（河南省许昌市食品药品检验所 河南 许昌 461000）
【摘要】 目的：建立反相高效液相色谱法测定甲硫新斯的明注射液含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱测定方法，C8色谱柱（250×4.6mm，5μm），0.05mol?L-1磷酸二氢钾（磷酸调整PH到3）-乙腈（87:13）为流动相，流速为1.0mL?min-1，检测波长260nm。结果：甲硫酸新斯的明在6.11～14.30μg范围内，显示为良好的线性关系，平均回收率为99.89%（n=9），RSD=0.27%（n=9）。结论：该测定方法简单方便且准确，用于临床中可有效控制制剂质量。
【关键词】 反相高效液相色谱法；甲硫新斯的明；含量
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）26-0363-02
甲硫酸新斯的明为一种临床常用的异逆性抗胆碱脂酶药，临床主要用于治疗术后出现尿潴留、功能性肠胀气以及重症肌无力等疾病的治疗，可用于治疗阵发性室上性心动过速、竞争型肌松药过量中度，也可用于脑外伤后运动障碍、脑炎、脊髓灰白质等病恢复期瘫痪，且具有改善调节眼睛的作用，缓解眼结膜充血[1-2]。但因该药物的副作用比较明显，为了保证临床用药安全有效，准确测定其制剂含量是十分必要的。本次研究中采用反相高效液相色谱法测定甲硫新斯的明注射液含量，方法简单有效。
1.仪器与试药
1.1 使用仪器
本次实验中采用高效液相色谱仪，包括SIL-20AC自动进样器，CTO-20A柱温箱，LC-20AB泵，SPD-M20A二极管阵列检测器，CBM-20A色谱工作站，MILLIPORE纯水器。
1.2 使用试剂
甲硫酸新斯的明对照品，甲硫酸新斯的明注射液，乙腈为色谱纯，其余则采用分析纯，采用的水为超纯水。
2.方法以及结果
2.1 色谱条件以及系统适用性的实验
色谱条件：Phenomenex LuriaC8柱（250×4.6mm，5μm），0.05mol?L-1，磷酸二氢钾（磷酸调整PH到3）-乙腈（87:13）为流动相，流速为1.0mL?min-1，柱温设置为40℃，检测波长为260nm，进样量为20μL。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆根据甲硫酸新斯的明峰设置理论塔板数应不小于2000，外标法根据峰面积的定量统计。
2.2 对照品溶液制备
甲硫酸新斯的明对照品剂量为25mg（精密称量，保证剂量的准确），放入到剂量为50mL的量瓶中，加水溶解后进行稀释到刻度，摇晃均匀后，制作成对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备
制作的供试品溶液（甲硫酸新斯的明注射液）每1mL中应包含0.5mg的甲硫酸新斯的明。
2.4 专属性实验
取对照品溶液以及供试品溶液，另按照处方制备中不含甲硫酸新斯的明空白溶液，根据上述色谱条件取精确剂量的20μL注入液相色谱仪器测定，详细记录其色谱图，表明阴性样品不会影响测定。
2.5 线性试验
精密称量甲硫酸新斯的明对照品，选取的剂量为25.50mg，放入到50mL量瓶中，加水进行稀释溶解到刻度，混合均匀，分别进样12μL、16μL、20μL、24μL、28μL，根据上述色谱条件测定，统计色谱图。其中峰面积为Y、对照品进样量为X（μg）做线性回归计算，结果显示在6.11～14.30μg范围内甲硫酸新斯的明线性关系良。得出回归方程：Y=1589076X+2880，r=0.9999。
2.6 重复性试验
从同一批次样品中取出，根据样品测定的方法，同样进行操作重复测定6次，结果显示为RSD为0.38%，表明具有良好的重复性。
2.7 回收试验
精密称量甲硫酸新斯的明对照品9份，分别取三份20mg、25mg、30mg，放入到50mL的量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，均匀摇晃。将测定浓度80%、100%、120%溶液制作成样品溶液。按照上述制作对照品溶液方法制作，找样品测定项的方法同样操作，统计回收率，统计平均回收率为99.89%（n=9）。
2.8 精密度试验
从供试品溶液中取出20μL，并根据上述色谱条件，连续6次进样，根据峰面积评价精密度，RSD=0.04%（n=6）。
2.9 稳定性试验
从含量测定项下供试品溶液中取出一份，分别在0、2、4、6、8h进样，并按照样品测定项下方法，操作方法相同，结果RSD为0.09%。
2.10耐用性试验
调整流动相比例，磷酸二氢钾-乙腈分别为85:15、90:10，并对磷酸二氢钾的pH值进行调整，改用不同型号C8柱。分别在不同实验条件下进行考察，按照具体的方法规范进行测定，测定结果显示为样品溶液所记录的组份色谱图峰良好，理论塔板数可满足其条件。
2.11测定样品含量
具体测定方法：根据上述色谱条件取供试品溶液、对照品溶液制备方法分别制备供试品溶液、对照品溶液，并取20μL分别注入到液相色谱仪，详细观察并统计色谱图，根据外标法计算含量，结果显示141011、150521、160211这三个批号的含量（%）以及RSD分别为98.82%、0.4%，101.30%、0.07%，99.70%、0.03%。
3.讨论
3.1 选择检测波长
取适量甲硫酸新斯的明对照品，加水进行溶解后定量稀释为每1mL中含0.25mg的甲硫酸新斯的明溶液，紫外扫描的范围在400～200nm范围内，图谱显示结果为在260nm处吸收最大，因此可将其作为检测波长[3-4]。
3.2 选择色谱系统
采用Phenomenex LuriaC8柱，根据药典检测有关物质流动相为0.05mol?L-1磷酸二氢钾（磷酸调整PH到3）-乙腈（85:15）。本次实验中调整了磷酸二氢钾以及乙腈的比例，结果显示在相同条件下用87:13的比例出峰时间更佳。考查磷酸二氢钾pH值，并对比实验中是否加离子对比剂，结果表明，加入离子对比剂不会提高理论塔板数。pH为3时，此时峰形最佳。最终考虑到峰形，出峰稳定性以及时间等因素[7-8]。试验中流动相为0.05mol?L-1磷酸二氢钾（磷酸调整PH到3）-乙腈（87:13），不需采用离子对试剂，可以更方便准确有效的测定制剂含量。
综上所述，本文中建立反相高效液相色谱法测定甲硫酸新斯的明注射液制剂，具有较高的精确性，且简单方便，有利于提高临床检测的准确性。
【参考文献】
[1]张巧真，反相高效液相色谱法测定人血中富马酸喹硫平浓度及其在临床药学中的应用[J].药学实践杂志，2016,34（1）：48-51.
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[3]安珍珍，RP-HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定普罗布考片中3种有关物质的含量[J].沈阳药科大学学报，2015,32（12）：951-955.
[4]谢清萍，RP-HPLC法同时测定小儿咽扁颗粒中5个成分的含量[J].药物分析杂志，2015,35（12）：2163-2167.
论文作者:刘俊波
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第26期
论文发表时间:2016/9/13
标签：色谱论文; 溶液论文; 硫酸论文; 磷酸论文; 含量论文; 高效论文; 液相论文; 《医药前沿》2016年9月第26期论文;