杨晶晶1 柴显达2
（1贵阳市口腔医院 550000）
（2安顺市第一人民医院 553001）
【摘要】目的 比较富血小板纤维蛋白(platdet-rich fibrin,PRF)联合异种骨（BIO-OSS）与异种骨（BIO-OSS）单独使用，对修复犬牙槽骨即刻种植种植体周骨间隙的效果。方法 选12只健康杂种犬, 采用自身对照的方法。在全麻下拔除狗的左右第一前磨牙，彻底骚刮拔牙窝，在拔牙窝近中处即刻植入种植体，在种植体远中面制作一个宽3mm，深4mm的骨缺损间隙，随机选择实验组与对照组，实验组填充BIO-OSS与PRF混合物，对照组填充BIO-OSS，分别于4、8、12周处死动物各4只, 获取完整标本，行X线片灰度值检测, 进行骨密度分析;行组织学染色检测, 测量新生骨面积。结果 术后4、8、12周实验组灰度值高于对照组，有显著差异(P<0.05)，新生骨面积实验组大于对照组，差异有统计学意义( P< 0. 05) 。结论 PRF与BIO-OSS联合，有促进即刻种植体周骨间隙修复的作用。
【关键词】 富血小板纤维蛋白 骨间隙 即刻种植
【中图分类号】R782 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）02-0115-02
即刻种植技术即在拔牙后立刻种植，修复缺失牙。由于其有缩短疗程及可以预防牙槽骨吸收等优点，深受广大患者欢迎。但是种植体与拔牙创之间的间隙，使骨结合无法形成，成为即刻种植失败的主要因素，如何解决这一问题成为研究热点，本实验建立即刻种植体周骨间隙模型，探讨PRF复合异种骨对种植体周围骨间隙修复的促进作用,为临床应用提供可靠依据。
1 材料与方法
1.1研究对象 选择健康杂种犬12只,无全身及口腔疾病，年龄1-2岁，体重12-14kg,雌雄不限，适应性喂养一周后开始实验。
1.2试剂和器材 纯钛种植体（Dio公司，3.8×8mm，韩国）、无机牛骨(BIO-OSS Geistlich 公司, 瑞士) 、种植机（安多健，韩国）、牛凝血酶(Sig ma 公司, 美国)、骨密度测量仪(Challenger DMS 公司)、Medifuge 离心机（Silfradent，意大利）、BI2000 型图像分析系统(中国四川)等。
1.3实验方法
1.3.1PRF 的制备 术前用真空采血管采血10mL（真空负压管，不含抗凝剂等任何添加剂），立即在离心机上以3000 r/min 离心10 min,可见3个颜色不同的层面:上层呈淡黄色澄清液体,为乏血小板血浆(plateletpo or plasma, PPP)，下层呈疏松的红色胶冻状物,主要为红细胞;中间一层呈淡黄色凝胶状,为富血小板纤维蛋白，即PRF。将获得的PRF凝胶置于无菌纱布上,根据需要将其用剪刀剪为1*2mm大小的微粒状，用1gPRF与1g BIO-OSS 材料调拌混匀, 备用。
1.3.2手术方法 对犬行全麻、侧卧固定，常规消毒、铺巾。拔除双侧第一前磨牙，在拔牙窝旁做切口,暴露牙槽嵴顶，确定种植体方向及深度,先锋钻在原拔牙窝近中处钻入3mm，扩孔钻依次逐级预备，拔牙窝远中处制作一骨缺损区，宽3mm，深4mm，其间用常温生理盐水冲洗降温，防止术区骨组织坏死。即刻植入种植体至与骨嵴平齐，两侧随机选择实验组与对照组，实验组填充BIO-OSS与PRF混合物，对照组填充BIO-OSS，伤口进行严密缝合，术后给予抗菌素预防感染。术后4、8、12周用空气栓塞法处死动物，每组4只，获取完整下颌骨种植体骨块标本，行组织学染色检测, 测量新生骨面积。
1.4观察指标
1.4.1组织学检查 在距种植体周骨缺损区4mm 处取材,福尔马林固定，硝酸脱钙,丙酮脱水,石蜡包埋,切片,HE染色后光镜观察。
1.4.2新生骨定量分析 在3个时期的每组标本，随机选取5张组织学切片,用光学显微镜(*100)观察新生骨形成情况,采集上下左右及中心区5个视野图像,用BI2000 型图像分析系统进行测量，计算新生骨与缺损重建区总面积的百分比，结果进行统计学分析。
1.5统计学处理实验数据采用SPSS16.0软件进行t检验，计量资料以±s表示,x-P<0.05表示有明显差异。
2 结果
2.1大体观察 所有动物均健康，无死亡及术区感染发生，创口愈合良好，无裂开现象。所有种植体稳定性好，无松动及脱落现象，用金属口镜柄轻敲种植体顶部，声音清脆。实验组与对照组中，种植体周原骨缺损区可见新骨生成，并紧密包绕种植体，随着时间的延长，缺损区凹陷渐小，但同一时期实验组缺损区伤口愈合比对照组更平整。
2.2组织学观察 术后4周犬牙槽骨缺损间隙区开始有新生骨形成, 实验组成骨细胞呈大立方形，单层覆盖在已经形成的类骨质周围，新生骨小梁呈条索状，对照组与之相似, 但毛细血管较稀疏, 细胞成分较少, 纤维组织较多，新生骨小梁呈点状分布。术后 8 周骨缺损间隙区新骨形成活跃，实验组可见大量新生类骨质和骨基质，成骨细胞及毛细血管依然较多，新生骨小梁粗大致密, 融合成网状, 对照组成骨细胞相对较少，血管较稀疏，新生骨小梁少而纤细，排列不规则。术12周大立方形成骨细胞开始缩小，变为骨细胞，陷入自身或邻近成骨细胞分泌的骨基质中，骨缺损间隙区新生骨小梁开始矿化成熟。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆实验组骨基质中骨细胞多而致密，新生骨小梁融合成片，骨单位和骨桥开始形成，新生骨小梁趋向成熟；对照组骨基质中骨细胞少，分布不均，新生骨小梁面积较小，骨单位和骨桥少见，新生骨成熟度较低。
2.3新生骨定量分析 术后4、8、12 周实验组新生骨面积大于对照组, 两组比较差异有统计学意义( P< 0.05) , 见表1。
表 1 各时间段实验组与对照组新生骨所占面积百分比( %,±s,n=4 )
项目4周8周12周
BIO-OSS/PRF组44.68±0.8166.54±1.0885.29±1.37
BIO-OSS组32.61±0.3751.74±0.6373.01±1.85
3 讨论
因各种原因拔牙后，牙槽骨会逐渐吸收至原来的一半，导致种植手术进行困难。Younis等[1]认为即刻种植术有保持牙槽骨高度及宽度，最大限度避免牙槽骨吸收的作用。但如何解决即刻种植体周围的骨间隙，寻找促进骨整合的移植材料成为防止即刻种植失败的关键。
富血小板纤维蛋白(PRF)它是一种粘性的富含高浓度纤维蛋白原和各种生长因子的血小板凝胶，与富血小板血浆(PRP)之间最大的不同在于[2]：(1)简便性:仅需一次离心完成，更经济方便，操作简单快捷。(2)安全性:完全由自身静脉血离心制得,不用添加抗凝剂或凝血酶等物质,不会有外来物引起免疫反应和交叉感染的风险。(3)凝胶状的外形，操作时不会流失降解，作用更稳定。同时，PRF聚集了所采集血液中几乎全部的血小板和白细胞,因此，也具有PRP的优点，拥有多种促进骨组织生长的生长因子，对骨组织的再生及修复起着重要作用[3]。但是，有学者通过临床研究证实[4]：PRF机械性能有限，对种植体旁的骨间隙缺乏良好的支撑作用，作为植骨材料单独应用,并不能明显增加骨量、获得良好的成骨效果。因此，PRF对于即刻种植体周骨间隙修复有良好的骨诱导性，但缺乏骨传导性及抗压性。
本实验中作者选择BIO-OSS作为骨间隙的支架，因为BIO-OSS有以下特性[5]：BIO-OSS是去除抗原性和有机成分的无机牛骨，不会引起机体免疫反应及传播疾病，同时具有与人体牙槽骨相似的物理化学结构及抗压强度，对骨间隙有良好的支撑作用；并且，BIO-OSS有类似人体骨的骨小梁结构及羟基磷灰石的表面，为血管长入和细胞及PRF生物因子的附着起支架作用；同时BIO-OSS有良好的生物相容性，可以被机体吸收，不用二次手术取出。因此，BIO-OSS单独使用时有良好的骨传导性及抗力性，但因为它的无机特性，严重缺乏骨诱导性。
本实验中，术后4、8、12周BIO-OSS/PRF组新生骨面积高于BIO-OSS组，说明PRF具有以下特性：①诱导血管生长：即通过细胞因子的作用使血管内皮细胞向伤口迁移、分化,并稳定于PRF凝胶内，与BIO-OSS 的支架及支撑作用配合，生成新的血管。术后4周，BIO-OSS/PRF组比BIO-OSS组有更多的毛细血管生成，为新骨形成提供了更多营养供给。②促进创口愈合:有学者发现[6],PRF能够利用纤维蛋白自身的物理化学特性和趋化性能，调控上皮细胞和成纤维细胞的新陈代谢,引导上皮覆盖创口,促进创面的组织愈合。术后8周，BIO-OSS/PRF组除了新生骨面积及细胞成分都多于对照组，表明其成骨潜力及创口愈合能力更强。③促进新骨生成：纤维蛋白凝胶里的纤维蛋白，能对循环血液中的干细胞、血小板及细胞因子进行机械性地网罗,并使其协同发挥作用,加速组织细胞的迁移、增殖及分化,促进拔牙窝修复过程中的新骨生成。术后12周，BIO-OSS/PRF组新生骨连接成片，在量是明显大于BIO-OSS组，同时，BIO-OSS/PRF组有更多的成骨细胞分化成熟，成为骨细胞，有骨桥和骨单位出现，在新骨的成熟程度上优于BIO-OSS组。
因此，BIO-OSS与PRF联合应用，兼顾了良好的组织相容性、高度的骨传导性和骨诱导性、可缓慢降解性及抗力性等特点，成为良好的骨替代品，应用前景非常广阔。但本实验中样本量较少，观察时间有限，其长期效果及作用机制尚有待进一步研究。
参考文献
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论文作者:杨晶晶1,柴显达2
论文发表刊物:《医药前沿》2014年第2期供稿
论文发表时间:2014-4-4
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