南昌大学第一附属医院 江西 330006
【摘 要】新辅助化疗在局部晚期乳腺癌的治疗中有广泛的应用，但大量临床实践已证明行新辅助化疗患者存在化疗敏感性的差异，对于不敏感患者来说，行新辅助化疗可能会延误局部治疗的时机，随着分子生物学的不断深入研究，很多分子生物学指标已经或正在用于指导乳腺癌的临床治疗、预后和化疗疗效的预测。在临床治疗中通过应用新辅助治疗乳腺癌，并对患者的P53、VEGF表达意义进行探究，并对其相关性进行分析，从而在乳腺癌的临床诊断与治疗中采取合理的措施，控制与减少患者的肿瘤直径增加与肿瘤淋巴结转移，提升患者的生存率。方法：通过收集40例局部晚期乳腺癌患者新辅助化疗前后标本，采取新辅助化疗前后患者的瘤体大小、腋窝淋巴结状况、肿瘤组织分级、P53、VEGF的表达等进行检测，通过应用免疫组化SP法来对P53、VEGF的表达进行检测，从而对乳腺癌患者在临床治疗采用新辅助化疗前后的P53、VEGF表达情况及相关性分析。结果：40例局部晚期乳腺癌患者经过新辅助化疗，其临床治疗的总有效率为82.5%，其中有33例患者临床症状得到部分缓解，有3例患者临床症状疾病稳定，尚未出现明显的变化，4例患者疾病进展，出现病情恶化，治疗效果不佳，患者的VEGF表达与淋巴结转移、肿瘤组织分级、及临床分期呈正相关，P53的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤组织分级呈正相关。结论：VEGF在乳腺癌组织中呈现过表达，与淋巴结转移、肿瘤组织分级、临床分期等因素之间呈现出正相关的关系，P53在乳腺癌组织中表达上调，并与患者体内的肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤组织分级等因素呈现正相关关系，说明P53对影响乳腺癌早期诊断及判断预后有重要作用，在临床诊断与判断预后时，可以加强对患者的肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤组织分级等指标的检测与监控，P53与VEGF之间存在某种关联，对P53高表达的患者行对抗VEGF疗法，化疗药物通过降低诱导肿瘤增殖因子突变型P53，启动细胞凋亡，抑制血管形成，从而发挥抗肿瘤效应。
【关键词】乳腺癌；新辅助化疗；免疫组化；生物学因子
乳腺癌是城市女性最常见癌症，是农村女性第四大常见癌症，一项中国多中心全国范围的研究显示，诊断乳腺癌时，15.7%的病人处在I期，44.9%处在II期，18.7%处在III期，2.4%处在IV期，相比于社会经济地位较低的女性呈现更多的是III期和IV期[]，而分期相对较晚的病人大多需要新辅助化疗，合理的进行新辅助化疗疗效评价可以及时调整治疗方案，有研究认为PCR是评价新辅助化疗的最佳指标，但不同临床试验对PCR定义不同[]。本研究在此基础上提出P53及VEGF在乳腺癌新辅助化疗前后的表达变化是否可预测新辅助化疗的疗效，同时探讨两者之间的相关性。
1.研究对象
1.1临床资料
收集南昌大学第一附属医院自2012年1月到2014年12月局部晚期乳腺癌化疗前空心针穿刺标本及化疗后根治术标本40例（浸润性癌），均为女性，年龄30-63岁，中位年龄46岁。在实施新辅助化疗后，施行保乳术或改良根治术或根治术，在获取标本后就要及时将其在中性福尔马林中固定48h，并用石蜡包埋，然后对其中的VEGF和P53标本进行检测。
1.2检测步骤
标本经4%甲醛溶液（PBS）固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm连续切片，采用免疫组织化学技术（S-P法），按试剂盒说明书的指导步骤进行，采用PBS液代替一抗作阴性对照，阳性对照采用已知阳性片。试剂：鼠抗人P53、VEGF蛋白免疫组化单克隆抗体、即用型免疫组化EliVision Plus试剂盒（鼠/兔）、DAB 显色试剂盒均为福州迈新生物技术开发有限公司产品。结果判读：阳性细胞数<5%为“-”，≥5%为“+”，P53以肿瘤细胞核呈棕黄色颗粒为阳性，VEGF以肿瘤细胞浆呈棕黄色颗粒为阳性（见附录图片）。
2.统计学处理
所有数据统计分析应用SPSS17.0版软件包，计量资料采用t检验，构成比及组间比较采用f检验，相关性采用Spearman相关性检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
3.结果
3.1新辅助化疗的临床疗效分析
33例患者的肿瘤直径出现不同程度的改善与缓解，总体有效率为82.5%，7（17.5%）例患者的肿瘤最大径未得到改善，且出现不同程度的恶化，13例患者的淋巴结直径为0%；有8（20%）例患者在实施新辅助化疗4-6周期后，患者的淋巴结转移数量为0，未见癌转移，6（15%）例患者在实施新辅助化疗后，临床检查显示腋窝淋巴结直径为0，而术后病理出现不同程度的癌转移，具体如表1。
4.讨论
P53是一种肿瘤抑制基因（tumor suppressor gene），人类 P53基因定位于17P13.1，在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变，国内有文献报道，乳腺癌P53蛋白阳性表达率为42%[3]，国外文献报道为30%，其中Luminal型26%，基底样型88%[4]，有研究显示 p53 是独立的疗效判断因子，p53阳性化疗有效率低，p53表达阴性化疗有效率高，伴有较高的临床完全缓解率[5][6]，但P53在乳腺癌新辅助化疗前后的表达变化无统计学差异[7]。
VEGF（vascular endothelial growth factor）血管内皮生长因子[8]，是重要的血管生成正性调节因子，肿瘤的生长依赖新生血管的形成，是肿瘤增殖与发生转移的主要因素[9]。有研究表明，乳腺癌中VEGF表达明显高于正常乳腺组织[10]，为乳腺癌侵袭性标志物，高表达患者易发生肿瘤细胞转移和复发，对乳腺癌的治疗和预后有重要意义[11]，同时有研究显示，新辅助化疗通过抑制乳腺癌组织中的VEGF表达，从而抑制乳腺癌细胞的浸润和转移[12]。众所周知，野生型P53是典型的抑癌基因，而突变型P53则扮演了癌基因的角色[13]。早在2001年，Pal S等[14]在《Cancer Research》杂志上证实野生型P53通过转录因子SP1和E2F间接下调VEGF的表达。随后许多报道都证实了野生型P53在多种肿瘤细胞中对VEGF的抑制作用。我们不由设想，突变型P53是否对VEGF具有上调作用呢？以往长期的研究并没有得出阳性结果[15]。然而，最新研究有了突破性进展，2015年6月Pfister NT等[16]在《Gene Development》上发表权威观点，乳腺癌细胞的突变型P53可通过与SWI/SNF复合物结合，从而上调VEGFR2的转录水平，这一结果部分解释了为何突变型P53高表达的乳腺癌患者对抗VEGF疗法敏感。基于以上观点，在本次试验中研究中发现，P53表达阳性的肿瘤更具侵袭性，并与乳腺癌淋巴结转移显著性正相关，但突变型P53与VEGF的表达关系及潜在的调节机制仍需要进一步研究。在乳腺癌患者的肿瘤细胞中VEGF可能是导致其内部的抑制凋亡基因的重要因素，VEGF在促进乳腺癌血管生成的过程中，该抑制凋亡基因也有一定的参与，且通过相关的研究表明，在促进肿瘤血管生成过程中其内皮细胞的凋亡是可以进行改变的，这就说明在肿瘤血管形成的过程中，VEGF发挥其内皮细胞抗凋亡作用，还需要借助抑制凋亡基因的上调，才能维持与保护VEGF的促内皮细胞功能，从而使得患者体内的肿瘤血管形成并发生浸润转移。在本次的研究中发现，p53蛋白阳性与患者乳腺癌组织中的凋亡抑制因素的表达要远远高于p53蛋白阴性乳腺癌组织。因此，在临床中也可以推断，P53 出现癌变的一个重要机制就是与患者体内的抑制因素作用，其突变对患者的体内的乳腺癌细胞通过协同作用，从而能够对如乳腺癌的发生与发展产生重要的作用，对临床诊断与预后判断有重要的作用。
5.前景和展望
总之，在乳腺癌的临床治疗中采取新辅助化疗，其VEGF与P53 与其病情的发展、诊断与预后判断有着密切的关系。P53、VEGF在新辅助化疗中可能有疗效预测价值，大部分文献支持化疗后P53、VEGF有不同程度表达变化，P53与VEGF之间是否存在某种关联，对P53高表达的患者是否可行对抗VEGF疗法，是否化疗药物通过降低诱导肿瘤增殖因子突变型P53、VEGF表达从而发挥抗肿瘤效应还有待于进一步证实。探索P53与VEGF在新辅助化疗环境下变化规律，这对指导乳腺癌综合治疗有一定的价值。目前靶向治疗早已开始用于肿瘤临床治疗，P53与VEGF是否可为新的药物作用靶点，临床治疗前景充满希望。
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附录图片
通讯作者：
武彪，南昌大学第一附属医院主任医师，出生于1963年8月，籍贯江西南昌，本科学历，通讯地址：江西省南昌市永外正街17号南昌大学第一附属医院普外四科。
论文作者:吴冬娣,武,彪
论文发表刊物:《航空军医》2016年第6期
论文发表时间:2016/6/17
标签：乳腺癌论文; 肿瘤论文; 患者论文; 淋巴结论文; 阳性论文; 组织论文; 突变论文; 《航空军医》2016年第6期论文;