魏鹏[1]2000年在《细胞外基质在猕猴月经周期和早期妊娠子宫中的表达》文中提出在哺乳动物胚胎着床过程中伴随着多种细胞增殖、细胞迁移、细胞识别和组织结构 的重建。细胞外基质在这一过程中起着很重要的作用。 由于对人类胚胎着床过程中这些细胞外基质蛋白的研究存在很大的困难，所以选择 了与人有较近亲缘关系的猕猴作为实验对象，利用层粘连蛋白、纤粘连蛋白及IV型胶 原的特异性抗体检测月经周期及早期妊娠不同时期猴子宫的表达情况，主要实验结果 为： 1．纤粘连蛋白主要在猕猴子宫内膜基质和血管内皮内表达。血管内皮内表达量比较 恒定。基质内主要在近腔上皮区域内表达，在不同时期表达量不同。在月经周期增殖 期子宫基质中表达量逐渐增加，在第12－16天表达量达到最高，之后减少；早期妊娠 子宫基质内第1-11天表达量比较恒定；模拟妊娠子宫基质内第1-7天表达量逐渐增 加，第7天表达量最高，之后消失。 2．层粘连蛋白主要在猕猴子宫腔上皮、腺上皮细胞、基质内以及基板内表达。层粘连 蛋白在各时期基板中都有表达。在腺上皮中，月经周期第6-16天表达较高。早期妊 娠第1-7天表达量较高，其中第1天最高，第5－7天次之，而第9-11天中未检测到。 模拟妊娠第0－9天腺上皮中，第0-3天阳性表达，第7－9天逐渐增高。腔上皮中的表 达情况与晚上皮中类似，第9天最强。在月经周期子宫基质内未发现规律性表达。早 期妊娠子宫近上皮区域基质中第1-7天为阳性，第7天最强，第9-11天消失。模拟 妊娠近上皮区域基质中第0－9天表达逐渐增强。 3．IV型胶原在血管内皮、基板、基质和平滑肌中广泛表达，腔上皮和腺上皮中则为 阴性。血管内皮中在月经周期分泌期晚期表达量最低；早期妊娠第1-11天中表达量 逐渐增加，模拟妊娠中则逐渐减弱。基质近肌层的区域内在月经周期分泌期表达量较 高，在早期妊娠过程中表达量逐渐增加，模拟妊娠情况和早期妊娠类似。 从二种细胞外基质蛋白的表达情况来看，层粘连蛋白和纤粘连蛋白在增殖期晚期和 分泌期早期内表达量显著高于其它时期：在早期妊娠过程中从受精到着床的时期内表达 较高，可能在早期胚胎与母体子宫的识别及着床过程中起重要作用。IV型胶原在月经 周期和早期妊娠子宫血管内表达情况似乎表明与月经期血管脆性增强有关；而IV型胶 原在早期妊娠血管内以及月经周期、早期妊娠基质中的表达情况可能与子宫接受态的建 立及蜕膜化过程有关。
巨向红[2]2006年在《牦牛胚胎附植过程中细胞凋亡及其通路的研究》文中研究表明为了阐明:(1)牦牛胚胎的附植模式、相关细胞的变化规律及滋养巨细胞(TGC)的迁移规律,(2)牦牛胚胎附植过程中子宫内膜细胞(EC)和滋养层细胞(TC)的凋亡规律,(3)增殖因子Ki-67在牦牛胚胎附植过程中的表达变化特征,(4)凋亡相关蛋白Fas/FasL、TNFα/TRADD(TNFα相关的死亡受体)、Bcl-2/Bax、caspase-3和caspase-9在牦牛胚胎附植过程中的表达特征及其细胞发生凋亡的可能通路,本研究选用青海省大通牦牛育种场成年健康母牦牛15头,分别在配种后的第16、18、20、22和24天屠宰后取子宫样品进行实验(每组3头)。运用光镜、扫描电镜和透射电镜观察了牦牛胚胎附植过程中EC、胎儿TC和黏附结构的变化规律;用光镜、电镜、原位凋亡细胞荧光检测法(DAPI法)和DNA原位末端标记(TUNEL法)检测了胚胎附植过程中牦牛EC和TC凋亡的变化规律;用免疫组织化学法(SP法)检测了牦牛胚胎附植过程中EC和TC凋亡相关蛋白Fas/FasL、TNFα/TRADD、Bcl-2/Bax、caspase-3和caspase-9的表达特征。结果发现:(1)牦牛胚胎附植开始于妊娠的17-18天,此时胎儿TC与子宫内膜上皮(EEC)发生了轻微的并置与黏附,滋养层单核或双核细胞(BNC)侵入子宫上皮是附植开始的标志。整个胚胎附植过程一直伴随TC侵入子宫内膜或与子宫内膜上皮细胞发生融合的现象。双核细胞最早出现在妊娠18天。大量的糖原颗粒分布于上皮细胞游离端,并向滋养层扩散。TC与EEC间以微绒毛镶嵌为主要连接方式,有时出现桥粒或简单连接。牦牛妊娠期子宫上皮多核细胞,至少部分是由滋养层细胞的迁移或与子宫内膜融合而产生;(2)在胚胎附植过程中,各种细胞均可发生凋亡。HE染色时凋亡细胞表现为核浓缩或形成凋亡小体而深染,胞质有空泡化现在。DAPI标记时凋亡细胞核发强烈的蓝色荧光。DNA末端原位标记(TUNEL)下凋亡细胞核散发强烈绿色荧光,有时可见凋亡小体。在牦牛胚胎附植早期,凋亡细胞的主要特征为核浓缩,而到附植的后期,凋亡细胞的特征则主要为大量凋亡小体的形成及胞浆空泡化,并以单核巨细胞的凋亡为主。子宫内膜基质细胞和血管内皮细胞的凋亡特征为核质浓缩。电镜下凋亡细胞的特征主要为核浓缩、细胞体积变小及大量的凋亡小体形成。牦牛子宫内膜上皮细胞的凋亡率在妊娠16天最低,仅为6.83%。在妊娠的18-22天,凋亡率升高,分别为16.17%,16.0%和13.81%。而到妊娠的第24天最高,达22.82%,与妊娠16天的凋亡率差异显著(P<0.05)。牦牛胎儿TC的凋亡率在附植过程中的变化不大,最高为18.3%(第16天),而最低为13.38%(第18天)。从总体趋势来看,在胚胎附植的过程中,牦牛EEC的凋亡率有增高趋势。而滋养层细胞在附植过程中的凋亡率变化不大。在牦牛胚胎附植的不同阶段,子宫内膜和滋养层上均可见Ki-67阳性细胞。有时阳性细胞在子宫内膜上皮或滋养层中成团分布。在子宫腺上皮细胞中,Ki-67阳性细胞较少。在牦牛胚胎附植过程中,EC中的增殖因子Ki-67阳性细胞率一直较高。在妊娠16天为42.25%,到妊娠18天最高,达57.75%,随后缓慢下降,到妊娠24天时,仅为26.88%。而在滋养层上中的变化规律
马岚[3]2002年在《猕猴胚胎干细胞的分离、鉴定、培养及应用研究》文中进行了进一步梳理本论文以猕猴胚胎干细胞为主要研究对象,在猕猴胚胎干细胞的分离、培养及鉴定方面、猕猴胚胎干细胞体外持续培养体系的建立及优化方面、应用猕猴胚胎干细胞为细胞模型研究LIF对介导胚胎着床的滋养层细胞分化的影响效应方面、以及应用猕猴胚胎干细胞为细胞模型研究三种光敏药物的光敏毒性以及光敏生物活性方面进行了研究。研究主要获得了以下结果:1、通过猕猴卵母细胞体外成熟培养、体外受精和早期胚胎体外培养技术,由4只超排的成年猕猴中共取得92个处于GV期的猕猴卵母细胞,选取其中的22个于HECM-10培养体系培养后,获得了6个高质量的猕猴囊胚,由此自然孵出的囊胚中分离得到6个内细胞团,并由此最终获得1株具有高核仁/胞质比,具有明显的核仁,集落边界清楚,其内的细胞明晰的,具有胚胎干细胞特征的猕猴类ES细胞——RS5细胞。经5个月的连续传代后,RS5细胞仍保持了正常二倍体的核型,其染色体数目与正常猕猴的一样,均为42条。碱性磷酸酶组织化学染色,结果表明为阳性,说明此细胞为未分化态的原始类胚胎干细胞。由胚胎干细胞多能性分化的初步研究结果来看,在高密度和解除抑止的状态下,此RS5细胞是能进一步发展为多种分化细胞的。2、建立了猕猴胚胎干细胞RS366.4体外持续培养、扩增及冻存培养体系。3、白血病抑制因子(LIF)在胚胎着床中起着重要作用??LIF可通过参与人滋养层细胞分化而介导胚泡着床。已有的关于LIF与滋养层细胞分化间关系的研究结果是相互矛盾的。为避免由早期胚胎标本或胎盘来源的细胞滋养层细胞模型的不足,本实验选用由猕猴RS366.4 ES细胞来源的早期分化滋养层细胞为模型进行研究。细胞流式仪结果表明低浓度的LIF可促进绒毛合胞体滋养层的分化,高浓度的LIF可促进绒毛外侵入性滋养层细胞的分化。细胞免疫组化结果则显示经LIF处理后,侵入性绒毛滋养层细胞的标志物之一?? Fibronectin呈阳性。4、北醌化合物为性能优良的光敏剂。本研究首次以R366.4 ES细胞为模型,测试了EA的光敏毒性,并首次报道了EA的光敏生物活性。经不同光照时间处理后,低浓度的光敏化的EA对R366.4细胞均无细胞毒性作用。在此浓度范围内,对于Hce-8693细胞,EA,HA及HB则均以浓度依赖的方式引起其细胞凋亡,其光敏抑制效应顺序为HA > EA > HB。对于B16细胞,EA也以浓度依赖的方式引起其细胞凋亡。这些结果表明EA、HA及HB均有较显著的光敏抑癌生物活性。
参考文献：
[1]. 细胞外基质在猕猴月经周期和早期妊娠子宫中的表达[D]. 魏鹏. 东北农业大学. 2000
[2]. 牦牛胚胎附植过程中细胞凋亡及其通路的研究[D]. 巨向红. 甘肃农业大学. 2006
[3]. 猕猴胚胎干细胞的分离、鉴定、培养及应用研究[D]. 马岚. 中国科学院研究生院（昆明动物研究所）. 2002
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