胰岛素联合粒细胞集落刺激因子（GCSF）治疗1型糖尿病的实验研究论文_卢雪玲1杨梅英2关新林1

卢雪玲1杨梅英2关新林1

1新疆医科大学第二附属医院内分泌科新疆乌鲁木齐830028;

2新疆医科大学第一附属医院药剂科新疆乌鲁木齐830000

【关键词】1型糖尿病；胰岛素；粒细胞集落刺激因子；小鼠，近交BALBC

【中图分类号】R733

【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12024302

糖尿病是危害人类健康的常见病，目前临床上对于1型及部分重型2型糖尿病患者通常采用皮下注射胰岛素的方法进行替代治疗，但外源性胰岛素的补充并不能促进胰岛损伤的修复、需要终身用药而且很难阻止糖尿病的进展和并发症的发生［1］。已知1型糖尿病是一种自身免疫反应引起的胰岛β细胞的损伤，如果在控制血糖的同时配用免疫调节剂将有可能改善胰岛的微环境，促进胰岛的修复。本研究通过给小鼠腹腔注射链脲菌素建立糖尿病小鼠模型，皮下注射胰岛素控制血糖，粒细胞集落刺激因子（Granulocyte colonystimulating factor，GCSF）进行免疫调节治疗，探讨胰岛素和GCSF联合治疗促进胰岛修复、治疗1型糖尿病的可行性，为糖尿病的治疗提供新的方案。

1材料与方法

11材料:

链脲菌素（streptozotocin）购于sigma公司，精蛋白锌重组人胰岛素注射液购于深圳科兴生物工程有限公司，重组人粒细胞集落刺激因子注射液购于山东科兴生物制品有限公司，大鼠抗小鼠胰岛素单克隆抗体、SP试剂盒、显色剂DAB购于北京中山生物技术有限公司，BALB/C小鼠专用饲料购于山东大学实验动物中心，尿糖试纸购于桂林中星生物技术发展有限公司，血糖测定仪及其配套试剂购于美国强生集团。

12方法

12．1型糖尿病动物模型的制备:

健康雌性（体质量22～24g）的 BALB C小鼠，建模前小鼠禁食12h，称体质量，按240～260mg/kg剂量1次性腹腔注射链脲佐菌素注射液（链脲佐菌素注射液临用前用01mmol/L pH 45的柠檬酸、柠檬酸纳缓冲液配成10g/L的注射液，且在10min内用完），以诱发糖尿病。72h后，空腹血糖大于11mmol/L，餐后4h血糖大于16mmol/L,则该小鼠为糖尿病模型小鼠。

122治疗方案:正常对照组：健康雌性 BALB C小鼠，皮下注射生理盐水，作为正常对照。

成模后的小鼠随机分成4组进行干预治疗，每组9只。模型组（治疗对照组：皮下注射生理盐水）;胰岛素治疗组：每日上午皮下注射中效胰岛素2IU/kg；GCSF治疗组：每日下午皮下注射GCSF 20ug/kg；联合治疗组: 每日上午皮下注射中效胰岛素2IU/kg、下午皮下注射GCSF 20μg/kg，连续治疗60d。

13统计学处理：　数据采用均数±标准偏差来表示。组间比较采用t 检验，P<005表示差异具有显著性，P>005表示差异不具有显著性。

2结果

不同治疗方法对糖尿病小鼠一般性状和体质量的影响正常组：小鼠活泼好动,皮毛光泽，体质量持续增加。

模型组：小鼠6～9d开始，活动力减弱，皮毛稀疏、无光泽，尿多，体质量逐渐下降，至40天内全部死亡。

胰岛素单独治疗组：小鼠尿量减少、体质量增加(P<005 vs 模型组)，但小鼠不够活泼，皮毛仍然稀疏、无光泽，60d成活率为60%。

GCSF治疗组：小鼠较活泼,皮毛较光泽，体质量有所增加，治疗60d后成活率达100%，尿量无明显减少。

联合治疗组：小鼠活泼好动,皮毛光泽，体质量增加明显，尿量减少，治疗60d后成活率100%(见表1和图1)

表1各组小鼠体质量的改变（g）n=9

　3讨论

1型糖尿病是难以治愈的以胰岛β细胞损伤为特征的自身免疫性疾病,临床上通常采用胰岛素类降血糖药物来进行替代治疗,尽管可缓解症状，但很难阻止糖尿病进展和并发症的发生，且患者需终生服药，因此探讨恢复胰岛功能的方法对治愈糖尿病有重要意义。

干细胞的研究给人们根治糖尿病带来了希望。近来已从多种组织中分离培养出了成体干细胞［2］，并发现来源于胰腺组织的成体干细胞同样具有分化成胰岛β细胞的功能［3］，但由于胰腺组织中的成体干细胞数量少、取材困难，临床应用的难度较大。新近的研究显示骨髓干细胞具有向损伤胰岛组织局部迁移及在损伤组织局部定向分化产生胰岛素的β细胞［4］，在糖尿病的治疗中展现出良好的应用前景。GCSF是骨髓细胞动员剂和免疫调节剂，已有研究显示GCSF具有动员骨髓干细胞向损伤的胰腺迁移及向胰岛β细胞分化的潜能［5］及通过免疫调节改善胰岛的功能。亦有报道高血糖影响胰岛的修复。本研究在用胰岛素控制血糖的基础上联合GCSF对糖尿病小鼠进行治疗，结果显示另外，在正常的血糖环境下也更有利于GCSF免疫调节功能发挥，减少胰岛细胞的免疫损伤。

本研究中我们在链脲菌素诱导的1型糖尿病小鼠模型中发现，GCSF与胰岛素联合治疗较胰岛素或GCSF单独治疗组有更好的疗效，联合治疗不仅能有效的控制血糖、提高小鼠的成活率，而且小鼠活泼、体毛光亮，体重接近正常，病理学分析显示,联合治疗组小鼠胰岛得到较好的修复，说明胰岛素联合GCSF更有利于胰岛的修复和糖尿病的控制，将为糖尿病的治疗提供新的方案。但具体机制尚待深入研究。

参考文献

［1］Wolffenbuttel B H，Vreeburg J. Insulin therapy does not diminish betacell damage in the neonatal streptozotocininjected rat ［J］. Diabetes Res，1988，9(2):7779

［2］Oshima H， Rochat A， Kedzia C. Morphogenesis and renewal of hair follicles from adult multipotent stem cells ［J］ . Cell，2001，104 (2）: 233245

［3］Peck A B，Chaudhari M，Cornelius J G，et al. Pancreatic stem cells: building blocks for a better surrogate islet to treat type 1 diabetes ［J］. Ann Med. 2001，33(3):186192

［4］Hess D，Li L，Martin M，Sakano S，et al. Bone marrow derived stem cells initiate pancreatic regeneration ［J］. Nat Biotechnol，2003，21 (7):763770

［5］Gol'dberg E D，Dygai A M，Zhdanov V V,et al.. Mechanisms of therapeutic effects of granulocytic colonystimulating factor in experimental diabetes mellitus ［J］.Bull Exp Biol Med， 2008， 146(4):5436

论文作者:卢雪玲1杨梅英2关新林1

论文发表刊物:《中医学报》2013年12月第28卷供稿

论文发表时间:2014-3-26

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