY PROJRAM键设置参数（称重红细胞量减去30g皮重）
r)按两次START 键开始。
s)完毕后解除耗材，关机。
处理解冻红细胞过程中的依次液体添加：
a)向血液中添加9%氯化钠160毫升（两个单位血液的量）。
b)向血液中添加0.9%氯化钠1760毫升（两个单位血液的量）。血液经过生理盐水稀释两次，洗涤六次。
c)向血液中添加240毫升添加液（添加液为0.9%生理盐水）。
1.3 检测主要项目
1.3.1 质量标准 [2]400毫升制备冰冻解冻去甘油红细胞质量控制主要项目 血红蛋白含量≥32g,游离血红蛋白含量≤1g/L，白细胞残留量≤4×107 ，甘油残余量≤10g/L。
1.3.2 统计学分析 应用SPSS16.0分析，采用t检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义，以P＞0.05在统计学上无明显差异。
2 结果
两组不同液体处理的冰冻解冻去甘油红细胞终末产品的主要质量标准项目血红蛋白含量、游离血红蛋白浓度、白细胞残留量、甘油含量比较见表1.
表1 两种不同方法洗涤去甘油质量结果比对主要指标 （n＝24）
组别血红蛋白含量游离血红蛋白浓度白细胞残留量甘油残余含量
（%）(g/L)( %)(g/L)
实验组40.01±3.70.37 ±0.07≤0.03×1071.21±0.37
对照组38.2±3.520.62±0.92≤0.04×1073.40±0.01
P＞0.05P＜0.05P ＞0.05P＜0.05
3 讨论
从上述数据可以看出，两种方法比较：制备的解冻去甘油红细胞均符合国家质量标准，但实验组（不加羟乙基液体的）数据组显示去除甘油效果更佳。在解冻去甘油过程中为什么不使用羟乙基20Nacl,因为羟乙基20Nacl的作用是让红细胞解聚开。手工制备解冻去除甘油红细胞时会出现摇摆不均匀的情况，这时候红细胞聚集在一起很难散开，直接影响到解冻红细胞终末产品的去甘油质量标准。现在国内普遍在使用ACP215自动处理仪制备解冻去甘油红细胞，红细胞在摇床上均匀摇摆，可以排除手工制备解冻红细胞聚集现象。因此现在不需要用羟乙基20Nacl制作，直接在机器处理过程中首先加入9%浓盐水后直接加0.9%等渗生理盐水即可，省略加入羟乙基20Nacl步骤，操作过程简单化，时间节约10-20分钟，同时节约耗材，ACP215全自动处理仪制备去甘油解冻红细胞使用实验组的操作方法去除甘油较彻底，过程简单化,而且产品符合国家标准,值得推广使用该实验组操作方法。
参考文献
[1]赵宏祥,戴为人,杜玲霞.冰冻解冻红细胞的制备及临床应用.中国生物制品学杂志，2004.01.
[2]中华人民共和国国家标准.全血及成分血质量要求［S］.GB18469-2012 .
论文作者:王玉红 刘侠 孙秀荣
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第34期供稿
论文发表时间:2014-1-23
标签：红细胞论文; 甘油论文; 乙基论文; 淀粉论文; 血细胞论文; 实验组论文; 氯化钠论文; 《中外健康文摘》2013年第34期供稿论文;