贵州省人民医院妇科 贵州 贵阳 550002
【摘 要】目的：探讨HSP27及Survivin在藏族青年女性宫颈上皮内瘤样病变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）组织中的表达，进一步了解两者在宫颈癌癌前病变的发生、发展中所起的作用。方法：采用免疫组化法（SP法），以藏族青年女性（18-35岁）宫颈活检组织为研究对象，分别检测各组蜡块标本HSP27、Survivin的表达情况，从而了解藏族青年女性CIN中两者的表达与CIN级别的关系，并初步探讨两者在宫颈上皮内瘤变的发生发展过程中的相互关系。结果：与正常宫颈组织相比，HSP27及Survivin在CIN I组、CIN II组、CIN III组中表达逐渐升高，HSP27阳性率分别为0.6％、13.3％、44.4％、76.0％，Survivin阳性率分别为0.0％、23.3％、55.6％、84.0％，各CIN组HSP27和Survivin的表达均高于正常对照组（P<0.05）；各CIN组之间HSP27和Survivin的差异有统计学意义（P<0.05）；HSP27和Survivin的表达与CIN级别的增高具有相关性（r=0.582，P<0．01和r=0．648，P<0．01）。结论：1.HSP27、Survivin在藏族青年女性CIN病变中的表达异常，提示二者在藏族青年女性宫颈癌发生发展中起重要作用，两者可能通过抗凋亡机制协同参与该疾病的发生；2.HSP27和Survivin可有助于CIN的诊断，通过检测两者的表达，可以进一步了解CIN的进展情况，对CIN的分级有一定辅助诊断价值，对疾病发展早期进行及时治疗干预具有重要的临床指导意义。
【关键词】藏族青年女性；CIN；HSP27；Survivin
【中图分类号】R161.5【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）10-038-02
宫颈癌是妇科肿瘤中的第二大常见恶性肿瘤，其病死率已跃居各类妇科肿瘤之首[1]，我国属于宫颈癌高发国家，每年新增病例13.5万，死亡率居世界第二位，超过80%的新诊断病例发生在经济情况比较差的地区。有关宫颈癌的高危因素，国内外已经做了大量研究，现在得出的结论主要集中在性行为、生育、微生物感染，不良的生活习惯等方面。近年藏族地区宫颈癌的发病率和死亡率有逐渐上升的趋势，而且发病年龄逐渐趋向年轻化，严重危害着藏区妇女的身体健康。由于宫颈癌有其特殊性，其发病的病因较明确，而且由癌前病变发展为恶性病变时间较长，因此，早期筛查癌前病变和预防是现在临床工作的重点，可有效阻断恶性行为的发展。本研究旨在通过观察HSP27和Survivin在藏族青年女性宫颈上皮内瘤样病变中的表达情况，从而探讨两者在该类人群宫颈癌癌前病变的发生、发展中的作用，探讨联合使用两者作为筛查指标的价值。
1、材料来源
本实验研究标本均选自西藏自治区人民医院医院病理科，在2007年1月～2010年9月年间年龄在18-35岁藏族女性门诊活检、阴道镜下活检及住院手术的宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织蜡块，包括CIN I 30例，CIN II 27例，CIN III25例，所有患者取标本前均未经化疗、放疗及相关特殊治疗，未见妊娠患者。另收集30例非CIN病变的正常宫颈上皮组织作为对照组，将蜡块标本均切4μm厚切片3张，1张行HE染色，2张行免疫组化染色，用规定的阳性组织作对照片。所有切片经病理专家复核。
2、实验方法
取材后，10％福尔马林固定，石蜡包埋，制作石蜡切片。免疫组织化学SP法检测HSP27和Survivin的表达。山羊抗人HSP27多克隆抗体（Santa Cruz生物公司，美国）、鼠抗人Survivin单克隆抗体、通用型二步法SP9000及山羊二步法检测试剂盒SP9003均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。PBS代替一抗作为阴性对照。
3、结果评定
在组织切片中经过染色后镜下观察见胞浆或胞核染呈淡黄至棕黄色，为阳性细胞。每张切片在高倍镜（×400倍）显微镜下找10个视野，每个视野数约100—200个细胞共计1000个，将每一张切片上表达的阳性细胞数用百分数表示。经过染色后，HSP27与Survivin的显色强度和阳性细胞数分成4级：1.显色后呈淡黄色或只有个别的细胞呈黄色，阳性的细胞记数<10％为弱阳性（+）表达；2.显色后大多数细胞染成棕黄染色，阳性的细胞记数>60％者，为强阳性（+++）表达；3.在显色强度及阳性的细胞记数两个方面介于强阳性和弱阳性两者之间为中度阳性（++）表达。4.在背景及显色后无明显改变者视为阴性。
4、统计学分析：
采用SPSS 20.0统计软件，计数资料采用 检验，HSP27、Survivin与CIN病变的相关性，采用Spearman等级相关的t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
5结果
5.1、HSP27及Survivin 的表达特征及与CIN的关系
HSP27及Survivin表达阳性染色定位于肿瘤细胞浆中，为粗细不一的棕黄色颗粒，有的呈弥漫性胞浆染色，见附图1、2。两者在 30例正常宫颈组织（简称正常组）中几乎不见阳性表达，随着宫颈病变的发展，阳性表达率逐渐增高，其中HSP27 随着宫颈CIN级别的发展，阳性表达率逐渐增高，其中CIN I 表达率为13.3%，CIN II 的表达率为 44.4%，CIN III为 76.0%，随着CIN级别的升高，HSP27蛋白表达逐渐增强。除CINⅠ与正常组无统计学差异外，其余各组间HSP27表达均存在显著差异（P<0.05）；Survivin 在CIN I 表达率为23.3%，CIN II 的表达率为 55.6%，CIN III的表达率为 84%，随着CIN级别的升高，Survivin蛋白表达逐渐增强，各组间存在显著差异（P＜0.05）。见表1。
注：与正常组比较，*P<0.05；与CINⅠ比较，#P<0.05；与CINⅡ比较，△P<0.05
5.2、HSP27表达强度与CIN级别的关系：
HSP27检测CIN的敏感性是42.68％（35／82），特异性是93.3％（28／30），阳性的预测值是94.6％（35／37），阴性的预测值是37.3％（28／75）。在宫颈的病变中，CIN的级别同样与HSP27的阳性表达，两者呈正相关（r=0.582，P<0．01），见表2。
5.4、联合检测HSP27、Survivin与CIN的关系：
将所有的组织进行Survivin染色后，将其阳性的蜡块行HSP27染色，得出联合检测宫颈疾病的敏感性为81.4％（35／43），特异性为26.7%（8/30），阳性预测值为100％（35／35），阴性预测值为25.0%（2/8）。
热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27），又名热休克蛋白B1、热休克蛋白25，是小分子热休克蛋白（sHSP）亚家族的重要一员。其重要的生物学功能是保护细胞免受各种应激因素的损伤[2]。HSP27在许多肿瘤中的过度表达，显示了在肿瘤组织热耐受和多药耐药等方面有密切关系，并与肿瘤扩散和远处浸润相关联。由于宫颈位置特殊，有独特的微环境，宫颈上皮不断的增生-修复，宫颈转化区未成熟的鳞状上皮代谢活跃，在一些物质如精子、精液组蛋白及人乳头状病毒等的刺激下，根据目前的研究发现，可以诱导肿瘤细胞产生HSP27，抑制细胞的调亡，导致宫颈癌的发生。
Survivin（生存素）是的一种凋亡抑制基因，在胚胎及胎儿期表达非常丰富除了胎盘和胸腺微弱表达外，在正常组织中不表达，Survivin过抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，导致肿瘤发生，故广泛表达于人类多种肿瘤细胞，也是迄今为止发现的抗凋亡作用最强的基因。Survivin在宫颈癌组织中高表达，其表达阳性与宫颈癌的病理分级和临床分期呈正相关，其过度表达提示预后不良。Jimenez等对人乳头状病毒相关的宫颈癌及CIN进行宫颈管粘液中survivin相关的自身抗体检测，发现宫颈管粘液中的抗Survivin的IgA抗体明显升高，这提供了一种便捷的检测方法，为Survivin可能成为宫颈癌筛查和早期诊断的指标之一。
本研究显示，在藏族青年女性CIN病变中，HSP27和Survivin均高表达于CIN组，随着CIN级别的增高，HSP27和Survivin的表达递增，与正常宫颈组织中的表达相比具有显著性差异（P<0．05），验证了HSP27、Survivin与该类人群的CIN病变发生密切相关，两者的表达增高与病变级别呈正相关。HSP27和Survivin在CIN病变的发生发展中起到了重要的作用，可能通过协同抑制细胞凋亡，参与宫颈上皮瘤样变的形成及进展。本实验研究先用Survivin色，阳性标本随后进行HSP27染色，最后得到联合两者检测CIN的敏感性和特异性比单独检测两项指标时有所增高。因此联合检测HSP27和Survivin是诊断藏族青年女性CIN病变的较好指标。
参考文献：
[1].Parkin DM.The global health of infection-associated cancers in the year 2002[J].International Journal of Cancer，2006，118：3030-3044.
[2]李伟.热休克蛋白27与肿瘤关系的研究[J].肿瘤研究与临床，2009.06，21（6）：430.
Δ通信作者：黄林，E-mail：lxf0507@163.com
论文作者:冉光伟,黄林
论文发表刊物:《系统医学》2016年10期
论文发表时间:2016/9/9
标签：阳性论文; 宫颈论文; 藏族论文; 宫颈癌论文; 细胞论文; 肿瘤论文; 组织论文; 《系统医学》2016年10期论文;