卿艳1 车晓彦1 赵芡2
（1四川省食品药品检验检测院；2成都中医药大学；四川成都610000）
摘要：目的：完善和提高益母颗粒质量标准。方法：采用薄层色谱法对益母颗粒中当归、川芎、木香进行定性鉴别; 采用高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量。结果：当归、川芎、木香薄层色谱斑点清晰，分离效果好、无阴性干扰；盐酸水苏碱的含量在0.2143mg/g～1.2214mg/g与其峰面积积分值呈良好线性关系 （r =0.999）样回收率为97.41%， RSD =3.59% ( n = 6) 。结论：该方法简便可行、专属性强、重复性好，可用于益母颗粒的质量控制。
关键词：益母颗粒；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱
益母颗粒系由益母草、当归、川芎、木香四味中药组成，组方简单，疗效确切，现有标准缺少专属性的薄层和含量测定方法。为了有效控制该制剂的质量，保证临床用药的安全性和有效性，本文拟采用薄层色谱法对益母颗粒中当归、川芎、木香进行定性鉴别，并采用 HPLC 法测定盐酸水苏碱的含量，建立完善的质量标准体系，以保证其疗效稳定。
1实验部分
1.1仪器与材料
MS1602S型电子天平（Sartorius），TLC VISUALIZER薄层色谱扫描仪（力扬企业有限公司）硅胶G预制薄层板（青岛海洋化工厂），安捷伦1200液相色谱，高效液相色谱仪，ELSD2000ES蒸发光散射检测器，CPA225D型分析天平（万分之一北京赛多利斯仪器系统公司），甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。当归（批号120927-201315）、川芎（批号120918-201110）、木香（批号120921-201309）对照药材，由中检院购得。盐酸水苏碱对照品：成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-16072510，含量以99.75%计。
1.2 方法与结果
1.2.1TLC鉴别
1.2.1.1 当归、川芎 取本品1袋，加水50ml，超声处理30分钟使溶解完全，放冷，加乙醚提取2次，每次50m1，合并乙醚液，加无水硫酸钠3g，振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚lml使溶解，作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，加水20ml，超声处理30分钟，同法制成当归、川芎对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(5：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与当归、川芎对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。
2.1.2 木香 取木香对照药材0.5g，照【鉴别】（1)项下当归、川芎对照药材制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取【鉴别】（1）项下供试品溶液与上述对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
1.2.2盐酸水苏碱含量测定
1.2.2.1 色谱条件 以丙基酰胺键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（87∶13）为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于6000。柱温：25℃，流速：1ml/min，漂移管温度：105℃，载气：3.5L/min，用蒸发光散射检测器检测。理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于6000。
1.2.2.2 溶液的制备 对照品溶液制备：取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液，即得。
供试品溶液制备：取本品约3g或0.9g（无蔗糖），加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，弃去乙酸乙酯液，水液通过已处理好的732钠型强酸性阳离子交换树脂（2×15cm），用水洗脱至洗脱液无色，弃去水液，再用2mol/L氨溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇使溶解并转移至5ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照溶液的制备：按处方比例制成缺益母草阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
1.2.2.3 专属性实验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，按“2.2.1”色谱条件进样测定。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆结果表明，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照色谱中在与对照品色谱相应位置上则未出现色谱峰，表明在该 HPLC 测定条件下，盐酸水苏碱的测定无阴性干扰。
1.2.2.4线性关系的考察
取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加50%甲醇配制成不同浓度的盐酸水苏碱对照品溶液，注入色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图，测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标，盐酸水苏碱对照品进样量的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程y=1.651X+2.363，r=0.9995，结果表明：盐酸水苏碱浓度在0.2353μg～4.704μg范围内其含量与峰面积呈良好的线性关系。
1.2.2.5精密度、稳定性、重复性试验
取同一浓度对照品溶液5μl，连续进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积，计算得盐酸水苏碱对照品溶液的峰面积的RSD为1.38%，说明仪器的精密度良好。取供试品溶液，室温放置，分别于制备后0、2、4、6、8、12h 进样，测定峰面积，结果RSD =1.47%。表明在室温条件下，供试品溶液在12 h内稳定性良好。取同一批益母颗粒，精密称定，按“2.2.2”项方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，记录色谱图，计算得6份供试品溶液中盐酸水苏碱含量的平均值为15.5mg/袋，结果 RSD = 1.78% ，表明该方法重复性良好。
1.2.2.6加样回收率试验
取已知含量的同一批样品（盐酸水苏碱含量为1.11mg/g）6份，每份1.5g，精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（浓度为1.597mg/ml）1ml，再加入水19ml，按“1.2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，计算回收率，回收率为92.22%～99.67%，RSD=3.59%，表明加样回收良好。
1.2.2.7样品含量测定及限度制定
取盐酸水苏碱对照品和14批益母颗粒样品，按“1.2.2.2”项方法分别制备对照品及供试品溶液，按“1.2.2.1”色谱条件进样，记录色谱图，计算样品中盐酸水苏碱的含量为3.0%～16.7%之间，平均含量为9.8mg/袋。考虑到不同厂家的差异，现将含量平均值下浮30%作为限度，即为6.9mg/袋；药典规定益母草药材的含量为不得少于0.50%，即5mg/g；益母颗粒的制成总量为2478g，益母草的处方量为480g，按15%的转移率计算的话，应为不得低于6.1mg/袋。综合考虑，暂拟定本品限度为：每袋含益母草以盐酸水苏碱（C7H13NO2?HCI）计，不得低于6.0mg。
2讨论
研究证实，在川芎和当归中，含有相似的内酯类成分及酚性成分，单独进行川芎或者是当归的专属性鉴别效果不理想，因此，可以将二者作为整体进行鉴别。参照文献中当归、川芎薄层鉴别方法，用乙醚直接加热回流的方式制备供试品溶液，结果样品中当归、川芎斑点较弱。采用加水超声溶解样品，乙醚萃取，无水硫酸钠脱水的前处理方法，结果样品斑点明显，缺当归、川芎双阴性无干扰。木香对照药材同法提取，两个薄层鉴别共用供试品液可大大简化操作，减少有机试剂的使用，符合最新“环保检验”的理念。分别对不同厂家生产的薄层板（硅胶G（Merck公司）、硅胶G可裁板（天津思利达公司）、青岛海洋化工厂海洋牌）、不同展开温湿度（ 22℃，49%； 9℃，75%）、不同点样方式（点状、条状）进行了考察，结果均表明本方法的耐用性良好。
笔者考察过2015版《中国药典》上的益母丸、益母草片、益母草胶囊中盐酸水苏碱的液相色谱测定方法，曾用四种不同提取方法（超声提取、加热回流、加热回流后上中性氧化铝柱、水溶解再萃取后再上732型强酸性阳离子交换树脂），以紫外检测器检测，结果盐酸水苏碱对照品和杂质峰不好分离，经查阅相关文献，考虑盐酸水苏碱仅在紫外末端有吸收，干扰较大，改用蒸发光检测器测定。最终选定本实验采用的HLLIC色谱柱，将样品先用乙酸乙酯萃取除杂后再通过强酸型阳离子交换树脂，减少干扰物质对盐酸水苏碱含量测定的影响，采用蒸发光检测器检测，图谱中与对照品保留时间相对应的位置上有相同的色谱峰，且能和杂质峰较好分离。曾分别对不同色谱柱（Venusil HLLIC柱，XBridge HLLIC柱（规格：4.6×200mm，5μ）进行方法的耐用性考察，结果均符合要求。
综上，通过本研究的系统试验，成功建立了益母颗粒的定性、定量检测方法，该方法专属性强、稳定可靠、重复性好，可有效用于益母颗粒的质量控制。
参考文献
[1] 朱敏，杨彩春，孙蓉..益母颗粒的质量标准研究[J].中国民族民间医药，2013:23-24.
[2] 韩丽丽，巩峰贤，孙俊英.益母颗粒的薄层色谱鉴别[J].中国保健营养，2016，26:191.
作者简介：卿艳（1986-），女，硕士，检验员，从事中药材及中成药的质量检验及分析研究工作。
论文作者:卿艳1,车晓彦1, 赵芡2,
论文发表刊物:《医师在线》2019年10月20期
论文发表时间:2020/1/6
标签：色谱论文; 溶液论文; 盐酸论文; 薄层论文; 川芎论文; 当归论文; 颗粒论文; 《医师在线》2019年10月20期论文;