杨艳玲
延寿县疾病预防控制中心 黑龙江省哈尔滨市 150700
摘要：目的：快速测试片法在食品微生物检测中的应用研究。方法：依据菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌的快速测试片法对食品中的微生物进行检测，与常规检测法进行对比。结果：常规法一般需要时间较长，而且要特定的温度。而测试片无需进行使用前的准备工作，大大缩短了时间。结论：结论快速测试片法自身具有的轻便、快速、简易和实用的优势，将成为未来食品微生物检测中较有前景的重要手段之一。
关键词：快速测试片；食品安全；微生物检测
食品是人类赖以生存的物质基础，其安全性直接关系到人类健康。微生物是影响食品安全最重要因素之一，食品中微生物种类、数量不仅决定食品货架期，也是评价食品安全性的主要指标。食品法典委员会（CAC）将微生物性健康危害列为食源性危害的三大原因之一。随着国内市场和进出口贸易对食品安全的重视，食品的微生物检测技术也面临着更大的压力。传统检测方法非常繁琐，需要耗费大量的人力物力，而且检测周期长、灵敏度相对较低，难以满足目前国内外对食品安全检测的要求。为此，人们相继提出了一系列简便、快捷、敏感、准确的检测新思路，快速测试片法是近年来不断取得进展的一种新型的检测方法。快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附养在上而，通过微生物在上而的生长、显色来测定食品微生物的方法 1995年，德国学者FJ.Forg发明了一种简单快速的大肠菌群快速检测法一纸片法，使原来的检测周期由72h缩短到15h，材料成本降低了3/1，同时大大简化了操作程序。
1.材料与方法
1.1所需材料
糕点食品，由木中心样品收样室提供。快速检验纸片由北京赛帝克生物技术有限公司、广东环凯微生物科技有限公司生产上海医科大学预防医学研究所研制；Petrifilm测试片由美国3M公司发明。均在有效期内使用。
1.2方法
测试片为预先制备好的培养基系统和一种冷水可溶性的凝胶剂，以及由于检测项目不同而不同的指示剂。它由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格并且覆盖有细菌生长的培养基，上层是聚丙烯薄膜。使用时只需接种一毫升待测样品的稀释液在下层的培养基上，盖上上层聚丙烯薄膜，此时聚乙烯层上的培养基由于水的作用生成水合物，适合细菌的生长。我们在实验中用得最多的是3M Petrifilm检测片。
菌落总数测试片筛选白色、无毒、中速、密度均匀、吸附力合格的滤纸，将滤纸裁剪成合适的尺寸，通常1.Ocm X 5.Ocm大小。将灭菌的TTC加大到无菌的培养基后，将无菌滤纸浸入其中，根据需要控制滤纸的培养基吸附量，以适宜的温度十燥，分装于己灭菌的聚丙烯塑料口袋内，密封备用。使用时把1mL待测液加于纸片上，压平后置于37 ℃培养箱培养16~18h，即可计数。检测纸片为一次性使用，使用后焚烧处理即可。通过实验对快速测试片法和国标方法进行对比，结果显示两种方法在统计学上无显著性差异，但由于滤纸具有较大的间隙，菌体长在纤维之间而使肉眼无法判断，所以一般比实际菌数要少。
大肠菌群、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是食品微生物检测中的常规项目，通常采用的传统方法需要大量的人力物力和较长的培养时间，而采用Petrifilm大肠菌群和大肠杆菌计数纸片（PEC）和Petrifilm金黄色葡萄球菌测试片（STX）只需24~48小时。大肠菌群、大肠杆菌检测纸片含有改良的VRB（Violet Red Bile）培养基及葡萄糖普酸酶指示剂。绝大多数大肠杆菌能产生R一葡萄糖普酸酶，与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表而覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖产生的气体，形成蓝色和深蓝色的菌落并有气泡相连。大肠菌群菌落在测试片上产酸，pH指示剂使培养基变为暗红色，在红色菌落周围有气泡者为大肠菌群。所以，一次测试即可测出大肠杆菌和大肠菌群数：带气泡的蓝色和红色菌落为大肠菌群，带气泡的蓝色菌落为大肠杆菌。
2.结果
常规法一般需要时间较长，而且要特定的温度。而测试片无需进行使用前的准备工作，大大缩短了时间。
3.讨论
食品安全问题一直是引起人们广泛关注的全球性问题之一，长期以来，科学家们都在寻求简单、快捷、准确的快速检测方法，从传统烦琐费时的琼脂平板培养法到现代方便、灵敏的各种免疫法、分子生物学及仪器联用等方法，虽然有些技术方法还存在不完善、不足的地方，通过不同种类样品的比较试验得出结论：Petrifilm大肠菌群检验方法有很强的选择性，不会出现假阳性的结果。纸片法的主要优点是：检出率高，体积较小，操作简便，培养时间短，占用空间少，特别适用于实验空间小的实验室及野外操作。第一，快速测试片可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输，携带方便，价格低廉，加之除纸片外无其他任何废液废物，大大减少或消除对环境的污染，以及试验后的清洗工作，减少了工作量。另外，避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷，故适用于实验室、生产现场和野外环境工作使用。第二，快速测试片可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实的细菌数，防止延长接种时间时由于细菌繁殖造成的数量增多。第三，常规法一般需要时间较长，而且要特定的温度，这样导致许多基层单位和食品企业不能实施，也不能达到及时检测的口的。而测试片无需进行使用前的准备工作，大大缩短了时间，
缺点为：用滤纸作载体，滤孔过大，导致滤纸双而都有菌落生长而无法计数；滤纸保水性差，检验培养中又不能保持湿度充分，不利于菌体生长；滤纸检验卡存在营养物质分布不均匀的问题，加样也不能迅速扩散，导致菌体生长分布不均匀；另外，由于显色指示剂系统单一，不能对细菌有区别地训一数，真菌会更差，所以很难全而推广。因此，开发优良的载体和更高效的显色物质十分重要。各国的专家都在致力于改善或寻求更加科学、更加完善的快速检测技术，相信随着科学技术的不断进步有更多新的技术和方法不断涌现。不久将来食品微生物检测技术一定能更好的服务于人类。
4.结语
总之，微生物检测工作将向养最快速、最简易、最可靠的方向发展，而测试片法因其自身具有的轻便、快速、简易的优势，将成为未来微生物检测中较有前景的重要手段之一，有待列为国标法。
参考文献：
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论文作者:杨艳玲
论文发表刊物:《健康世界》2015年6期供稿
论文发表时间:2015/10/29
标签：微生物论文; 培养基论文; 测试论文; 菌落论文; 纸片论文; 快速论文; 滤纸论文; 《健康世界》2015年6期供稿论文;