刘晓鹰, 张雪荣, 倪珠英[1]2005年在《金水清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响》文中研究说明目的:通过观察中药复方金水清对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MC)增殖及凋亡的影响,探讨其治疗小儿血尿的作用机制。方法:以噻唑蓝法检测MC的增殖,荧光显微镜下观察MC的凋亡形态,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:在1 000~62.5μg/L浓度范围内,金水清能抑制MC增殖,可使G0~G1期细胞增高,S、G2-M期细胞减少,且呈浓度依赖关系,并能明显诱导MC凋亡。结论:MC是金水清发挥作用的重要靶细胞,金水清可能通过:(1)减少细胞有丝分裂,干扰细胞周期,抑制系膜细胞的增殖及代谢活性;(2)诱导系膜细胞的凋亡等环节发挥抑制MC增殖的作用,从而减少炎性因子的合成与释放,减少细胞外基质的聚积,达到治疗小儿血尿,延缓慢性肾脏病理进程的目的。
张雪荣[2]2003年在《金水清对大鼠肾小球系膜细胞的影响》文中进行了进一步梳理目的： 通过对大鼠肾小球系膜细胞(glomemlar mesangial cells MC)的体外培养，观察中药金水清对MC增殖、IL-6和Ⅳ型胶原表达以及MC凋亡的形态学变化和细胞周期及凋亡的影响，探讨金水清对大鼠系膜细胞可能的作用机制，从而为临床应用金水清治疗小儿肾性血尿提供客观的实验依据。 方法： 体外培养的大鼠肾小球系膜细胞系，经不同浓度的金水清处理后，分别检测：(1)台盼蓝染色法观察金水清对大鼠系膜细胞的毒性作用；(2)噻唑蓝(MTT)法检测系膜细胞的增殖；(3)荧光显微镜下观察系膜细胞的凋亡形态；(4)流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率；(5)双抗体夹心ELISA法检测IL-6，Ⅳ型胶原的含量。 结果： 1、经台盼蓝染色显示，金水清各组24、48、72h细胞活力达90％以上。经x~2检验，金水清各浓度组细胞活力与正常组比较，无显着性差异(P＞0.05)，说明金水清在本次实验中对系膜细胞无明显细胞毒作用。 2、MTT OD值显示，各组与空白对照组比较，24h OD值呈下降趋势，其中阳性对照组(DEX)、金水清(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ)组差异非常显着(P＜0.01)，Ⅶ组差异显着(P＜0.05)；48h OD值也呈下降趋势，阳性对照组(DEX)、金水清(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ)组差异非常显着(P＜0.01)，而Ⅶ组无差异(P＞0.05)。说明金水清各浓度组及DEX组作用于MC，24h、48h时对其增殖有抑制作用，并呈浓度依赖关系(48hⅦ组除外)。金水清各组与阳性对照组(DEX)比较，24h、48h OD值呈上升趋势，其中金水清(Ⅲ)组无显着性差异(P＞0.05)，金水清(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ)组差异非常显着(P＜0.01)，说明金水清各组抑制MC增殖的程度，以高浓度Ⅲ组为强，与DEX效果相当，其余浓度组24h、48h抑制作用都比DEX差。 3、大鼠系膜细胞生长形态学观察 经中药金水清及DEX处理24h后，光学镜下可见部分贴壁生长的MC附壁能力减弱，易从培养皿壁上脱落下来，浮悬于培养液中，相邻细胞间连接性降低，细胞形态变圆，体积缩小，核固缩出现，核颜色加深，折光性增强。空白对照组的细胞贴壁生长，几乎无脱落，胞浆饱满，舒展生长良好，相邻细胞生长融合成片。荧光显微镜下见不同浓度药物组及地塞米松组的MC均有核仁碎裂，呈大小不等、形态不规则的月牙状、散射状、梅花状，即为典型的细胞凋亡形态，同时可见少量完整和正在凋亡过程中的MC；其中以金水清Ⅲ组的凋亡细胞最多。空白对照组MC细胞核均完整，未见有凋亡形态。 4、在本实验中，以金水清处理后的细胞，在流式细胞仪分析直方图上，其细胞周期的分布发生了改变，MC的G_0／G_1期逐渐升高，而S期和G_2期细胞比逐渐下降。且凋亡率随着药物浓度的升高而升高，湖北中份攀院硕士研究生瀚文经x’检验，金水清各浓度组及地塞米松组凋亡率与空白组比较，差异显着(P<0.05)。提示金水清对MC的作用环节，主要是影响细胞周期Gt期向S期的转变过程，将MC阻滞在G，期，从而减少进入S期的细胞数目，减少其有丝分裂，抑制其增殖. 5、经双抗体夹心ELISA法检测，与空白对照组比较，阳性对照组(DEx)、金水清各组工L一6的含量呈下降趋势，差异非常显着(P<0.01)，说明金水清各组均可抑制IL一6的分泌;与阳性对照组(DEX)比较，金水清111组低于DEX组，有显着差异(P<0.01)，Iv、V、Vl、vll组高于DEX组，有差异(P<0.05或P<0.01).说明金水清抑制IL一6的分泌以m组作用显着，优于DEx，其余各组抑制作用比DEX差. 与空白对照组比较，阳性对照组(DEX)、金水清各组W型胶原的含量呈下降趋势，有显着性差异(P<0.01)，说明金水清各组均可抑制W型胶原的分泌;与阳性对照组(DEX)比较，金水清111、W组低于DEx组，有显着差异(P<0.01或P<0.05)，V、Vl、vll组高于DEX组，有显着差异(P<0.01).说明金水清抑制W型胶原的分泌以m、W组作用显着，优于DEX，其余各组抑制作用比DEX差.结论: MC是金水清发挥作用的重要靶细胞，金水清抑制系膜细胞增殖可能通过以下环节:(l)减少细胞有丝一分裂，干扰细胞周期，抑制系膜细胞的增殖及代谢活性;(2)诱导系膜细胞的凋亡;(3)降低IL一6及Iv型胶原的合成与分泌。从而发挥抑制MC增殖，减少细胞外墓质(extracellular matrix ECM)的堆积，拮杭细胞因子的不良作用，达到治疗小儿肾性血尿，并防治肾小球硬化，延缓慢性肾脏病理进程的目的.
参考文献：
[1]. 金水清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响[J]. 刘晓鹰, 张雪荣, 倪珠英. 中国中西医结合肾病杂志. 2005
[2]. 金水清对大鼠肾小球系膜细胞的影响[D]. 张雪荣. 湖北中医学院. 2003