[结果] （1）微小RNA21在DLBCL确诊蜡块的表达量高于正常淋巴对照组，（2）其表达与国际预后指数(IPI)呈正相关。
[结论] 微小RNA21高表达与淋巴瘤的发生发展密切相关。
关键词 微小RNA21 弥漫大B细胞淋巴瘤
非霍奇金淋巴瘤发病率位于恶性肿瘤前10位， 严重危及人类健康，而弥漫大B细胞淋巴瘤是NHL最常见的一种类型，发病率在亚洲NHL患者中超过40%。DLBCL是一组临床表现和预后有高度异质性的侵袭性淋巴瘤。近年来，通过基因检测等方法来判断DLBCL生物学行为及预后的研究越来越多。
1 资料与方法
1.1一般资料：近3年我院DLBCL确诊时存档蜡块(经10％中性甲醛溶液固定及石蜡包埋)21例，选取正常淋巴结石蜡标本12例作为正常对照。标本采集时患者未接受过任何治疗，均具有临床分期相关资料。收集患者基本临床资料和实验室检查结果，按照IPI评分由高向低排列。所有病例经3名有经验的病理医师筛选，均符合2008年世界卫生组织(WHO)淋巴瘤病理学分类形态学标准诊断。
1.2方法
⑴、石蜡组织中提取总RNA用miRNeasy FFPE试剂盒提取石蜡组织中总RNA，将石蜡切片用二甲苯脱蜡，加入无水乙醇除去二甲苯，室温风干，加入150ul Buffer PKD，加入10ul蛋白酶K振荡混匀；55℃水浴15min，80℃水浴15min后，加入320ul Buffer RBC终止反应；将全部混合溶解产物转移至g DNA柱子过滤，加乙醇溶解，加入1ml BufferRP提纯。用一个干净的1.5ml的离心管收集，加入20 ul RNase-free水溶解，收集RNA。
⑵、反转录及实时荧光定量聚合酶链反应:反转录成cDNA时，20ul体系包括反转录Buffer0.75ul、反转录酶0．2 ul、无RNA酶水8.85ul、引物1.2ul和RNA样本5ul。反转录条件：16℃30 min，42℃30 min，85℃5 min。完成后一20℃保存备用。RT-PCR反应体系总体积为20ul，包括引物及探针(上海吉玛公司)0.3ul，cDNA 2ul，在Mx3005P型荧光定量PCR仪上进行RT．PCR检测，扩增条件：92 ℃ 3 min，92℃12 s，62℃1min，共40个循环。
2结果
微小RNA21基因定量扩增。正常组织表达量为1，经过专业计算微小RNA21在肿瘤组织中较正常组织高表达，特别是IPI越高的患者RNA21在肿瘤组织中较正常组织表达越高，经过我们计算其表达量中位数是正常淋巴结表达量的7.21倍，差异有统计学意义。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆（P<0.05）
3 讨论
微小RNA-21在淋巴瘤发病中的致癌基因作用与淋巴瘤发生发展密切相关。在小鼠模型中，微小RNA21在造血系统细胞的过表达导致前B细胞淋巴瘤的发生，故微小RNA21被证实为B细胞恶性肿瘤中的癌基因。微小RNA-21可通过直接或间接的参与固有的和非固有的凋亡通路促进肿瘤的形成，抑制大量抑癌基因的表达，可见微小RNA21与淋巴瘤的发生发展密切相关。
淋巴瘤初诊时确诊依据是淋巴结或病理组织活检，因此石蜡标本的获取较容易，而石蜡组织标本也是一种理想的微小RNA检测标本。目前，石蜡组织标本中微小RNA表达谱检测已较普遍应用于科研领域，而在DLBCL研究中也正展示出其重要价值。
国际预后指数(IPI)被认为是评估DLBCL预后的金标准。许多研究确定了其他一些预后相关的分子标志，寻找判断疗效和预后的指标显得尤为重要。
微小RNA21可以作为一个独立的指标直接预测各病理类型及分期的预后，为弥漫大B细胞淋巴瘤治疗方案选择提供明确的依据。通过石蜡包埋组织提取微小RNA有望成为分子病理诊断的有力工具。
参考文献
[1]宋国齐,顾玲,何帮顺,潘玉琴,王书奎.MicroRNA-21在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义[J].中国实验血液学杂志,2014,22(06):1603-1609.
[2]杨政权,谷月,金在顺.53BP1在弥漫大B细胞淋巴瘤和MALT淋巴瘤中的表达及其意义[J].牡丹江医学院学报,2014,35(06):65-67.
[3]张继新,吕晓涛,高颖,崔力方,张程燕,昌红,李保玉.microRNA-21在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2010,26(02):163-167.
[4]苏玉璇,夏瑞祥.Bmi-1和c-myc在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义[J].蚌埠医学院学报,2011,36(09):960-963.
[5]严峰.Bcl-6、P53蛋白、c-myc基因易位检测在弥漫大B细胞淋巴瘤中的临床意义[J].中国临床医学,2011,18(02):257-259.
[6]Sai Xu,Yuanyuan Chang,Zhongyu Wu,Yunrui Li,Ruo Yuan,Yaqin Chai. One DNA circle capture probe with multiple target recognition domains for simultaneous electrochemical detection of miRNA-21 and miRNA-155[J]. Biosensors and Bioelectronics,2019.
论文作者:曲东霞、马力、刘天卿，温爽，杨爱英，邹鑫
论文发表刊物:《健康世界》2019年第12期
论文发表时间:2020/1/6
标签：淋巴瘤论文; 微小论文; 石蜡论文; 细胞论文; 组织论文; 病理论文; 标本论文; 《健康世界》2019年第12期论文;