万敏1 冯红超2 宋宇峰(通讯作者)3
(1遵义市第五人民医院口腔科 贵州 遵义 563000)
(2贵阳市口腔医院口腔外科 贵州 贵阳 550001)
(3贵阳医学院口腔颌面外科 贵州 贵阳 550001)
【摘要】 目的:研究口腔鳞癌组织（OSCC）中树突状细胞(DCs)的浸润密度的临床意义。方法：采用免疫组织化学染色S-P法检测S-100表达标记DCs，根据临床情况进行统计学分析。结果：OSCC中DCs浸润密度低于正常对照组（P=0.016），无转移组OSCC组织内DCs明显高于转移组，（P=0.010）。DCs浸润密度Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ级，（P=0.030）。结论：DCs浸润密度与OSCC分化程度及转移关系密切， DCs在抑制肿瘤肿瘤发展、转移中起到一定的作用。
【关键词】 口腔鳞癌；树突状细胞；淋巴结转移
【中图分类号】R78 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）10-0134-03
Clinical Significance of Dendritic Cells Infiltration in Oral Squamous -cell Carcinoma Wan Min1，Feng Hongchao2，Song Yufeng3
1.Department of Stomatology，The Fifth People's Hospital of Zunyi City，Zunyi 563000,China;2.Oral Surgery, Guiyang Stomatological Hospital, 550001,China;3.Department of Oral and Maxillary Surgery， Hospital of Guiyang Medical College，Guiyang，550004，China
【Abstract】Objective To investigate dendritic cells(DCs) infiltration to assess their significances in the metastasis and prognosis in the oral squamous-cell carcinoma（OSCC）. Methods Immunohistochemistry S-P method was adopted to identify DCs infiltration, S-100 protein was used to mark DCs. Results DCs infiltration in normal oral mucosa were significantly higher in OSCC ( P = 0.016). The density of DCs in the group with lymph nodes metastasis was clearly lower than in the group with no lymph nodes metastasis in OSCC (P=0.010）. The density of DCs were obviously decreased along differentiation of tumor, Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ（P=0.030）. Conclusion DCs infiltration was closely associated with tumor differentiation and lymph nodes metastasis, might inhibit the tumor progression and lymph nodes metastasis in OSCC.
【Key words】Oral squamous-cell carcinoma (OSCC); Dendritic cells(DCs) lymph nodes metastasis
口腔鳞癌（oral squamous-cell carcinoma，OSCC）为口腔癌中最常见的恶性肿瘤，有资料显示OSCC占90%，男性明显高于女性，发病年龄以40-60岁多见[1-2]。机体的抗肿瘤免疫以T细胞介导的细胞免疫起主要作用，而树突状细胞（dentritic cells，DCs）是激活T细胞的主要抗原提呈细胞, DCs是来自骨髓造血干细胞并主要在骨髓分化形成的具有多种生物学效应的一类免疫细胞，因其具有强大的抗原提呈能力和诱导初始T细胞活化的能力，被认为是体内功能最强的抗原提呈细胞(antigen –presenting cell，APC)。S-100是目前最常用于免疫组化检测肿瘤浸润性DCs的抗体，本文采用免疫组化方法，用S-100表达情况检测47例OSCC组织和11例正常口腔粘膜组织中DCs的浸润密度，探讨DCs浸润对OSCC生物学行为的影响。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1选取2007-2010年来贵阳医学院附属医院口腔颌面外科术前未经化疗、放疗的，并且术后经病理证实的OSCC标本47例。肿瘤细胞分化按照七年制《病理学》教材三级分级法分级，其中分化Ⅰ级29例，Ⅱ级11例，Ⅲ级7例；淋巴结转移27例，其中1例远处转移，无淋巴结转移20例。其中男38例，女9例，年龄38～76岁，平均年龄60岁。全部病例均符合以下条件：①病理学证实为OSCC；②未曾接受手术、放疗、化疗及生物治疗者；③无糖尿病、自身免疫性疾病、造血系统疾病及其他恶性肿瘤；④肝、肾功能正常。对照组为同期收治的口腔正常粘膜组织11例，男性6例，女性5例，年龄36～72岁，平均年龄54岁。
1.1.2主要试剂：鼠抗人S-100蛋白单克隆抗体（即用型），兔抗人通用型SP系列工作液试剂盒（SP-9000），DAB 试剂盒（2瓶装），以上试剂均购至北京中杉金桥公司。
1.2 方法
免疫组化染色：经40g/L甲醛固定、石腊包埋的OSCC标本，5um连续切片，用于HE染色和免疫组化染色S-P法,操作按试剂说明进行，高温高压修复抗原，用PBS替代一抗作阴性对照， 阳性对照为已知的OSCC阳性切片。
1.3 结果判定
DCs计数方法：在免疫组化染色切片鼠抗人S-100蛋白单克隆抗体标记树突状细胞，S-100阳性为细胞质和细胞核为棕黄色或棕褐色，先在100倍光镜下确定6个密度最高的区域, 然后分别在400倍光镜下计数, 其平均值分别作为DCs浸润的密度；在OSCC的计数局限于肿瘤及邻近的粘膜和癌周组织。
1.4 统计学处理
计数资料以mean±SD表示，组间差异用独立样本t检验或非参数检验；所有数据统计均用统计软件SPSS 17.0进行处理，检验水准a=0.05，以P<0.05有统计学意义。
2.结果
2.1 DCs在组织中浸润分布的特点
DCs在正常口腔粘膜组织中主要位于基底层，散在分布，多呈椭圆形或不规则形，无明显突起，（图1）正常粘膜组织中DCs高于OSCC组，差异有统计学意义（P=0.016，见表1）。OSCC邻近组织部分可见密集浸润，部分在基底膜下或癌巢周围则呈带状浸润，形成“防御带”，DCs呈树突状或不规则形状，突起部分可与肿瘤细胞紧密接触；部分散在分布于肿瘤细胞间，部分被癌组织包绕，在某些区域集聚成团，（见图2），部分病例较少或无。
3.讨论
1973年美国学者Steinman和cohn首次发现DCs并因外形呈树突状而得名[3]。体内DCs均起源于多能造血干细胞，由骨髓样干细胞和淋巴样干细胞分化而来。DCs在分化发育过程中的成熟和不成熟阶段具有不同的生物学功能和细胞表型[4]。已知机体的抗肿瘤免疫以T细胞介导的细胞免疫起主要作用，但肿瘤抗原只有经过抗原提呈细胞提呈后才能被T细胞识别，并进一步激活T细胞杀伤肿瘤细胞。DCs作为专职APC，是惟一能激活静息型T细胞，诱导和维持初级免疫应答的抗原提呈细胞[5-6]。因其具有极强的抗原摄取、递呈以及有效诱导和维持免疫应答的能力，在抗肿瘤免疫中起到至关重要的作用。
本研究结果发现，OSCC组中DCs浸润密度平均值为17.45 ±11.40，口腔正常粘膜组织中为26.08±9.21，OSCC组织中DCs浸润密度显著低于口腔正常粘膜组，差异有统计学意义（P=0.016）。胡晓华[7]，黄志勇[8]等在OSCC组织中用CD1a检测DCs的浸润情况，显示OSCC组织中CD1a+DCs较正常粘膜少，与本实验结果相似。研究结果还表明：OSCC组织中，无淋巴结转移组DCs显著高于淋巴结转移组，差异有统计学意义（P=0.010）。DCs浸润密度在OSCC病理分级中有显著差异，Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ级，（P=0.030）。结果说明在OSCC中DCs的高密度浸润可能在抑制肿瘤的淋巴结转移中起到一定的作用，同时在不同分化的OSCC中，分化越差的DCs浸润越少，说明在OSCC中DCs的高密度浸润能够起到一定抑制肿瘤发展的作用，这与Metrin K等头颈肿瘤中研究结果一致[9-11]。国内喉癌[12]非小细胞肺癌[13]胃癌[14]等研究还证实肿瘤中DCs浸润与预后密切相关，DCs浸润密度越高，淋巴结转移率越少，生存率越高。
研究证实，肿瘤组织中的DCs数量减少和功能异常，淋巴结转移者较未转移者低，DC分化成熟障碍是主要原因，未成熟DCs抑制抗原特异性T细胞的功能，诱导免疫耐受[15]，可能是免疫逃逸的主要原因之一。综上所述，本研究结果说明了DCs能在OSCC中起到了一定的抗肿瘤发展、转移的作用。
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论文作者:万敏1,冯红超2,宋宇峰(通讯作者)3
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第10期供稿
论文发表时间:2015/7/20
标签：细胞论文; 树突论文; 免疫论文; 肿瘤论文; 组织论文; 口腔论文; 抗原论文; 《医药前沿》2015年第10期供稿论文;