波长切换HPLC法同时测定乙肝扶正胶囊论文_何泰东邱连建魏俊婷王曼茹刘志承

何泰东邱连建魏俊婷王曼茹刘志承

广州中医药大学附属深圳市中医院药学部广东深圳518033

【关键词】乙肝扶正胶囊；附二极管阵列检测器HPLC法；6种有效成分，同时检测

【中图分类号】R5126+2

【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12013102

乙肝扶正胶囊为我国长期用于乙型肝炎辨证肝肾两虚的治疗药物,为《卫生部药品标准》［1］收载品种。其以何首乌、虎杖、丹参等11味中药组成，长期以来质量检测只测定其中某一味中药有效成份，不够科学全面，笔者参考文献［2、3］应用HPLCDAD先进技术和乙睛—甲醇—01醋酸水溶液为流动相梯度洗脱［4］，波长切换HPLC法同时测定乙肝扶正胶囊中的6种有效成分，并用于检测评价5家厂的产品质量，结果令人满意。

1仪器与试药

HPLC1100（美国Agilent公司，包括DAD二级管阵列检测器，Agilent Chemstation色谱工作站等），SCQ2200型超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司），SZ293型自动双重纯水蒸馏水器（上海亚荣生化仪器厂），AB404S型电子天平（瑞士梅特勒—托利多公司）。

甲醇、乙睛（色谱纯美国迪马公司）：其他试剂均为分析纯，水为双蒸水，没食子酸、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇，肉桂醛、丹参硐ⅡA对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号分别为08319901、120923200809、08449902、111535200601、07739911、0766200910）乙肝扶正胶囊（A、广州白云山中药厂，批号：120801；B、重庆东方药业股份有限公司，批号：120802；C、惠州九惠制药厂，批号：120903；D、广东罗浮山制药有限公司，批号：120904；E、贵州良济药业有限公司，批号：120905）。

2方法与结果

21溶液的制备

211混合对照品溶液的制备:

分别称取已干燥恒重的各对照品适量，分别以甲醇溶解并稀释成浓度分别为没食子酸244mg,ml1，虎杖苷196mg.ml1，二苯乙烯苷272mg.ml1，白藜芦醇208mg.ml1，肉桂醛272mg.ml1，6、丹参酮ⅡA200mg.ml1的对照品溶液，再分别精密量取各单组分对照品溶液适量，置于同一10ml量瓶中，加甲醇稀至刻度摇匀，制成混合对照品溶液。

212供试品溶液的制备:

取乙肝扶正胶囊10粒，研细，精密称取一粒的重量(约04~05g)，置于10ml量瓶中加甲醇5ml，超声(频率：20KHZ，功率80w)60min，放冷至室温，用甲醇释至刻度，摇匀用微孔滤膜（045μm）滤出，备用。

22色谱条件与系统适用性试验［4］:

色谱柱：DiamonsilTM C18(250mm×46mm，5μm)；流动相，乙睛—甲醇—01% 醋酸水溶液梯度洗脱（详见表1）：检测波长：320nm（0~40min，检测没食子酸、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇）；254nm（40~65min，检测肉桂醛、丹参酮ⅡA）；流速：10ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl。

A、混合对照品；B、供试品；1、没食子酸、2、虎杖苷、3、二苯乙烯苷、4、白藜芦醇、5、肉桂醛、6、丹参酮ⅡA

在上述色谱条件下，分别取混合对照品溶液，供试品溶液各20μl进样分析。结果没食子酸、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇、肉桂醛、丹参酮ⅡA6个色谱峰的分离良好，与相邻色谱峰的分离度均≥15。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于5000，见图1。

23方法学考察

231线性关系:　精密量取混合对照品溶液01、02、05、10、15、20ml，分别置10ml量瓶中，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，取20μl进样，在上述色谱条件下进行测量记录各自峰面积，以各成分质量浓度（X、mg·ml1）为横坐标，相关的峰面积分值（y）为纵坐标，进行计算并绘制各相关的标准曲线，考察线性关系，结果详见表2

3讨论

本研究应用乙睛—甲醇—01醋酸水溶液为流动相的梯度洗脱可有效分离乙肝扶正胶囊中的没食子酸、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇、肉桂醛、丹参硐ⅡA，6种有效成分，应用波长切换HPLCDAD可在0~40min320nm波长切换成40~65min254nm波长同时测定上述6种有效成分的含量，5家厂乙肝肤正胶囊中的6种有效成分均已检出（详见表3），各厂样品总含量稍有参差，其含量百分率总量队列，B厂082124%＞A厂059518%＞D厂为048702%＞C厂为046949%＞E厂为036917%，其含量最高的为最低的2225倍，其中白藜芦苷的含量最高百分率为最低的524倍，乙肝扶正胶囊由何首乌、虎杖、贯众、肉桂、明矾、石榴皮，当归、丹参、沙范子、人参、麻黄11味中药组成，5家厂产品中的6种有效成分含量差异原因可能与这11种药材的不同来源（不同产地），不同品种不同采集季节不同加工方法等等的不同有关。

目前乙肝扶正胶囊的检测文献均为HPLC单一成分的检测，如丹参酮ⅡA［5］、虎杖苷［6］、白藜芦醇，笔者采用HPLCDAD波长切换法先进技术，因为DAD这个二级管陈列检测器具有快速提供待测物的三维图谱，具有自动快速选择波长检测各有效成分的功能，本研究应用结果与曾俊芬等［3］在320nm和280nm波长处切换测定通脉口服液中5种有效成分 的效果相当，亦与Feng［2］应用本法测定中成药益宫胶囊中的10种活性成分的效果相同，结果与张硕旭等［4］所测定的结果基本一致，比我院凌英蓉等前期所用测定方法，先进科学，由单一成分的测定提高到同时测定其中的6种有效成份。

建议卫生部药典委员会，尽量采用多指标成份质量监控方法，不一定乙肝扶正胶囊的11味中药有有效成分均监测，起码本研究的6种有效成分同时检测，以改进、完善《卫生部药品标准》［1］。多指标成分定量图谱具有数据全面，图谱质优能与化学计量学紧密结合的优点和特征，能全面反映中药系统整体质量，具有良好的应用前景，已得到国内外专家肯定。

参考文献

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会，中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第一册）［S］，19891。

［2］Feng C Cai YL. Ruan ZL. Simultaneous determination of active components in traditional Chinese medicine“YIGONG”capsule by RPHPLCDAD［J］.Pharm Birned Anal.200847(2):442

［3］曾俊芬、宋金春、鲁建武等，HPLC同时测定通脉口服液中5种有效成分的含量［J］，中国药学杂志，201045(6):461

［4］张硕旭、孙冬晓、董立华等，HPLC法同时测定乙肝扶正胶囊中6种化学成分的含量［J］，中国药房，201223(27):2546~2549

［5］张穗、莫菲，HPLC测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］，中成药，200729(8):附20

［6］刘艳HPLC测定乙肝扶正胶囊中虎杖苷的含量［J］，中成药，200830(10):附24

论文作者:何泰东邱连建魏俊婷王曼茹刘志承

论文发表刊物:《中医学报》2013年12月第28卷供稿

论文发表时间:2014-3-21

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