刘宁宁[1]2003年在《糖尿病视网膜病变大鼠模型中VEGF和PEDFmRNA的动态变化及意义》文中提出目的：评价VEGF和PEDF mRNA在不同病程糖尿病大鼠模型中的表达水平及其与DR的关系。方法：1．实验动物分组及制模：选鼠龄为12周的健康Wistar大鼠48只，雌雄不限，体重为180-220g。动物随机分成正常对照组(CON1、CON3、CON6)、糖尿病一月组(DM1)、叁月组(DM3)和六月组(DM6)。用0.1mol／L，PH4.2的柠檬酸缓冲液溶解，配制成2％STZ溶液，按60mg／Kg的体重一次性腹腔注射，注射后一周检测定性尿糖和血糖。尿糖在+++以上，血糖＞16.7mmol／L者为糖尿病大鼠。成模后每周测定一次定性尿糖，每月测定一次血糖。2、实验方法：分别取CON、DM1、DM3、DM6大鼠各8只，过量麻醉处死后立即取出眼球，左眼用于视网膜消化铺片，常规PAS染色。光学显微镜下随机取5个视野，计算每个视野中周细胞和内皮细胞数量。右眼球摘除后在4％多聚甲醛固定液中固定1-4小时后投入30％蔗糖液中过夜。次日行原位杂交技术。光镜下随机观察5个视野，记数阳性细胞数，进行定性和半定量分析。 结果：一、视网膜血管铺片形态学观察：1、定性观察：正常大鼠视网膜血管形态学改变：(1)可见完整的血管网，视网膜毛细血管管径粗细均一。(2)毛细血管内可见两种细胞成分，一种是内皮细胞，位于毛细血管中央，核较大，染色稍浅；另一种是周细胞，染色深。糖尿病大鼠视网膜血管形态学改变：(1)毛细血管迂曲怒张，走行不规则；(2)毛细血管管腔粗细不一。(3)以六个月病程的DM大鼠为重，可见退化中较长的毛细血管，管腔成闭锁状。2、定量观察：随着病程的延长，在6月时糖尿病组视网膜毛细血管周细胞的数量较1月和3月明显减少(P＜0.05)；与正常对照组比较明显减少(P＜0.05)。内皮细胞数量各组间及不同病程间相比，差异均无显着性。二、VEGF、PEDF mRNA表达结果判定：＊＊＊F在糖尿病大鼠视网膜的表达如下：病程二个月时，V五Gw－NA表达与正常者无明显区别，仅在内核层细胞和节细胞层表达，而病程3个月时，除了内核层及节细胞层的表达外，且RPE层有少量VEGF’mRNA表达。6个月时，阳性反应细胞数在内核层和节细胞层更加明显增多，IQE层可见多量阳性反应细胞。提示随着病程延长，VEGF表达的空间范围比正常增加。PEDF在糖尿病大鼠视网膜的表达如下：病程二月时，PEDFmRNA表达与正常者无明显区别，在节细胞层、内核层及RPE层均有表达，且主要在节细胞层表达明显，而病程3个月时，节细胞层，内核层PEDFmRNA阳性反应细胞数减少，RPE仅见少量阳性反应细胞。病程6个月时，内核层和节细胞层阳性反应细胞数减少更显着，RPE层几乎不见有PEDFmRNA表达。提示随着病程延长，PEDF表达的空间范围比正常减少。统计显示，随着病程延长，6个月时糖尿病组VEGFm RNRNA表达量较3个月和1个月时显着增多（P＜o．01＊与正常对照组相比明显增多（P＜o．05）；正常对照组不同病程间相比，差异均无显着性。随着病程延长，6个月时糖尿病组PEDF mRNA表达量较3个月和叁个月时显着减少（P＜o．0n；与正常对照组相比明显减少汗＜o．05）；正常对照组不同病程间相比，差异均无显着性。 结论对R的发生、发展与周细胞减少，VEGF升高、PEDF降低密切相关，同时H者的表达与DR的发生、发展存在时效和空间关系。
佚名[2]2004年在《眼底病专题》文中提出S1-01脉络膜新生血管膜治疗新进展严密四川大学附属华西医院眼科S1-02年龄相关性黄斑变性发病机制的研究进展Shikun He(何世坤)Department of Pathology and Ophthalmology,Keek School of Medicine at the University of Southern California,Doheny Eye Institute,Los Angeles
苑维[3]2010年在《益气活血法对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的影响》文中指出目的：糖尿病性视网膜病变(Diabetil retmapathy, DR)是糖尿病(diabetic mellitus, DM)最为常见和严重的微血管并发症之一,早期预防DR的发生发展一直是国内外学者研究的热点。DR的早期病理改变主要是内皮细胞增生,周细胞选择性丢失和基底膜的增厚,导致毛细血管的高通透性。这些改变与早期糖基化终产物的沉积,细胞间黏附分子表达增加促进白细胞的异常黏附,血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达失衡等有关。从中医角度看糖尿病发展至DR阶段,是一个本虚标实,虚实夹杂的证候,本虚以阴虚、气虚、阳虚为主,淤血、痰凝为标,其中淤血是贯穿于始终的。如何利用中医药预防早期DR发生和延缓其发展一直是我们关注的焦点。我们在前期的工作中用益气法使用大补元气的中药红参对DR的作用中发现,益气法从病理形态学表现可以减轻视网膜微血管的损伤,还可以明显改善糖尿病大鼠的体重,提示益气药物不但能延缓糖尿病大鼠视网膜病变的进展,还可改善糖尿病大鼠的生存状态。也有学者做过活血通络法对DR的影响,也证实有效。面对DR局部“血瘀”和全身“体虚”的状态,我们确立了益气活血的治则,从组织形态学和分子生物学水平研究其对糖尿病视网膜微血管病变的早期干预作用,并探讨其作用机理,为临床合理选用中药防治DR提供客观的实验基础。方法：本实验用链脲佐菌素(65mg/kg)一次性腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,分为正常组12只,模型组20只,对照组20只与芪参益气滴丸组(简称中药组)30只。中药组芪参益气滴丸浸膏每日(0.2g/kg.d-1)灌胃给药,对照组予多贝斯胶囊每日(0.2g/kg.d-1)灌胃给药。300天后处死动物取血后测血清血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1).并进行视网膜血管消化铺片形态学观察；视网膜消化铺片基础上免疫组织化学染色观察VEGF和ICAM-1的表达,视网膜切片基础上免疫组化观察VEGF,色素上皮衍生因子(PEDF),糖基化终产物(AGEs)的表达；利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)观察视网膜VEGF, PEDF, ICAM-1和糖基化终产物受体(RAGE)的基因表达。用图象分析仪测量免疫组化显色强度,进行定量分析。采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析处理。结果：(1)实验期间模型组、中药组、对照组的血糖始终高于正常组(P<0.01)。模型组、中药组、对照组的血糖组间差异不显着。(2)实验期间模型组、中药组、对照组的体重始终低于正常组(P<0.01)。模型组、中药组、对照组的体重组间差异不显着。(3)模型组、中药组、对照组的血清VEGF和ICAM-1含量比正常组升高,但组间无显着性差异。(4)10个月糖尿病大鼠出现了内皮细胞增生,周细胞减少,无细胞毛细血管、影周细胞等DR的特征性改变。早期用药干预后,视网膜病变明显改善。模型组同正常组比内皮细胞增生明显,周细胞明显减少(P<0.01)。而中药组、对照组同模型组比这种改变明显减轻(P<0.01),E/P有显着性差异。(5)模型组的视网膜毛细血管VEGF和ICAM-1表达比正常组明显增强(P<0.01)。中药组和对照组表达比模型组表达降低(P<0.01)。(6)模型组的视网膜VEGF和AGEs的表达比正常组明显增强(P<0.01),中药组和对照组表达比模型组降低(P<0.01)。模型组的视网膜PEDF表达比对照组明显降低(P<0.01),中药组和对照组表达比模型组增加(P<0.01)。(7)模型组的视网膜VEGFmRNA、ICAM-1 mRNA和RAGEmRNA的表达比正常组明显增强(P<0.01),中药组和对照组表达比模型组降低(P<0.01)。模型组视网膜PEDFmRNA的表达比正常组明显降低(P<0.01),中药组和对照组的表达比模型组明显增加(P<0.01)。结论：(1)益气活血法早期干预从病理形态学观察可减轻糖尿病大鼠早期视网膜病变微血管的损伤。(2)益气活血法可能降低糖尿病大鼠视网膜AGEs和RAGE mRNA的表达,减轻AGEs在内皮细胞、周细胞及基底膜沉积,减少对内皮细胞的刺激,减少VEGF的产生从而减轻毛细血管壁的功能障碍；(3)益气活血法可能通过降低视网膜毛细血管ICAM-1和视网膜ICAM-1 mRNA的表达,减轻白细胞与血管内皮细胞粘附；(4)益气活血法可能通过降低视网膜全层和毛细血管VEGF和视网膜VEGF mRNA的表达,减轻血管的通透性,可能下调ICAM-1的表达；(5)益气活血法可能通过增加视网膜PEDF和PEDF mRNA的表达,以抑制血管形成。
孔德贤[4]2009年在《冬虫夏草含药血清对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞PEDF及VEGF表达的影响》文中提出目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病重要的慢性微血管并发症之一。糖尿病肾病的早期病理改变为肾小球基底膜的增厚和细胞外基质的增多,由此导致了肾小球的超滤过和微量蛋白尿。有研究证实高糖能刺激系膜细胞合成大量的系膜基质,导致肾小球硬化。研究表明,一些生长因子,特别是转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF),与糖尿病肾脏病变的发病密切相关。高糖环境下,肾组织VEGF表达活性增加,一方面导致血管通透性增加,产生蛋白尿;另一方面,导致肾小球内的单核巨噬细胞迁移活性增加,TGF-β1产生增加,细胞外基质堆积,促进肾小球硬化。而肾脏存在的色素上皮衍生因子(pigment epithlium-derived factor,PEDF)可能通过内源性抑制TGF-β1等途径发挥了积极的肾脏保护作用。体外研究发现[1],高糖环境可显着减少PEDF在人肾小球系膜细胞中的分泌,提示高糖环境是导致PEDF分泌减少的一个直接原因,并且PEDF在糖尿病肾脏中表达的减少很可能促成了细胞外基质的过度分泌和糖尿病肾病的发展。本试验运用血清药理学方法,对体外培养的高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞应用冬虫夏草(Cordyceps sinensis,CS)含药血清进行干预,通过对PEDF和VEGF的水平进行测定,进一步研究虫草在糖尿病肾脏病变中的作用机制。方法:1实验血清的制备:雄性SD大鼠35只,随机分为3组,分别为正常对照组(n =18)、低剂量虫草提取液喂养组[(5g/(kg·d), n=8)]及高剂量虫草提取液喂养组[10g/ (kg·d), n=9]。虫草提取液每毫升含有相当于0.98g的虫草菌粉。以上各组,每日固定时间以灌胃给药的方式进行。正常对照组给予等量生理盐水灌胃。给药8天后,在最后一次灌胃2h后,以玻璃毛细管(直径1.0 mm)经大鼠眶后静脉丛采血,6h内离心、分离血清,并于56℃灭活30min,- 80℃冰箱保存待用。2细胞培养:将大鼠系膜细胞株(HBZY-1)接种于含10% FBS、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的MEM培养基中,37℃、5%CO2饱和培养箱中常规培养,每2-3天传代一次,待细胞进入对数生长期后进行操作。实验分组:①正常糖组(葡萄糖5.6mmol/L+正常对照组大鼠血清,NC组);②高糖组(葡萄糖30mmol/L+正常对照组大鼠血清,HG组);③低药组(葡萄糖30mmol/L+低剂量虫草含药血清,CS-LD组);④高药组(葡萄糖30mmol/L+高剂量虫草含药血清,CS-HD组)共四组。细胞传代后,将HBZY-1细胞按每瓶2×105接种于25cm2的培养瓶,贴壁24小时后用无血清MEM培养基静止24小时,使细胞同步化进入休止期,吸出培养基,换用四组不同MEM培养基作用24、72小时,分别收取细胞,流式细胞技术检测其细胞周期变化,观察CS对系膜细胞凋亡的影响;逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)测定细胞中PEDF及VEGF mRNA的表达;酶联免疫分析法(ELISA)测定上清液中PEDF及VEGF蛋白的表达。结果:1.流式细胞术检测提示,培养24、72h,HG组较NC组由G1期进入S期的细胞数增加,G0～G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞凋亡受到抑制(P<0.05);在CS-LD组和CS-HD组中,G1期细胞数量增加,S期细胞减少,系膜细胞凋亡率CS-HD组高于CS-LD组(P<0.05),两组明显高于HG组(P<0.05)。2.RT-PCR结果显示,培养24、72h,HG组较NC组PEDFmRNA表达明显下降(P<0.05),VEGFmRNA表达明显上升(P<0.05);CS-LD组和CS-HD组较HG组PEDFmRNA表达上调(P<0.05),VEGFmRNA表达下降(P<0.05)。3.ELISA结果显示,①培养24h四组细胞上清液中PDEF含量无明显差别(P>0.05);72hHG组上清液中PDEF含量明显低于NC组(P<0.05),CS-LD组和CS-HD组上清液中PEDF表达上调,高于HG组(P<0.05),差异具有统计学意义,CS-LD组和CS-HD组PDEF含量无明显差别(P>0.05)。②培养24h及72h HG组系膜细胞上清液中VEGF含量明显高于NC组(P<0.05),CS-LD组和CS-HD组上清液中VEGF含量显着低于HG组(P<0.05),两组之间无明显差别(P>0.05)。结论:1、冬虫夏草可抑制高糖诱导的系膜细胞数量增加,促进系膜细胞凋亡,并有一定的浓度依赖性。2、高糖环境下系膜细胞PEDFmRNA表达下降,VEGFmRNA表达上调,可能是糖尿病肾病系膜细胞增殖,肾小球硬化的机制之一。冬虫夏草可上调系膜细胞PEDF表达,下调VEGF表达,提示冬虫夏草可在mRNA水平上影响PEDF及VEGF的表达,对高糖所致的肾小球系膜细胞增殖起到一定的抑制作用。3、高糖环境可抑制系膜细胞分泌PEDF,促进系膜细胞分泌VEGF,冬虫夏草可拮抗高糖的这种作用,表明冬虫夏草保护肾脏的作用可能与调节系膜细胞中PEDF和VEGF的生成有关。
刘庆淮[5]2004年在《糖尿病视网膜氧化损伤及细胞因子表达机制的初步研究》文中认为糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy, DR)是视网膜长期暴露于高血糖状态下，血管内皮发生功能障碍而导致的微血管损伤引起的微血管病变。微血管损伤包括血管基底膜增厚、血管-视网膜屏障缺损和血管周细胞丧失，而高血糖的毒性作用是糖尿病视网膜病变最初发生的扳机点。早有文献报道，高血糖产生过多的活性氧分子(Reactive Oxygen Species, ROS)，使蛋白质糖化、细胞膜和细胞质内的不饱和脂肪酸氧化，这些氧化产物产生的细胞毒作用能损伤血管内皮细胞，并且是糖尿病微血管损伤的主要原因。同时，高血糖还可以使另一种活性氧分子NO在视网膜中产生增多，NO是氧分子和L-精氨酸在一氧化氮合酶的催化下产生的，一氧化氮合酶有叁种同工酶，分别是主要存在于中枢和外周神经细胞中的神经型一氧化氮合酶(NOS Ⅰ或nNOS)、在炎症或损伤等刺激下可存在于多种细胞内的诱导型一氧化氮合酶(NOS Ⅱ或iNOS)以及主要存在于血管内皮细胞内的内皮型一氧化氮合酶(NOS Ⅲ或eNOS)。各种类型一氧化氮合酶产生的NO其生理或病理作用各不相同，链脲佐菌素所致糖尿病大鼠的视网膜及其高浓度葡萄糖培养的牛视网膜内皮细胞NO含量增高、iNOS表达增加，并且NO可使血管-视网膜屏障通透性增高，提示作为活性氧分子重要组成部分的NO也参与了糖尿病视网膜微血管损伤的病理过程。但是中长期糖尿病视网膜中的NO及其合酶在视网膜损伤中的作用目前还没有报道。 nNOS来源的NO可以调节血管紧张度、调节血流量可能有助于减轻血管的高灌注状态，提示nNOS来源的NO对视网膜血管损伤可能具有保护作用。南京医科人学博}_学位论文 作为气体的NO会很快弥散，因而直接测定组织内的NO十分困难。组织中的NO气体可以被超氧阴离子(o:)氧化变成有细胞毒作用的过氧化峭酸盐(ONOO口)，ONOO口修饰蛋白质中的酪氨残基生成峭基酪氨酸(NT)，应用免疫组化或ELI SA方法可以间接反应组织中NO含量和02一的含量，间接反应组织中氧化应激的损伤情况。 另一方面，视网膜的损伤会释放出大量细胞因子，如TGF一口:、VEGF、PDEF、bFGF等等。这些细胞因子促使新生血管生成，新生血管极易发生破裂、出血，是糖尿病视网膜病变视力丧失的重要原因。目前已知vEGF是新生血管形成的关键因素，但是其他细胞因子也起重要作用。有研究显示，TGF一日:在DR新血管形成过程中也起重要作用，但现有报道为数不多，并有结论相反的报道。同时，关于TGF-口:在DR新生血管形成过程中的作用机制，尚无研究报道。 为了进一步研究NO和NOS在糖尿病视网膜损伤中的作用，探询TGF一日:在新生血管形成过程中的作用和作用机制。我们设计并进行了以下实验。 1、链脉佐菌素制备大鼠糖尿病模型，注射生理盐水作为对照，分别取正常对照及模型制备成功后大鼠视网膜标本进行以下实验。 2、利用免疫组化及图象处理技术，分析硝基酪氨酸在视网膜中的分布及含量。 3、利用免疫组化及Rl，一PCR技术，测定iNOS及nNOS的蛋白及mRNA表达。 4、用Westem blot方法坝，{定TcF一口:的表达，RT-PCR测定其受体TGF一口Rl及TGF一口R 11的表达。 结果发现:l、链豚佐菌素(65mg/kg)腹腔注射一次，制备糖尿病大鼠模型，南京医科人学博卜学位论文链朦佐菌素腹腔注射后，大鼠直至实验结束，血糖均维持在(l 6.65mmol几)以上，证明造模成功。 糖尿病大鼠视网膜内的NT在糖尿病2、4、SW大鼠的表达升 高，但阳性细胞只分布于神经节细胞层，提示糖尿病大鼠的视网 膜损伤首先发生在神经节细胞层。糖尿病20W的大鼠NT表达量 明显增高，并且阳性细胞遍布视网膜全层，显示随糖尿病病程进 展视网膜氧化损伤进行性加重，NO产生增多。 和对照相比，糖尿病Zw大鼠的iNOS表达增加，nNOS表达 下降，糖尿病20W大鼠的iNOS进一步增加，而nNOS几乎消失， 提示糖尿病大鼠视网膜内NO产生增多和nNOS表达下降与iNOS 表达升高有关。 糖尿病大鼠视网膜内TGF一口:随糖尿病进展表达增加，其受体 TGF一口Rl的表达和对照组相比无显着变化，而TGF一日Rn的表 达显着性增加。提示TGF一日:在DR形成过程中有重要作用，并 有可能通TGF一口Rn型受体起作用。 为进一步阐明TGF一日:在糖尿病视网膜病变形成中的作用，我们又分别收集了临床上糖尿病不伴有眼底改变与糖尿病伴有视网膜病变患者的前房液标本，以及无糖尿病患者的前房液标本作为对照，用ELISA方法测定了TGF一吕:和VEGF的含量。 结果发现，和对照相比糖尿病患者眼前房液中VEGF的含量均显着增加，并且随着糖尿病视网膜病变的进展而增高;而糖尿病无眼底改变患者前房液中TGF一口:含量与正常相比无明显变化，单纯型糖尿病视网膜病变患者的TGF一口:含量下降，伴有增生型的视网膜病变患者TGF一日:含量升高。提示TGF一口:和vEGF在糖尿病视网膜新生血管的发病过程中起协同作用。南京医科人学博卜学位论文 视网膜损伤是糖尿病视网膜病变的基础和前提条件，早期发现、及时治疗是防止糖尿病视网膜病变产生、防止糖尿病视网膜病变病人视力丧失的有效?
史雪辉[6]2004年在《PEDF、TGF-β1在BN大鼠CNV中的表达及rhPEDF对CNV抑制作用的实验研究》文中提出目的 1．应用氪激光视网膜光凝诱导BN大鼠脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization，CNV)形成，建立CNV动物模型；通过检测PCNA和FⅧR：Ag在CNV形成过程中的表达及其变化，研究CNV发生、发展过程及自然转归；对将其作为研究CNV发病机制模型的可行性进行评价。 2．以激光诱导BN大鼠CNV为模型，观察PEDFmRNA、PEDF、TGF-β1mRNA、TGF-β1、TβRI在实验性CNV形成中的表达变化，分析上述检测指标与FⅧR：Ag表达的相关性，探讨PEDF、TGF-β1在CNV形成中的作用机制。 3．以激光诱导BN大鼠CNV为模型，研究玻璃体内rhPEDF蛋白浓度增高对已形成的CNV的抑制作用。 方法 1．对7组42只BN大鼠单眼行氪激光视网膜光凝，诱导CNV形成。激光功率360mW，光斑直径50μm，曝光时间0.05s。分别在光凝后3d、1w、2w、3w、4w、8w、12w进行FFA检查、病理学检查，并用免疫组化方法分别检测光凝区PCNA和FⅧR：Ag蛋白表达及其变化。 2．对5组30只BN大鼠行单眼视网膜光凝，建立CNV模型。分别在光凝后3d、1w、2w、3w、4w摘除眼球，制作实验标本。对光凝区进行FⅧR：Ag p印F、TGF pl在日N大鼠cNv中的东达裁pEDF对eNv抑制作用的实脸研究 中友摘要免疫组化检查，观测CNV形成过程;以原位杂交技术检测光凝区内PEDFmRNA、TGF口一1 mRNA表达及变化;以免疫组化方法检测PEDF、TGF口一1、T皿I表达及变化;对阳性表达结果进行定位及半定量测定，研究PEDFmRNA、TGF口一lmRNA、PEDF、TGF口一1、T口Rl与CNV形成的相关性。 3.对2组16只BN大鼠进行单眼氢激光视网膜光凝，建立CNV模型。光凝后lw，一组玻璃体内注射2陀rhPEDF/10风BSS;另一组玻璃体内注射10件1的BSS作为对照组。光凝后Zw和4w，分别对两组动物进行FFA检查及光凝区FVmR:Ag免疫组化检测，分析比较CNV形成密度。结果 1.BN鼠视网膜光凝后lw，FFA检查光斑处开始出现圆盘样荧光素渗漏，持续至12w。光凝lw后的病理学检查可见视网膜下新生血管。光凝后3d光凝区PCNA表达最强，3d~4w逐渐减弱(尸<0.05);光凝后lw光凝区内F姗R:Ag阳性表达围成管腔，FvmR:Ag表达继续增强，3一4w时达到高峰(尸<0.05);此后阳性表达强度无明显变化(尸>.05)。 2.PEDFmRNA在正常BN大鼠视网膜神经节细胞、内核层、RPE表达。激光视网膜光凝后，激光损伤区出现了PEDFmRNA阳性染色信号;视网膜光凝后3d一4w， PEDFmRNA阳性染色密度逐渐下降(P<0.05)。 PEDF在正常BN大鼠及光凝后视网膜的阳性表达部位与PEDFmRNA相同;光凝后光斑边缘近脉络膜侧PEDF阳性信号明显高于损伤区内部。 TGF一爪mRNA在正常BN大鼠视网膜神经节细胞层、RPE层表达。视网膜光凝后，TGF一爪mRNA阳性染色信号除上述位置外，还可见于激光损伤区内;光凝后3d一4w，损伤区TGF一尽1 mRNA阳性信号逐渐减弱(P<0.05)。 TGF一爪在正常BN大鼠视网膜神经节细胞层、内核层、砂E层有阳性表达。视网膜光凝后3d一4w，TGF口一1出现了由强至弱的阳性表达(P<0.05); pEDF、TGF日1在BN大鼠CNV中的象达从pEDF对CNV抑刹作用的实脸研究 中次摘要光凝后2一4w时TGF口一1阳性表达多集中在光斑边缘近脉络膜侧。 T胆I在正常BN大鼠视网膜中及激光视网膜光凝后的阳性表达部位及变化趋势与TGF一川一致。 视网膜光凝后3d~4w，随着光凝后时间延长，损伤区内PEDFmRNA、PEnF、ToF一口lmRNA、TGF一口1、T皿I阳性染色密度下降，与F姗R:Ag阳性表达负相关(r=一0.76;一0.84;一0.87;一0.87;一0.80，P<0.05);TGF一口l、T口Rl阳性染色密度正相关(r=o.84，p<0.05)。 3.PEDF对CNV抑制作用研究结果表明，视网膜光凝后Zw和4w，FFA检查thPEDF组荧光素渗漏平均密度分别低于对照组;免疫组化检测结果，thPEDF组光凝区FvmR:Ag阳性染色密度均低于同期对照组(尸<0.05)。由Zw至 4w，对照组光凝区内F姗R:Ag阳性染色密度增加(尸<0.05)，而thPEDF组光凝区内FVlllR:Ag阳性染色密度变化无统计学意义(几0.05)。结论 1.应用氢激光视网膜光凝诱导BN大鼠CNV形成，视网膜光凝后1一4w，随着光凝后时间延长，CNV形成并持续增殖。可为CNV病因学、发病机制及治疗的研究提供理想的动物模型和可控的实验条件。 2.激光视网膜光凝后3d~4w，视网膜脉络膜损伤区内PEDFmRNA、PEDF阳性表达密度逐渐下降，与F姗R:Ag表达负相关，即与CNV形成负相关，提示，光凝区内PEDF合成不足、表达下调可能是CNV形成和增殖的一个主要原因。 3.视网膜光凝后，光凝区内TGF口一1 mRNA、TGF口一1阳性表达分布不均匀，阳性染色密度逐渐下降，与FVlllR:Ag表达负相关，即与CNV形成负相关。提示，光凝区内TGF一邵合成、分泌不足，对CNV产生和增殖可能具有一定作用。 4，视网膜光凝后，光凝区内T胆工阳性表达位置及变化趋势与TGFp PEDF、TGF pl在BN大氮CNV中
孔怡淳[7]2006年在《氧诱导视网膜病变的发病机制研究》文中进行了进一步梳理早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity, ROP)是一种增生性视网膜病变,是儿童主要致盲眼病之一。据报道ROP在我国早产儿的患病率为20.3%。氧损伤破坏不成熟的视网膜血管组织,造成视网膜的缺血、缺氧;并因而代偿性的产生不成熟的渗漏血管,即异常视网膜新生血管的形成,大量异常血管的增生会导致视网膜血管突破内界膜,甚至深入玻璃体腔,从而引发玻璃体出血以及牵拉型视网膜脱离,最终致盲。由此可见导致ROP的主要病理改变是异常视网膜新生血管的形成。然而迄今,其确切的形成机制尚不完全清楚。本研究通过对小鼠氧干预后引发氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy, OIR),模拟人类早产儿视网膜病变;并通过此模型进一步了解ROP的发病机制。 第一部分 氧诱导小鼠视网膜新生血管荧光素灌注造影及量化检测 [目的] 通过氧环境的改变诱导小鼠产生视网膜新生血管,模拟人类早产儿视网膜病变,并利用高分子量荧光素灌注造影以及组织切片观察OIR模型视网膜血管的形态及改变程度。 [方法] 1.模型制作:将7日龄C57BL/6J幼鼠放入75%±2%浓度的高氧状态下饲养5天,随后在正常氧环境下饲养5天,作为OIR模型组;同龄C57BL/6J幼鼠作为正常对照组。 2.小鼠视网膜新生血管荧光素灌注造影:在出生后12、14、17天(P12,14,17),向氧诱导视网膜病变模型小鼠的心脏灌注相对高分子量的荧光素,眼球经过组织固定后,通过显微手术镜游离视网膜并铺片,在荧光显微
李妮[8]2009年在《复方血栓通胶囊对糖尿病性黄斑水肿的防治作用和机制探讨》文中进行了进一步梳理第一部分VEGF和PEDF与血-视网膜内屏障损伤的相关性研究目的观察早期糖尿病大鼠视网膜中VEGF和PEDF的表达变化与血—视网膜内屏障损伤的关系。方法12只健康Wistar大鼠作正常组,48只大鼠建立糖尿病模型后,随机平均分为模型组、PBS干预组、Avastin干预组和PEDF干预组,喂养4周取右眼玻璃体腔内注射:正常组、糖尿病模型组行假注射,PBS组注入2μL0.01MPBS,Avastin干预组注入2μLAvastin,PEDF干预组注入2μL重组人PEDF蛋白,48小时后采用伊文思兰(EB)示踪法定量视网膜血管通透性改变,免疫组化和免疫荧光法观察视网膜VEGF、PEDF的表达变化。结果(1)糖尿病模型组EB渗漏量是正常组的2.68倍;PBS组干预眼与自身对照眼和糖尿病模型组无显着性差异,是正常组的2.78倍;Avastin与PEDF组对照眼与糖尿病模型组无显着性差异,分别是自身干预眼的2.63和2.52倍。(2)糖尿病模型组和PBS干预组视网膜VEGF蛋白表达较正常组增加,PEDF表达减少;Avastin干预后VEGF表达较自身对照眼及糖尿病模型组减少,PEDF无显着性差异;PEDF干预后VEGF表达较自身对照眼及糖尿病模型组减少,PEDF表达增加。结论(1)糖尿病早期即出现血-视网膜内屏障损伤,主要表现为视网膜血管渗漏增强。(2)血-视网膜内屏障损伤的同时伴有视网膜VEGF表达增加和PEDF的减少,抑制VEGF或增加PEDF表达,平衡VEGF/PEDF,可减轻血-视网膜内屏障损伤。(3) PEDF减轻血-视网膜内屏障损伤可能是通过负性调节VEGF表达实现。第二部分复方血栓通胶囊对糖尿病性黄斑水肿的防治作用和机制探讨目的通过观察复方血栓通胶囊对血-视网膜内屏障的影响,探讨其对糖尿病性黄斑水肿的治疗效果及作用机制。方法(1)正常雄性Wistar大鼠作为正常对照组(N组,n=12),STZ诱导大鼠糖尿病模型,将成模大鼠随机分为糖尿病模型组(DM组,n=12),复方血栓通胶囊中剂量组(FXST-M组,n=12)和复方血栓通胶囊高剂量组(FXST-H组,n=12)。(2) N组和DM组予生理盐水1ml经食道灌胃,FSXT-M和FXST-H组分别按900mg/kg和1800mg/kg剂量,同法给予复方血栓通胶囊进行治疗,每日一次,持续4周。(3) EB示踪法定量检测视网膜血管通透性改变。(4)免疫组织化学法观察视网膜VEGF蛋白表达变化,免疫荧光化学法观察视网膜PEDF蛋白表达变化。(5) RT-PCR半定量分析视网膜VEGFmRNA、PEDFmRNA变化。结果(1) DM组的EB渗漏量(36.71ng/mg)分别是N组(13.68ng/mg),FXST-H组(14.13 ng/mg)和FXST-M组(13.45 ng/mg)的2.68、2.60、2.73倍(P＜0.05),FXST-H和FXST-M组与N组比较无显着性差异,且两组间差异无统计学意义。(2)与N组比较,DM组VEGF蛋白表达和mRNA含量增加,PEDF蛋白表达和mRNA含量减少(P＜0.05),(3)FXST-M和FXST-H组VEGF的蛋白表达和mRNA含量较DM组减少(P＜0.05),与N组比较无显着性差异,PEDF蛋白表达和mRNA含量较N组减少(P＜0.05),与DM组无显着性差异。结论(1)复方血栓通胶囊能减轻视网膜血管渗漏,稳定血-视网膜内屏障,对糖尿病性黄斑水肿具有防治作用。(2)抑制VEGF过表达,平衡VEGF/PEDF比值,可能是复方血栓通胶囊防治DME的机制之一。
廖琳[9]2008年在《灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜VEGF PEDF表达的影响》文中指出目的:观察注射用灯盏花对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)及色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derived factors,PEDF)的表达的影响,探讨灯盏花素治疗糖尿病性视网膜病变的机制,为该药物的应用提供实验依据,从而为糖尿病性视网膜病变提供一个新的治疗方法。方法:采用链尿佐菌素(STZ)腹腔注射55mg/kg诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(10×2),注射用灯盏花素治疗组(10×2),另取等量正常大鼠做对照组。治疗组在出现糖尿病表现后按每日20mg/kg腹腔注射灯盏花溶液,糖尿病组和对照组同期注射等量生理盐水。注射后2,8周取左眼视网膜行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观测VEGF和PEDF的mRNA变化,右眼行免疫组化分别观察VEGF和PEDF蛋白的变化。结果:VEGF:2周糖尿病组VEGF mRNA较正常对照组明显增加(p＜0.05),蛋白表达无明显变化(p＞0.05);灯盏花治疗组VEGF mRNA较糖尿病组减少(p＜0.05),较正常组增加(p＜0.05)。叁组蛋白表达无明显变化(p＞0.05)。8周糖尿病组VEGF mRNA和蛋白表达均较两周时明显增加(p＜0.05),而灯盏花治疗组VEGF mRNA和蛋白较糖尿病组明显减少(p＜0.05)。PEDF:PEDF mRNA在2周时叁者无明显区别(p＞0.05),8周时糖尿病组PEDFmRNA较两周时明显减少(p＜0.05),灯盏花治疗组PEDF mRNA较糖尿病组明显增加(p＜0.05)。正常组,糖尿病组和治疗组叁者PEDF蛋白表达量在2周和8周时都没有明显变化(p＞0.05)结论:糖尿病大鼠视网膜中VEGF mRNA和蛋白表达增高,灯盏花治疗后VEGF mRNA表达降低;糖尿病大鼠视网膜中PEDF mRNA表达降低,灯盏花治疗后可以增加其表达。说明灯盏花素可能是通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF含量,增加PEDF表达来延缓糖尿病性视网膜病变的发展。
党维华[10]2008年在《糖尿病视网膜血管形态学变化与VEGF、PEDF表达相关性研究》文中进行了进一步梳理糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病中最为常见和最严重的并发症,已成为当今世界四大致盲疾病之一。世界范围糖尿病患者的增加,使DR成为视力丧失和视功能损害的主要原因。目的:评价糖尿病大鼠模型不同病程中血管形态学改变及VEGF和PEDF的表达与糖尿病视网膜病变的关系。方法:选取鼠龄为12周的健康Wistar大鼠60只,体重为180-220g,性别不限,雌雄兼有。随机分糖尿病一月组(DM1)、叁月组(DM3)、六月组(DM6)和正常对照组(CON1、CON3、CON6)。实验动物于标准化饲养房饲养。用链脲佐霉素( streptozocin,STZ ),溶解于0.1mol/L,PH4.2的柠檬酸缓冲溶液,配制成2%STZ溶液,按60mg/Kg的体重一次性腹腔注射,诱发糖尿病。一周后检测尿糖和血糖。尿糖在+++以上,血糖>16.7mmol/L者为糖尿病大鼠。每组取10只大鼠,过量麻醉处死后立即摘除眼球。左眼用于视网膜消化铺片,在光学显微镜下观察血管形态学改变并计数周细胞和内皮细胞数量;右眼通过原位杂交技术观察视网膜VEGF和PEDF mRNA的阳性细胞数量及表达分布来进行定量和定性分析。结果:1、视网膜血管铺片形态学改变:与正常对照组视网膜完整的血管网及毛细血管规则走行,管径均匀相比,糖尿病大鼠视网膜毛细血管管径粗细不等,迂曲怒张,管壁边缘不规则,随病程的延长,在六个月病程的DM大鼠中,可见闭塞的毛细血管这一特征性改变。与正常对照组、DM1、DM3相比,DM6的视网膜毛细血管中周细胞数减少更明显(P<0.05),差异有显着性。2、VEGF、PEDF mRNA表达水平的结果显示病程1个月时,与正常者无明显区别,VEGF mRNA在内核层和节细胞层表达,PEDFmRNA在节细胞层、内核层及RPE(视网膜色素上皮)层均有表达;病程3个月时,内核层及节细胞层的VEGF mRNA表达增多,RPE层有少量表达。而节细胞层、内核层PEDF mRNA阳性反应细胞数减少,RPE层仅见少量阳性反应细胞;6个月时,VEGF mRNA阳性反应细胞数在内核层和节细胞层更加明显增多,RPE层可见大量阳性反应细胞。节细胞层、内核层的PEDF mRNA阳性反应细胞数减少更显着,RPE层几乎不见PEDF mRNA表达。与DM1、DM3相比,DM6的VEGF mRNA表达显着增多(P<0.01),PEDF mRNA表达显着减少(P<0.01)。结论:糖尿病视网膜病变的发生、发展与视网膜血管周细胞减少密切相关,随着病程的进展, VEGF表达升高、PEDF表达降低与糖尿病视网膜血管病变的严重程度相吻合,同时与DR的发展存在时效和空间关系。
参考文献：
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[2]. 眼底病专题[C]. 佚名. 中华医学会第九届全国眼科学术大会论文汇编. 2004
[3]. 益气活血法对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的影响[D]. 苑维. 北京中医药大学. 2010
[4]. 冬虫夏草含药血清对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞PEDF及VEGF表达的影响[D]. 孔德贤. 河北医科大学. 2009
[5]. 糖尿病视网膜氧化损伤及细胞因子表达机制的初步研究[D]. 刘庆淮. 南京医科大学. 2004
[6]. PEDF、TGF-β1在BN大鼠CNV中的表达及rhPEDF对CNV抑制作用的实验研究[D]. 史雪辉. 中国人民解放军军医进修学院. 2004
[7]. 氧诱导视网膜病变的发病机制研究[D]. 孔怡淳. 天津医科大学. 2006
[8]. 复方血栓通胶囊对糖尿病性黄斑水肿的防治作用和机制探讨[D]. 李妮. 中南大学. 2009
[9]. 灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜VEGF PEDF表达的影响[D]. 廖琳. 昆明医学院. 2008
[10]. 糖尿病视网膜血管形态学变化与VEGF、PEDF表达相关性研究[D]. 党维华. 吉林大学. 2008
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