武冈市疾病预防控制中心 湖南邵阳 422401
【摘 要】目的：分析卫生微生物检验质量控制结果，探讨提升微生物检测水平的方法。方法：抽取我省疾控中心实验室盲样，进行检验分析。结果：通过各项试验，E003盲样中检测出沙门氏菌和蜡样芽孢菌，E206盲样中检测出金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢菌，检测结果上报省疾控中心，全部准确。结论：完善实验室质量控制考核制度，能够有效提高卫生微生物检测技术与检测质量。
【关键词】微生物检验；质量控制；结果分析
实验室卫生微生物检验有利于推动疾病预防控制工作的顺利开展，室内质量监控有利于提高质控人员质量意识，提升检验机构盲样检测水平[1]。本次研究对我实验室参加省疾控中心盲样考核结果进行分析与探究，具体报告如下：
1材料与方法
1.1材料
选取省疾控中心下发的微生物盲样菌种E003、E206作为质控样品。
1.2培养基、试剂
所有培养基、生化反应管（杭州微生物试剂有限公司提供）均处于有效期内，检验标准：以《食品微生物检验》为参照标准。使用标准：GB4789.4-2010、GB4789.14-2014、GB4789.10-2010。
生化检验：对沙门氏菌、蜡样芽孢菌、金黄色葡萄球菌进行生化检验，所有菌种均在有效期内，由我省微生物研究院提供。
1.3方法
1.3.1微生物培养
开启盲样，严格进行无菌操作，将冻干菌种置于胰酪大豆胨液体培养基中，于培养箱中恒温培养18~24h，观察记录其生长情况。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，置于37℃培养箱中恒温培养1d，密切观察微生物菌种生长状况，并认真记录。
1.3.2生化试验
取E003在Baird-Parker 平板和血平板上生长的菌落，置于三糖铁琼脂斜面上进行接种，菌落生长状态为斜面（-），产气、动力为阴性；采取生化试验，将其置于35~37℃培养箱中恒温培养48h，可见苯丙氨酸脱氨酶、葡萄糖酸盐、靛基质、葡萄糖产气、尿素、棉子糖、阿拉伯糖、鸟氨酸、氰化钾、枸橼酸盐、氧化酶与动力均为阴性，甲基红、木胶糖、耐氨酸、山梨醇、硫化氢均为阳性，生长状态相同。
取E206在Baird-Parker 平板上生长的菌落，接种至血平板，放在37℃培养箱中恒温培养1d，可见菌落均呈现出金黄色不透明、表面光滑、边缘整齐、圆形、中等大小的特征，周围存在透明溶血环，通过生化试验显示过氧化氢酶、血浆凝固酶、甘露醇、厌氧甘露醇呈阴性。
1.3.3血清学鉴定
选取E003菌种性沙门菌于三糖铁琼脂斜面上进行血清学鉴定，可观察到：O抗原：A-F有多价O血清（+++），++。H抗原：、呈阳性，将H抗原置于0.7%琼脂的平板上进行接种，呈现出不凝聚的状态，表现为阴性。综合生化反应结果、革兰氏染色及菌种形态的观察可知，营养琼脂平板上的不透明、融腊状粗糙菌落E003、E206均为蜡样芽孢菌。
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2结果
E003接种后，SS、EMB琼脂平板上存在无色透明、湿润、光滑的菌落，高盐甘露醇琼脂平板上无生长情况，营养琼脂平板上出现两种菌落：一种菌落为黄色，具有粗糙、融腊状特征，经革兰检查形成大杆菌，出现圆卵形芽孢；另一种菌落呈现无色半透明、湿润、光滑、隆起等特征，在EMB和SS琼脂平板上使用革兰氏染色后成为大杆菌，采用氧化酶检验显示为阴性。
E206在营养琼脂平板上存在两种菌落，一种菌落特征表现为黄色、融腊状、表面粗糙等，通过革兰检查显示出大杆菌，存在圆卵状不突出芽孢；另一种菌落呈圆形，均有半透明、光滑、湿润的特征，通过革兰检查显示为球菌，呈葡萄串状排列。
经生化试验、血清学鉴定与革兰氏染色，结合菌落形态可判定E003微生物盲样菌种中检测出的D群沙门氏菌。按照生化试验和血浆凝固酶、革兰检查结果、菌落形态，可判定E206盲样菌种中检测出的菌落为金黄色葡萄球菌。E003盲样中检测出沙门氏菌、蜡样芽孢菌，E206盲样中检测出金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢菌，检测结果上报省疾控中心，准确率为100%。
3讨论
微生物由蛋白质、核酸等成分构成，结构简单，需依靠活细胞生存，按照不同环境可分为酵母微生物、原核微生物、酵母微生物、真菌微生物等[2-3]。微生物包括病毒、细菌、酵母菌等，大部分需运用光学显微镜、电子显微镜才能观察清楚[4]。卫生微生物实验室开展质控考核的目标为：对病原菌进行分离与鉴定，处理突发事件。因选取的微生物样本中可能存在污染病原菌，检测时必须谨慎选取增菌、分离培养基，采用染色镜对菌种进行筛选，避免病原菌对样本检测率产生影响。检测卫生微生物盲样中是否存在致病性肠道杆菌，可有效减轻致病菌对人体的危害[5]。本次研究结果显示，E003盲样中检测出沙门氏菌、蜡样芽孢菌，E206盲样中检测出金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢菌，检测结果上报省疾控中心，准确率为100%，表明本实验室检测结果客观、真实，质控措施较为全面。卫生微生物质控同细菌学检测结果的准确性、真实性具有直接联系，由于现代社会经济的发展，以往的质控检验已经无法适应检验机构的发展要求，所以，检测机构应就此进行改革。质控结果的真实性、准确性容易受到环境、设施设备和满样采集等多重因素的影响，因此，质控部门应强化微生物检验技术考核与质量监督措施，加强卫生微生物实验室操作规范的建设，定期对质控质量进行评估，并及时提出改正意见[6]。开展质控工作前，有关部门应加强对操作人员平板分离技术和菌落识别技术的培训，做好人员分配工作，强化质控人员责任意识与操作技术。质控人员应定时对常用仪器进行清理，检查其操作性能、运行情况是否良好，选取的试剂是否在有效期内，合理配制营养基，并做好详细记录[7]。同时，做好实验室空气过滤和隔离防护工作，对培养基和试剂进行妥善保存。进行菌落鉴定时，应加强对特殊生化反应过程的观察，对相似病菌进行排除，以便更加清晰地分析多株病菌。若病菌生化反应不明显，应进行多次试验。此外，检验人员应树立良好的工作态度，认真操作，从而确保检测结果的客观性和准确性。
综上所述，此次检查符合最新卫生微生物检验标准，加强卫生微生物实验室质量控制考核，有利于增强检验人员质量意识，提高检测技术与检测质量，保证检测结果的准确性和真实性，有利于预防、控制疾病的发生与进展，具有较高的应用价值。
参考文献：
[1]徐韦斌.卫生微生物检验质控结果分析与探讨[J].医药前沿，2012，02（4）：384-385.
[2]李丽颖，高芳群.卫生微生物检验质控结果的分析[J].当代医学，2013，19（7）：94.
[3]赵建明，王秀梅，郭琳娜，等.2009年三门峡市卫生微生物检验质控结果分析[J].河南预防医学杂志，2011，22（5）：405-406.
[4]唐吉荣.卫生微生物检验质控结果分析与探讨[J].求医问药（下半月刊），2013，11（8）：315-316.
[5]曹利蓉.铁路卫生微生物检验质控结果分析[J].铁道劳动安全卫生与环保，2010，37（2）：106-107.
[6]宋凤燕，宋艳文.食源性致病菌质控盲样鉴定结果分析[J].职业与健康，2010，26（23）：2772-2773.
[7]安静.疾病预防控制系统微生物实验室内部质量控制[J].按摩与康复医学（中旬刊），2011，02（2）：235-236.
论文作者:欧文波
论文发表刊物:《航空军医》2015年12期
论文发表时间:2015/12/25
标签：微生物论文; 菌落论文; 芽孢论文; 平板论文; 琼脂论文; 菌种论文; 卫生论文; 《航空军医》2015年12期论文;