苗晓辉 长春中医药大学附属医院 检验科 130021
【摘 要】目的 对采用血清学标志物检测确定为乙型肝炎的患者进行实时荧光 PCR 检测，探讨实时荧光 PCR 检测的临床应用价值。方法 首先要对患者采用血清学标志物这种方法检测，进一步确定他是乙型肝炎的患者。再次就是选择500例患者进行检测，这样有利于保证实验的准确性。结果 几种乙肝模式中，“大三阳”患者的DNA阳性检出率和拷贝数均比其他模式高，并有显著性差异。PreS1-Ag的阳性率与乙肝DNA的阳性率有很好的一致性，但由于两者检测的成分和表达的意义不完全一致，因此不能等同于或代替HBV-DNA的检测。结论 PCR定量测定H13V-DN13可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况，更有利于临床治疗和疗效观察。
【关键词】乙型肝炎病毒；实时荧光 PCR；DNA；临床意义
乙肝是目前世界上最常见、最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一，其传播广，危害性较大，易形成持续性带病毒状态而转为慢性感染，少数甚至转变为肝硬化一、原发性肝细胞癌。荧光PCR技术融合了PCR和DNA探针杂交技术的优点，解决了PCR定量和防污染等问题，而且具有快速、准确、特异等特点。本研究采用实时荧光PCR法进行HBV-DNA检测共500例，报道如下。
1、资料与方法
1.1一般资料
首先选择可能携带乙型肝炎的患者，这些患者最好是年龄跨度较大，在15一70岁的年龄段中都有患者存在，这样更有利于实验的准确}h}，防止出现偏差。然后采用血清学标志法进一步确定他们是乙肝患者，这样可以使实验结果的偏差较小。最重要的是要记录好乙型肝炎患者中乙肝病毒DNA的数据，并且要注意保存仔细。然后将这500位乙肝病毒携带者和患者，再用荧光PCR的方法对其进行检测，然后仔细记录这些数据。最后把用血清学标志法检验的乙肝病毒DNA数据与用荧光PCR方法检验的乙肝病毒DNA数据做比较，然后把比较的数据进行分析，并用论文的形式呈现出来。
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1.2 方法
1.2.1 试剂和仪器
乙肝血清标志物检测试剂盒来自兰州标佳生物技术有限公司，批号分别为：表面抗原20081206，表面抗体20090302，E抗原20090201，E抗体20081104，核心抗体20090201，前S1抗原为20081002；HBV-DNA试剂购于中山大学达安基因股份有限公司；酶标仪为上海瑞美公司MultisKanMK3；PCR仪为中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增实时荧光检测系统DA7600型。
1.2.2 方法
采用一次性真空采血管，清晨空腹抽取静脉血5 rnl，离心分离血清，负20度冻存备用，集中检测。乙肝标志物检测采用时间分辨荧光免疫分析技术，HBV-DNA采用实时荧光定量PCR法。
1.3疗效标准
显效：观察组即用荧光PCR方法检测乙肝病毒的数据与对照组即用最普通的检验方法血清学标志法检验的乙肝病毒数据作比较，发现差别不大，而且用荧光PCR方法检测的乙肝病毒数据更加准确，PCR拷贝数较高的是大三阳者和小三阳者。效果不明显：观察组即用荧光PCR方法检测乙肝病毒的数据与对照组即用最普通的检验方法血清学标志法检验的乙肝病毒数据做比较，发现差别效果较小，而且荧光PCR方法在准确度上还有其他数据中也没有突出的表现。无效：观察组即用荧光PCR方法检测乙肝病毒的数据与对照组即用最普通的检验方法血清学标志法检验的乙肝病毒数据做比较，发现观察组的数据与对照组的数据差别较大，且对照组的数据不及观察组的数据准确。
1.4 统计学处理
采用χ2检验进行统计学处理，以P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
通过实验，发现实时荧光PCR方法检验乙肝病毒的DNA数据很准确，有良好的临床意义。且疗效标准是显效，即用荧光PCR方法检测的乙肝病毒DNA数据与用普通方法血清学标志法提供的乙型肝炎病毒DNA数据相似，且在用荧光PCR方法检测的数据更加准确。比如数据显示，HbsAg（+）、HbcAb（+）即大三阳中的阳性率达}i]了97%，HbsAg（+）、HbeAb（+）、HbcAb（+）即小三阳的阳性率则是70%，而HbsAg（-）、HbsAb（-）、HbeAg（-）、HbeAb（-）、HbcAb（-）的阳性率则是22%。这充分证明了实时荧光PCR方法检验肝病毒的DNA具有良好的临床效果，值得临床应用。
3、讨论
血清H BV标志物（H BVM）的检测给临床诊断乙肝病毒感染提供了较便捷的诊断依据。其检测重复性好，而且还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题。而荧光定量PCR检测法在进行HBV-DNA检测的同时可对HBV-DNA进行量化，从而可对乙型肝炎患者体内的HBV复制以及传染性有更直接的了解，有利于临床对HBV感染、选择治疗方案及判断预后提供更为客观的依据。实时荧光PCR技术不仅融合了PCR和DNA探针杂交技术的优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化，而且整个实验过程均在完全封闭的状态下进行，不需要PCR的后处理和电泳检测，解决了PCR定量和防污染等问题，具有快速、准确、特异等优点，是判定HBV感染及其传染性高低的一项重要诊断技术。综上所述，检测HBV-DNA作为判断乙肝患者是否具有传染性，为乙肝患者合理治疗提供了依据，定量PCR检测HBV-DNA在判断体内HBV是否在复制、复制程度、HBV是否被清除等方面有重要作用，而且为临床观察药物疗效、病情转化等提供了有力的依据。
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论文作者:苗晓辉
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2016年1月第1期
论文发表时间:2016/4/19
标签：荧光论文; 数据论文; 乙肝病毒论文; 乙型肝炎论文; 方法论文; 血清学论文; 实时论文; 《中国医学人文》(学术版)2016年1月第1期论文;