崔彬１ 姜汉国２ １．广东省廉江市人民医院病理科 广东 廉江 ５２４４００;２．广东医学院病理教研室 广东 东莞 ５２３０００
【摘要】 目的 探讨CD４＋CD２９＋辅助性T细胞在胆管癌发病机制的作用.方法 收集１６例胆管癌患者外周血及手术活检标本,采用流式细胞术检测外周血CD４＋CD２９＋T细胞及其胞内肿瘤坏死因子α(TNF－α)及γ干扰素(IFN－γ)的百分含量;收集１３例胆管炎患者作为对照.采用免疫组化SP法检测胆管组织内CD４及CD２９分子的表达含量,以及TNF－α及IFN－γ的含量.结果 与对照组比较,胆管癌患者外周血CD４＋CD２９＋T细胞的百分含量明显升高(P＝０．０１６),但胞内TNF－α及IFN－γ却无统计学差异(分别为P＝０．１１４及０．２２３).免疫组化显示胆管癌患者胆管组织内CD４、CD２９分子及TNF－α表达含量均明显高于对照组(分别为P＝０．００２、０．００６及０．０２１),但IFN－γ含量却明显降低(P＝０．０１３).结论 CD４＋CD２９＋辅助性T 细胞及其胞内TNF－α升高, 而IFN－γ降低,导致Th１/Th２平衡向Th１倾斜,可能是胆管癌的新型免疫机制. 【关键词】 胆管癌; 辅助性T细胞; 免疫组化; 流式细胞术【中图分类号】R３９２【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０５９４－０１
胆管癌的发病机制尚未明确,目前已知其与免疫存在重要关系.研究表明,辅助性T细胞的异常,导致抗原提呈过度致使肿瘤微环境破坏,最终导致正常细胞的过度增值,是肿瘤的一个新机制[１].在辅助性T 细胞亚群当中,CD４＋CD２９＋T细胞是相对独特的,在部分肿瘤发病当中起到重要角色[２]. 但目前尚无研究探讨该细胞在胆管癌患者的表达及其意义,这对进一步阐明胆管癌的免疫机制是不利的.本研究从全身及肿瘤局部入手,探讨该细胞在胆管癌患者外周血及癌组织的表达情况,发现胆管癌患者该细胞数量增加,具体过程如下:
１ 资料与方法
１．１ 患者资料 选取２００５至２０１２年期间我院收治的胆管癌患者作为观察对象,入选条件如下:经手术切除标本,经HE染_______色确诊为胆管癌,近８周内未使用糖皮质激素或免疫抑制剂等,最后共入选１６例,男性１０例,女性６例,年龄(５６．７２±１３．４６)岁.选取同期行手术治疗的１３例胆管炎患者作为对照组,其中男性８例,女性５例.经检验,两组患者的性别构成及年龄均无统计学差异.
１．２ 流式细胞术 清晨采集以上对象的静脉血约５ml,使用Beckmancoultercell多色流式细胞仪,分别检测CD４及CD２９双阳性的T 细胞所占的百分比, 从而代表CD４＋CD２９＋T细胞的数量.使用DMI６０００B荧光显微镜(Leica公司生产)观察并摄像,FITC 的激发波长为４８８nm,TRITc的激发波长为５６８nm,用于图像采集的显微镜物镜为４０倍油镜,数值孔径为１．３.CD４工作浓度１:５０,绿色荧光;CD２９工作浓度１:１００,红色荧光;DAPI核染,蓝色荧光,两者共表达则表现为黄色荧光,定位方面以细胞质为主.为定量分析两种胶质瘤细胞系中CD４及CD２９荧光强度,选择细胞较为密集的区域,每高倍视野随机选取２０个肿瘤细胞,利用Leicaconfocalsoftware软件分析荧光强度,分析荧光强度所占视野平均强度的百分率,并且重复观察３次,以相对平均荧光强度作为该蛋白的相对表达量(采用百分数表示). １．３ 统计学处理
２ 结果
２．１ 外周血流式细胞术 与对照组比较,胆管癌患者外周血CD４＋ CD２９＋ T 细胞的百分含量明显升高(P＝０．０１６),但胞内TNF－α及IFN－γ却无统计学差异(分别为P＝０．１１４及０．２２３,表１左侧,图A 及B).
２．２ 免疫组化 本研究的１６例患者当中有１１例为高分化腺癌,HE染色见癌组织均在管壁内浸润生长,环绕整个管壁;浸润的癌组织呈大小不等,形状不规则的腺体结构,部分可扩大呈囊腔.低分化腺癌３例:镜下可见癌组织部分呈腺体结构,部分为不规则的实性片块,亦在管壁内弥漫浸润生长.经免疫组化检测,发现最具特异性的CD２９分子呈褐色,多表达于胆管壁.经t检验,发现胆管癌患者胆管组织内CD４、CD２９分子及TNF－α表达含量均明显高于对照组(分别为P＝０．００２、０．００６ 及０．０２１),但IFN－γ 含量却明显降低(P＝０．０１３,).
３ 讨论
本研究的流式细胞术结果显示,与对照组比较,胆管癌患者外周血CD４＋CD２９＋T细胞的百分含量明显升高,但胞内TNF－α及IFN－γ却无统计学差异.免疫组化显示胆管癌患者胆管组织内CD４、CD２９分子及TNF－α表达含量均明显高于对照组,但IFN－γ含量却明显降低.以上初步说明,CD４＋CD２９＋T细胞在胆管癌发表起到重要作用,以下就该问题进行讨论.T细胞是一群表面表达CD３分子的淋巴细胞,大致可以分为CD４＋ 辅助性(Th)及CD８＋ 杀伤性(Tc)两个大的T 细胞亚群.其中Th可分为Th１及Th２两个亚群,并且两者构成Th１/Th２平衡,其中Th１细胞以分泌IL－２及IFN－γ为特征,主要支配机体的细胞免疫;而Th２细胞以分泌TNF－α及IL－４等细胞因子为特征,主要支配机体的体液免疫＝;已有研究发现Th１/Th２ 与多种肿瘤相关,包括肺癌、肝癌、子宫颈癌等,但对于胆管癌患者,CD４＋CD２９＋T细胞究竟起到何种作用目前尚不明确,更不清楚胆管癌患者CD４＋CD２９＋T细胞的异常对Th１/Th２平衡的失调. 本研究发现,胆管癌患者外周血CD４＋CD２９＋T细胞的百分含量明显高于对照组,但胞内TNF－α及IFN－γ却无统计学差异,这说明对于全身免疫(外周血),CD４＋CD２９＋T细胞的改变最为明显,且对肿瘤诊断有一定的意义.更具有临床价值的现象是:在癌组织内,CD４、CD２９分子及TNF－α表达含量均明显高于对照组,这进一步印证了CD４＋CD２９＋T细胞是胆管癌的一个负面指标,可能与胆管癌的发生及加重有关.至于胆管癌患者IFN－γ下降,说明IFN－γ可__________能是一个抗肿瘤作用,起到正面作用.由于IFN－γ属于Th１类细胞因子,TNF－α属于Th２细胞因子,今发现胆管癌患者IFN－γ降低,TNF－α升高,导致Th１/Th２比值下降,是胆管癌的一个重要特征. 通过CD４＋CD２９＋ 辅助性T 细胞及其胞内TNF－α升高,而IFN－γ降低,导致Th１/Th２平衡向Th２倾斜,可能是胆管癌的新型免疫机制,这对于胆管癌的诊断具有重要价值. 参考文献[１] 詹茜,沈柏用,施源,等．S１００A９与CCT在胆管癌中的表达及其意义[J]． 外科理论与实践２０１１,１６(６):５５７－５６１． [２] 王谨,李升平,王俊,等．大鼠肝内胆管癌发生发动态变化的相关性展与调节性T细胞[J]．中华实验外科杂志,２００９,２６(１２):１５９４－１５９７． [３] 程帝,李志花,陈汝福,等．上调SMYD３ 对人胆管癌FRH０２０１ 细胞中DNMT３B表达及细胞增殖的影响[J]．中国病理生理杂志,２０１２,２８(３):４１５－４１９．
论文作者:崔彬１ 姜汉国２
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/3
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