欧阳高亮[1]2001年在《中国鲎鲎素对人肝癌SMMC-7721细胞诱导分化作用与机理研究》文中进行了进一步梳理应用从中国鲎血液中分离提取的小分子多肽——中国鲎鲎素处理人肝癌SMMC-7721细胞，以分化诱导剂HMBA处理为平行对照，并应用鲎素与HMBA组合进行处理，运用细胞生物学、免疫生物学、生物化学与分子生物学等手段，观察鉴定中国鲎鲎素对人肝癌细胞的生物学效应，并进一步研究鲎素对人肝癌细胞的作用机理。 实验结果表明，3.0ug／mL鲎素、5.0mmol／L HMBA和1.5ug／mL 鲎素+2.0mmol／L HMBA均能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖活动，细胞生长受到抑制，分裂指数下降，集落形成能力降低。生化测定、细胞化学与免疫细胞化学观察显示，经鲎素、HMBA及其组合处理后的SMMC-7721细胞甲胎蛋白和增殖细胞核抗原表达均明显降低，γ-GT和碱性磷酸酶活性明显减弱，而TAT酶活性显着增强。光镜、扫描电镜和透射电镜观察显示经鲎素、HMBA及其组合处理后的SMMC-7721细胞趋于扁平铺展状态，细胞体积增大，核质比例减小；核形状较为规则，核仁数量减少、体积变小，核内常染色质增多而异染色质减少；细胞质内线粒体数量增多、线粒体嵴发达，高尔基体较为典型，粗糙型内质网增多，多聚核糖体减少而游离核糖体增多；细胞表面微绒毛较少，边缘丝状伪足减少而片状伪足增多，表现出明显不同于对照组细胞而与正常细胞相似的形态与超微结构特征。光镜、共聚焦显微镜与免疫荧光观察显示SMMC-7721细胞经鲎素、HMBA及其组合处理后，细胞骨架排列较为有序，微丝减少而微管、中间纤维增加；细胞核骨架纤维排列有序，通过核纤层与中间纤维一起形成贯穿细胞核质的完整的致密网状骨架体系。流式细胞仪检测显示SMMC-7721细胞经鲎素、HMBA及其组合处理后，S期细胞均明显减少，Go／Gl期细胞明显增多，细胞被阻滞于G／G1期。免疫细胞化学与核酸原位杂交检测显示，鲎素、HMBA及其组合均能不同程度地上调SMMC-7721细胞p21WA／：I／CIPl、p16蛋白表达并增强p21WAFI／CIPl mRNA表达，下调突变型p53、Cyclin D1、CDK4、Rb、c-myc蛋白含量并降低c-myc mRNA表达，同时也能有效降低NF-K B、PKC、p185蛋白表达，对bc1-2蛋白表达也具有微弱的下调作用，但不影响TGF-p RⅡ蛋白表达。 研究结果表明，鲎素与分化诱导剂HMBA一样能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞恶性增殖活动，改变人肝癌细胞代谢相关酶活性和肿瘤相关抗原表达，逆转人肝癌细胞的恶性形态与超微结构特征，改变人肝癌细胞骨架与核骨架的构型特征，并将肝癌细胞停滞于G／G，期，从而对人肝癌细胞具有显着的诱导分化作用。其诱导肝癌细胞分化的作用机理与其调节和干预突变型p53、c－myc等癌基因、p21“”“”’小l6等抑癌基因的表达、调控受体酪氨酸激酶P185蛋白介导的RTK干肪信号传导通路以及G蛋白介导的DG－PKC磷脂酞肌醇等细胞信号传导通路具有密切关系。同时低浓度的HMBA与低浓度的鲨素联合应用，可有效降低鲨素或HMBA的作用浓度，并增强其对人肝癌细胞的诱导分化效应。
赵鹏[2]2007年在《中国鲎鲎素Ⅰ抗肿瘤与免疫活性研究》文中认为中国鲎鲎素Ⅰ(Tachyplesin-Ⅰ,简称T-SS)是从古老的海洋生物中国鲎(Tachypleustridentatus,Chinese horseshoe crab)血细胞中分离纯化的一种小分子多肽。现已证实T-SS具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。在前人工作的基础上,对T-SS体内外抗肿瘤活性进行了探讨,并对T-SS体内抗肿瘤实验中的抗肿瘤免疫活性和T-SS对正常小鼠与免疫抑制小鼠的免疫活性作了研究。1、T-SS体外对肿瘤细胞的生长抑制:选用人肝癌细胞系BEL-7402和人宫颈癌细胞系Hela细胞,应用MTT方法检测T-SS对这两种细胞的体外生长抑制作用。T-SS对BEL-7402和Hela细胞的半数抑制浓度IC_(50)分别为6.25μg/ml和5.2μg/ml。T-SS对BEL-7402和Hela细胞生长抑制率最高为62.76%和65.46%,相应的T-SS浓度分别为10μg/ml和8μg/ml。说明T-SS对BEL-7402和Hela细胞体外生长具有一定的抑制作用。2、T-SS体内的抗肿瘤作用:分别建立小鼠移植肉瘤S_(180)与小鼠移植腹水型肝癌H_(22)模型,对荷瘤小鼠的瘤重和生存时间作了研究。用免疫器官重量法、病理组织学方法、白细胞计数法、MTT方法、碳粒廓清法对荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数、免疫器官形态学变化、外周血白细胞数、脾脏T淋巴细胞增殖反应、单核细胞吞噬活性等进行了测定。剂量为0.15mg/kg的T-SS对小鼠肉瘤S_(180)瘤重抑制率为67.8%,对小鼠腹水型肝癌H_(22)的生命延长率为62.96%,其余T-SS剂量组的相应指标低于0.15mg/kg组。剂量为0.15mg/kg或0.6mg/kg的T-SS抗肿瘤免疫指标整体上相对较好。从而说明,T-SS对小鼠肉瘤S_(180)和小鼠腹水型肝癌H_(22)生长具有一定的抑制作用,T-SS具有一定的体内抗肿瘤活性与抗肿瘤免疫活性。3、T-SS对小鼠免疫功能的调节:用CTX建立小鼠免疫抑制模型,研究了T-SS对正常小鼠与免疫抑制小鼠的免疫功能的调节作用。免疫指标的测定方法同体内抗肿瘤试验。剂量为0.15mg/kg或0.6mg/kg的T-SS各种免疫指标整体上相对较好。剂量为0.6mg/kg的T-SS对免疫抑制小鼠具有一定的免疫调节作用,但不足以恢复至正常水平。说明T-SS对小鼠具有一定的免疫调节作用。上述结果表明T-SS具有一定的抗肿瘤活性、抗肿瘤免疫活性与免疫活性。
赵春红[3]2006年在《核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化中的变化研究》文中研究指明本论文在鉴定HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞终末分化的结果基础上,应用亚细胞蛋白质组学分析技术,对核基质蛋白在MG-63细胞诱导分化过程中的变化进行系统研究。分析鉴定与肿瘤细胞增殖分化相关的特异核基质蛋白,并探索它们在肿瘤细胞诱导分化过程中的调控作用,以期能够在较为整体水平上进一步认识细胞癌变与逆转机理问题,从而找出细胞增殖与分化调控研究的新方向。实验结果显示,5mmol/L HMBA有效抑制了人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,改变细胞形态和超微结构恶性表型特征,并促使MG-63细胞表达骨钙素、骨粘素等成骨特异标志蛋白,光镜和选择性抽提整装电镜观察显示经HMBA处理的MG-63细胞产生了核基质-中间纤维系统构型的恢复性变化。双向凝胶电泳分析显示在HMBA诱导MG-63细胞分化前后存在16个差异表达核基质蛋白,MALDI-TOF质谱鉴定显示其核基质蛋白的成分产生了MHCⅡ类抗原、ISGF3α、8-羟基鸟嘌呤糖基化酶同功酶ogg1、vimentin、与60S核糖体蛋白L21相似的蛋白上调,hnRNP A2 / B1、actin和prohibitin蛋白下调,新出现DKFZp434M2221.1蛋白、ST2蛋白的差异变化。蛋白印迹杂交与免疫荧光显微镜观察确证了vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin在MG-63细胞分化过程中的表达变化。由HMBA处理的人胃腺癌MGc80-3细胞和RA处理的MG-63细胞的平行对照分析显示vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin是诱导处理前后共同差异核基质蛋白。免疫荧光激光共聚焦显微镜观察结果进一步显示vimentin和actin、hnRNP A2/B1和actin、prohibitin和actin以及prohibitin与癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、Rb表达产物有共定位关系。研究结果表明,5 mmol/L HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显着诱导作用,在MG-63细胞分化过程中不仅其核基质-中间纤维系统构型产生了与其相应正常细胞相似的恢复性变化,并且其核基质蛋白组成也相应产生明显变化,出现了MHCⅡ抗原、IFN刺激的基因因子3α91/84 kda蛋白、DKFZp434M2221.1蛋白、8-羟基鸟嘌呤糖基化酶同功酶ogg1、vimentin、与60S核糖体蛋白L21相似的蛋白质和白介素I受体ST2蛋白等核基质蛋白表达的差异。其中vimentin、actin、hnRNP A2/B1和prohibitin为不同诱导分化物诱导同一肿瘤细胞和同一诱导分化物
翁朝红, 谢仰杰, 洪水根[4]2003年在《鲎血淋巴系统的特点及其功能》文中研究表明鲎的血淋巴系统由心脏、血管和血淋巴液组成.心脏和血管系统非常发达,而且血液量巨大.血淋巴液由血浆和血细胞组成.血浆主要含有血蓝蛋白、α2-巨球蛋白、C-反应蛋白等.对鲎血细胞的种类,看法不一,其主要的血细胞类型为颗粒性血细胞,其胞质中含有特征性的大小颗粒.鲎的血淋巴中含有50种以上的免疫因子,大都位于大小颗粒中,它们在鲎的天然免疫中起重要的作用.
参考文献：
[1]. 中国鲎鲎素对人肝癌SMMC-7721细胞诱导分化作用与机理研究[D]. 欧阳高亮. 厦门大学. 2001
[2]. 中国鲎鲎素Ⅰ抗肿瘤与免疫活性研究[D]. 赵鹏. 广西大学. 2007
[3]. 核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化中的变化研究[D]. 赵春红. 厦门大学. 2006
[4]. 鲎血淋巴系统的特点及其功能[J]. 翁朝红, 谢仰杰, 洪水根. 集美大学学报(自然科学版). 2003