贵州百灵企业集团制药股份有限公司 安顺 561000
【摘要】目的 建立前列泰胶囊中萹蓄的薄层鉴别方法。方法 以山奈素有效成分作为对照品，先采用萃取办法除杂，后用双相酸水解的方法提取前列泰胶囊中萹蓄的山奈素成分，对萹蓄药材进行薄层鉴别，并考察不同展开介质、不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对该药中萹蓄药材薄层色谱的影响。结果 以山奈素为对照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8：3：1）为展开系统，对萹蓄药材薄层鉴别特征明显，专属性强。结论 经过试验，该方法可行，重复性好，可作为前列泰胶囊中萹蓄药材的薄层鉴别方法。
【关键词】前列泰胶囊；萹蓄；山奈素；薄层鉴别
[中图分类号] R944.5[文献标识码] A[文章编号]1672-5018（2016）04-451-01
前列泰胶囊是由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、知母（盐炒）、黄柏（盐炒）、六味药材，经水提浓缩等工艺制备的胶囊固体制剂。具有清热利湿、活血散结的功效［1］，临床上对湿热挟淤的慢性前列腺炎症有较好的疗效。该品种全国有11家生产企业生产，但目前执行的质量标准可控性较低，还有待于完善。
目前，萹蓄作为该处方的臣药，萹蓄为蓼科植物萹蓄 Polygonum aviculare L.的干燥地上部分，收载于 2010年版中国药典（一部），具有补肾、清肝明目、利尿的功能[2]。山奈素、杨梅苷和萹蓄苷等黄酮类是其主要的有效活性成分[3]，在目前标准中，并未见到关于萹蓄的定性或定量的方法，因此，本实验将选取山奈素作为指标性成分，对前列泰胶囊的萹蓄通过薄层色谱鉴别方法进行研究，为保证标准的可控性更加有效可控。
1仪器、试剂和样品
KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DGG-9246A 电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司），十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），甲醇（分析纯 20130411，上海申博化工有限公司）。三氯甲烷（分析纯 20140528，上海申博化工有限公司），浓盐酸（分析纯 20130721，上海申博化工有限公司），山奈素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为111532-201402），前列泰胶囊（20140304、20140201、20140202，贵州百灵企业集团制药股份有限公司）。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
取本品内容物2g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水30ml溶解，静置，倾取上层液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液弃去，水液加浓盐酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷层，水浴浓缩至5ml，作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
取山奈素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 阴性对照品溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制缺少萹蓄药材的阴性样品，按“2.1”同法制备阴性对照品溶液，
2.4 显色剂
5%三氯化铝乙醇溶液。
2.5 展开剂
甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8：3：1）[4] 展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃下加热5分钟，于紫外灯下365nm检视。
2.6 薄层色谱条件的考察
2.6.1 薄层板的选择
分别吸取供试品溶液2μl和对照品溶液2μl，以薄层硅胶G板和聚酰胺薄膜2种不同类型材料薄层板，进行展开，取出，晾干，喷以显色剂，105 ℃加热5min，于紫外灯下365nm检视。见图1、2。
图3 供试品不同点样量的考察 图4 对照品不同点样量的考察
由图3、4可得，供试品2μl点样量效果最佳。当点样量大于2μl时，供试品山奈素位置斑点出现拖尾现象；对照品最佳点样量2~7μl皆可，故选择2μl。
结合上述2种因素实验结果，可确定薄层板为硅胶G板，供试品和对照品最佳点样量皆为2μl。经预实验验证，确定鉴别萹蓄的薄层鉴别的方法，并按照《中国药典》2010版一部附录ⅩⅧA中药质量标准分析方法验证指导原则进行方法学验证。
2.7 方法学验证
2.7.1 专属性考察
用三个批次的样品，照上述方法进行专属性实验，结果见图5。
经3不同厂家耐用性实验结果表明，前列泰胶囊中山奈素的薄层鉴别图斑点分离效果均表现好，斑点圆整，但不同厂家薄层板对山奈素斑点影响不大，重复性较好。
2.7.2.2 不同温度及湿度试验
不同温湿度设定参数，见表1。图谱见9、10、11。
通过上述不同温度及相对湿度的考察实验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。斑点清晰，分离效果好，Rf值适中，阴性对照无干扰。细小的变动，该鉴别方法仍有效。
2.8 结果
经过上述中药质量标准分析方法验证，确定该方法为：取本品2g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水30ml溶解，静置，倾取上层液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液弃去，水液加浓盐酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷层，水浴浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取山奈素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃下加热5分钟，于紫外灯下365nm检视。
2.9 讨论
本研究在选定供试品处理方法及展开系统之后，选取不同薄层板作为实验考查因素，对2种薄层板进行了考查，确定硅胶G板作为展开介质。在确认整个薄层方法后，首先进行了系统预试验，对供试品和对照品进行最佳点样量的考查，找出最佳点样量，最后，进行该薄层系统方法学验证试验，考察不同温度、不同湿度和不同厂家薄层板对此展开系统的影响，结果表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，重复性良好。
参考文献：
[1] 王聪庆，陈娟，师彦平等．高效液相色谱法测定前列泰片中山柰素的含量［J］.分析测试与仪器，2008，14（1）：50~53.
[2] 许福泉，管华诗，刘红兵等．萹蓄化学成分及其归经药性初探［J］.中国海洋大学学报，2010，40（3）：101~104.
[3] 吴呈祥，李萍，陈君等．中药萹蓄的质量标准研究［J］.药学与临床研究，2009，17（5）：365~369.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2010：314.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[ M ].北京：化学工业出版社，2010：附录ⅩⅧA.
[6] 陈 娟，师彦平.HPLC测定萹蓄中槲皮素和山柰素的含量[J].中国中药杂志，2009，34（04）：423~427.
[7] 赵东升，李新霞等.大蒜药材的薄层鉴别方法研究[J].西北药学杂志，2011，26（6）：391~394.
论文作者:李星,蒋坤,潘玉杰,孔德加,赵南,孙晓军
论文发表刊物:《中西医结合护理》2016年第2卷第4期
论文发表时间:2016/8/9
标签：薄层论文; 溶液论文; 甲烷论文; 胶囊论文; 前列论文; 方法论文; 水浴论文; 《中西医结合护理》2016年第2卷第4期论文;