杨晓梅[1]2003年在《抗人类疱疹病毒7型单克隆抗体的制备及应用》文中认为人类疱疹病毒7型(Human herpesvifus 7，HHV-7)是1990年Frenkel等首先在激活的健康人外周血T淋巴细胞中发现的。1992年，Berneman等从慢性疲劳综合征(CFS)患者PBMCs中分离出另一株HHV-7。HHV-7基因组全长145kb，在DNA水平上与CMV和HHV-6有很高的同源性，是β-疱疹病毒亚科中的新成员。血清流行病学调查发现，健康成人普遍感染过HHV-7(＞85％)，且初次感染多发生于1岁左右，但略迟于HHV-6的感染。 与HHV-6相似的是，HHV-7也能在CD4~+T淋巴细胞上生长良好，但不同于HHV-6的是，HHV-7感染主要是通过与T淋巴细胞表面CD4分子结合，HHV-7感染后引起细胞表面和胞内CD4分子均下调，抗CD4单抗和可溶性CD4能阻断HHV-7感染，而CD4分子也是HIV-1感染细胞的主要受体之一。鉴于HHV-7与HIV-1之间共用CD4分子作为受体，在体外试验中并可观察到HHV-7与HIV-1感染细胞的拮抗关系，这为AIDS治疗提供了新思路。 目前还未发现HHV-7与任何疾病有确实可靠的关系，目前认为HHV-7的感染主要与幼儿急疹(ES)和一些发热性疾病、慢性疲劳综合征、玫瑰糠疹(PR)等有关。 我室在国内首次分离鉴定出HHV-7南京地方株YY1、YY2、YY5、YY6四株，并已详细研究了YY5株病毒学、免疫学、生物学特性及病毒形态学超微结构，为进一步研究打下了基础。 本文用纯化过的YY5病毒株免疫6-8周龄雌性Balb／c小鼠，用常规 南京医科大学硕士学位论文方法融合，间接ELISA方法筛选，经3次有限稀释克隆化后，3株细胞仍能持续稳定分泌特异性抗体，命名为 6 H 9、6 Cll、4 D 5。将 3次亚克隆后的细胞传代扩增，注射Ba八小鼠制备腹水，并初步纯化。细胞染色体计数显示3株细胞染色体数均大于98条，确系杂交瘤细胞；单抗鉴定表明：6H9为IgGI亚类，6Cll、4D5为IgM类；腹水效价分别为1：6．4 X 10‘、1：1．28 X 10’、1：IX 10’；免疫荧光试验显示：单抗6Cll只与感染了HHV－7白SUpTI圭月 呈现阳 性反应，而与正常SllpTI 细胞 不呈阳性反应，这表明单抗6C 11．q能与HHV刁感染的SUpTI细胞表面表达6 病毒蛋白结合；W。stern－blot试验进一步表明单抗6Cll 自 与约7 OKDa的病毒蛋白结合。 本研究取4乃岁儿童唾液标本31例，接种于SllpTI细胞，12日后镜下观察见细胞有病变效应，以 6Cll为一抗做免疫荧光，6例标本见明显阳 性反应。（N。 10，20，ZI，24，27，28） 我室制备并初步鉴定的 3株抗人类疤疹病毒 7型南京分离株YY 5的单克隆抗体，将为进一步深入研究M盯 J的生物学特性及洲M 刁与疾病的关系打下基础，并为临床特异快速诊断提供可能。
姜兰兰[2]2008年在《抗人类疱疹病毒6型南京株E5单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用》文中研究指明人类疱疹病毒6型(Human herpesvirus 6,HHV-6)是一类嗜人类淋巴细胞的双链DNA病毒,于1986年由美国癌症中心的Salahuddin等首先从淋巴增生及AIDS患者外周血单个核细胞中分离到,与人类疱疹病毒7型(HHV-7)及人巨细胞病毒(CMV)同属于疱疹病毒β亚科。目前认为HHV-6是婴幼儿急疹(ES)的病因,另外还与神经胶质瘤、脑膜脑炎、AIDS、慢性疲劳综合症、器官移植后感染、多发性硬化症等多种疾病有关,但其致病机理目前尚未清楚。HHV-6基因组为一线性双链DNA分子,大小约160～170Kbp,结构上可分为3个部分,即序列独特区(UL区),左右末端各有一个正向重复序列(DRL和DRR区),且有119个开放读码框(ORF)。根据其基因结构差异和抗原性可分为HHV-6A、B两种亚型,GS、U1102是HHV-6A亚型代表株,而Z29是B亚型代表株,且序列的同源性在96%以上,HHV-6广泛存在于健康成人及儿童外周血淋巴细胞和唾液中,其原发感染一般发生在6个月～2岁的婴幼儿,高峰期在6～9个月,其后在体内建立持续性感染,并长期呈潜伏感染。我室于1994年在国内首次分离鉴定出HHV-6南京地方株8株,并详细研究了南京株E5(CN5)的病毒学、免疫学、生物学特性及病毒形态学超微结构,为本次研究奠定了良好的基础。本研究采用蔗糖密度梯度离心法纯化的南京株HHV-6 E5病毒抗原免疫8周龄、雌性BALB/c小鼠,采用常规方法融合,间接ELISA方法筛选,并经3次有限稀释法亚克隆后,获得3株能持续稳定分泌特异性抗HHV-6抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为JA9、JYE7、JYE8。将获得的3株杂交瘤细胞株传代扩增,注射到用Pristane预刺激的BALB/c小鼠体内制备腹水,并进行初步纯化。单抗Ig亚类鉴定表明:JA9为IgG1,κ亚型、JYE7和JYE8为IgM,λ亚型;腹水效价分别为1:0.8X10~5、1:0.256X10~5、1:0.128 X10~5;杂交瘤细胞染色体计数显示3株细胞染色体数均约95条以上;间接免疫荧光实验显示:3株单抗均能与HHV-6 E5感染的CBMCs呈阳性反应,而与未感染CBMCs呈阴性反应;其中JA9单抗Western-blot实验结果进一步表明其可与HHV-6 E5约75ku大小的病毒蛋白结合。本研究收集口腔肿瘤(口腔鳞癌及其癌前病变)、脑肿瘤(神经胶质瘤及脑膜瘤)、婴幼儿急疹、免疫抑制剂使用者(肾移植及肾病综合症)及健康人群唾液标本分别为41份、40份、36份、37份、40份,共194份。采用巢式PCR及ELISA法检测唾液标本中HHV-6的阳性率,结果患者的HHV-6阳性检出率均高于健康人群且有统计学意义。本研究在自分离鉴定的HHV-6南京株E5的基础上,成功制备并初步鉴定出3株抗人类疱疹病毒6型南京株E5的单克隆抗体,将为HHV-6的进一步研究奠定基础,并为临床诊断提供了可能。
杨晓梅, 姚堃, 朱建中, 丁传林, 窦洁[3]2003年在《抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定》文中进行了进一步梳理目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗(HHV-7)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为6H9、6C11、4D5。单克隆抗体亚类鉴定表明:6H9为IgG1类,6C11、4D5为IgM类。用间接ELISA方法检测单抗腹水滴度分别为:1:6.40×104,1:1.28×105,1:1.00×103。免疫印迹试验结果表明:6C11能与分子质量约70 ku大小的病毒蛋白结合。结论:成功制备并鉴定3株抗HHV-7单克隆抗体,为进一步研究HHV-7的特性及为临床快速诊断提供可能。
参考文献：
[1]. 抗人类疱疹病毒7型单克隆抗体的制备及应用[D]. 杨晓梅. 南京医科大学. 2003
[2]. 抗人类疱疹病毒6型南京株E5单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用[D]. 姜兰兰. 南京医科大学. 2008
[3]. 抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 杨晓梅, 姚堃, 朱建中, 丁传林, 窦洁. 南京医科大学学报(自然科学版). 2003