刘旭光[1]2004年在《苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究及应用》文中指出苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)产生的δ-内毒素(或杀虫晶体蛋白)对多个目的害虫具有杀虫活性，其独特的优点在农林害虫的生物防治中得到了广泛的应用。鉴定编码杀虫晶体蛋白的基因(cry基因)，对于发现、分离、克隆特异活性的新基因以及转基因植物和微生物等研究都具有重要意义。 传统的Bt δ-内毒素基因鉴定方法主要是建立在PCR基础之上的，由于自身具有局限性，此类方法已不能适应高通量、大规模、迅速、平行等基因组研究方面的要求，因而目前迫切需要应用一种新的检测方法以适应基因组研究的要求。 基因芯片技术是近年来发展起来的基因组研究技术。现已表明它是在基因组规模上研究基因表达和调控的一种强有力的研究工具，同时也是原核和真核生物功能基因检测与多态性研究的极好方法。虽然人们对基因芯片技术进行了深入的研究，但是目前尚无应用寡核苷酸探针在不进行定向扩增条件下直接检测总DNA中功能基因的相关报导。 本研究中，建立了应用寡核苷酸芯片检测Bt总DNA中cry基因的方法；在应用此方法与生物信息学的基础上，构建并应用了cry1、cry2、cry9基因检测芯片。其主要研究结果如下： 1 Bt cry基因检测芯片关键技术研究 通过对基因芯片中探针长度、浓度、总DNA的含量与处理、标记方法、灵敏度和杂交条件的研究表明，用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40-50mer、40μmol·L~(-1))杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因，从而建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。 研究表明，不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显着性差异(P＜0.01)，而不同浓度的探针之间没有显着性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3小时；检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg；标记产物杂交用量(0.625 to 20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在着明显的线性关系(r~2=0.985 to 0.989)。 2 生物信息学在cry基因芯片检测中的应用 针对在线BLAST的不足，建立了Bt cry基因核苷酸序列本地数据库，并在此基础上进行寡核苷酸探针的本地BLAST以确保其特异性。通过与在线BLAST比较，本地BLAST在准确性、冗余信息的去除以及使用简便性等方面要优于在线BLAST。 根据Bt δ-内毒素基因核苷酸序列的同源性关系，充分应用生物信息学方法设计了用于cry1、cry2、cry9基因检测的寡核苷酸分级探针。 3 cry1、cry2和cry9基因检测芯片的制备与应用 制备了cry1、cry2和cry9基因检测芯片并分析了8个苏云金芽孢杆菌菌株的基因型。结果表明，寡核苷酸芯片检测结果与已知菌株的基因型吻合，与未知基因型的菌株的PCR-RFLP初步鉴定结果也有很高的一致性。
刘旭光, 宋福平, 文思远, 王升启, 黄大昉[2]2004年在《苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究》文中研究表明建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50mer、40μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显着性差异(P<0.01),而不同浓度的探针之间没有显着性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg;标记产物杂交用量(0.625～20μg)的对数值与信号值的对数值之间存在明显的线性关系(r2=0.985～0.989)。
李云艳[3]2008年在《雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源研究和杀虫基因的克隆》文中进行了进一步梳理本研究从四川雅安周公山原始森林土壤中采集土壤350份,应用醋酸钠-抗生素法筛选出132株苏云金芽胞杆菌菌株,出菌率为11%。初步研究发现这些苏云金芽胞杆菌的伴孢晶体类型有菱形、方形、球形、无定形等,充分体现了我国菌株资源的多样性。因此我们对雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源进行了初步的研究和部分杀虫基因的克隆,主要结果如下:1、通过对采集的350份土壤的海拔、资源、气候等地理特征分析,总结出了Bt资源的分布规律:在海拔1742米下,不同海拔高度的Bt出菌率经差异显着性分析后显示其无明显差异;腐质土比黏土高、黏土又高于沙土;植被覆盖率高的地区,生态条件优越,Bt分离率高;土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多;山脉阳坡出菌率比阴坡高。2、对这132株Bt野生菌的伴孢晶体蛋白进行了SDS-PAGE分析。结果显示杀鳞翅目、鞘翅目和双翅目的杀虫蛋白带最丰富,显示了周公山Bt菌的杀虫蛋白具有一定的特异性。3、对132株Bt野生菌的cry基因进行了PCR-RFLP分析鉴定,发现含cry1型基因菌株有74株,cry2型为34株,cry7型16株,cry9型16株,cry3型13株,cry4型8株,cry30型7株,cry8型2株,cry40型2株,另外有46株菌含未知基因,占34.8%。结果显示cry1基因含量最丰富,cry2基因其次,cry9和cry3基因第叁。4、克隆了cry9Ea4基因(Accession number:EU760456)。该基因的核苷酸序列为3468bp,与已报道的cry9Ea序列同源性高达99%。经国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry9Ea4。5、对132株Bt野生菌vip3基因进行了PCR分析鉴定,发现有25株菌含Vip3A基因,出菌率为19%;另外有4株菌含新Vip3基因。6、克隆了vip3A基因的部分序列。7、对菌株ZG5-4、HY3-2进行了菌种鉴定:ZG5-4定名为苏云金芽胞杆菌腊螟变种(Bacillus thingiensis var galleriae);HY3-2菌株定名为苏云金芽胞杆菌杀虫变种(Bacillus thringiensis var entomocidus)。8、对菌株ZG5-4和菌株HY3-2进行了抗虫生物活性测定。结果表明菌株ZG5-4对鳞翅目的甜菜夜蛾、棉玲虫初孵幼虫有毒力,LC_(50)分别为23.42 ng/mL和13.24ng/mL,而菌株HY3-2对甜菜夜蛾、棉玲虫初孵幼虫的LC_(50)分别为21.17ng/mL和14.07ng/mL。
张文飞[4]2007年在《海南热带原始雨林区苏云金芽孢杆菌收鉴及cry基因的鉴定》文中研究指明本课题系统收集了海南岛热带原始雨林区土壤样品1643份，建立了一个拥有3152份芽孢杆菌的菌株库，分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株176株，菌株的分离率和出菌率为5.58％和10.71％。其中五指山热带原始雨林区出菌率最高，霸王岭最低，分别为14.54％和4.47％。原因是五指山山系大，是我国原生态保持得最好，没有人为破坏的热带原始雨林区，植被覆盖率高，土壤地表腐殖质层厚，而且昆虫种类和数量多。霸王岭热带原始雨林区出菌率和分离率较低，与霸王岭山体坡度陡峭，土壤被雨水冲刷，土壤沙化严重，腐殖质含量低密切相关。分析不同海拔苏云金芽孢杆菌分布律，发现Bt菌分布与海拔表现一定规律，一般海拔800-1400米Bt菌含量高。海拔小于800米的地区一般农林生产活动频繁，破坏植被和土壤结构，影响土壤微生态环境；一般随着海拔升高土壤植被覆盖率相应的降低，尤其土壤腐殖质含量明显降低，土壤沙化严重，结构松散，不利于Bt菌株生长繁殖。对部分菌株进行了16S rDNA序列分析鉴定和生长特性观察，通过显微镜观察到分离的苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体类型有菱形、方形、圆形、椭圆形等，其中圆形晶体比例较高。为了鉴定分离菌株含有的杀虫晶体蛋白基因的类型，设计了47对基因鉴定的通用引物，利用PCR-RFLP方法鉴定分离的Bt菌株包含的杀虫晶体蛋白基因型，结果初步表明137株Bt菌含有cry1基因，38株含有cry2基因，分别表达130kDa和60kDa晶体蛋白，晶体为菱形；6株含有cry3基因，表达70kDa晶体蛋白，晶体呈方形；21株含有cry8基因，表达130kDa晶体蛋白，圆形晶体；8株含有cry4和cry11基因，表达130kDa或80kDa晶体蛋白，晶体也为菱形。对高产晶体蛋白菌株4b-1的cry1Ac基因进行了部分克隆，表明该菌株含有cry1Ac基因，可能对鳞翅目昆虫有高毒力。
谷有芳[5]2014年在《西藏土壤苏云金芽孢杆菌菌株分离及基因型鉴定研究》文中进行了进一步梳理苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是目前是世界上研究最深入、并得到广泛利用的菌种。Bt基因不断的用于转基因农作物,持续的长时间田间应用导致田间产生抗性。因此,筛选出高效的苏云金芽胞杆菌,不仅明确微生物杀虫剂菌种资源,也为构建高效广谱工程微生物奠定了基础,培育转基因抗虫植物提供重要理论及应用价值。本研究对具有特殊地理环境的西藏不同生态区的Bt资源进行了系统的调查研究,利用热处理法从54份土样中筛选出74株苏云金芽孢杆菌,并利用PCR技术鉴定各基因型,通过室内生测筛选出对鳞翅害虫具有高毒力的菌株,并明确最高Bt菌株B.XZ18-1的最佳发酵条件及最优发酵培养基组分。1.使用温度筛选法从53份土样中分离出74株野生型Bt菌株,并对菌株进行初步鉴定(形态学鉴定、生理生化鉴定),比对《伯杰氏细菌鉴定手册》,结果显示：鉴定出59株菌的亚种类型励木亚种5株,雄本亚种6株,武汉亚种5株,东北亚种15株,云南亚种5株,莫里逊亚种7株,达姆斯塔亚种2株,亚毒亚种2株,山东亚种2株,以色列亚种5株、杀虫亚种3株、库斯塔克亚种1株、阿莱亚种1。其中24株含有Cry1型基因,占所分离菌株的32.43%；12株含有Cry2型基因,占所分离菌株的16.22%；4株含有Cry3型基因,占所分离菌株的5.4%；5株含有Cry4/10型基因,占所分离菌株的6.76%；11株含有Cry5型基因,占所分离菌株的14.86%;11株含有Cry6型基因,占所分离菌株的14.86%；15株含有Cry9型基因,占所分离菌株的20.27%；1株含有Cryl3/14型基因,占所分离菌株的1.35%；2株含有Cry11型基因,占所分离菌株的2.7%；23株含有Cry18型基因,占所分离菌株的31.08%；4株含有Cry30型基因,占所分离菌株的5.4%；2株含有Cry39/40型基因,占所分离菌株的2.7%。2.分离出74株苏云金芽孢杆菌,利用抗性和敏感小菜蛾幼虫室内生测表明：对室内饲养的敏感小菜蛾毒力测定结果表明,各个菌株对敏感小菜蛾的毒力均有毒力,其中B.XZ18-1对敏感小菜蛾幼虫的毒力最高,LC50为8.4mg/L；B.XZ9-2、B.XZ1-1、B.XZ4-6、B.XZ2-4、B.XZ5-2次之,LC50为64.1～114.5 mg/L;B.XZ6-4最差,LC50为143.8mg/L。对敏感小菜蛾的毒力大小依次为：B.XZ18-1>B.XZ9-2 >B.XZ1-1>B.XZ4-6>B.XZ2-4>B.XZ5-2>B.XZ6-4。SDS-PAGE蛋白分析发现这些菌株主要表达130kDa左右大小蛋白；对高毒力菌株进行16S rDNA鉴定,利用Mega5.1软件构建系统发育树可以得到结论,菌株B.XZ1-1, B.XZ4-6,B.XZ5-2, B.XZ9-2,与Bacillus thuringiensis ATCC 10792(T)相似度为分别为95%、87%、80%、79%,菌株B.XZ2-4与Bacillus toyonensis BCT-7112(T)目似度为87%,B.XZ6-4与Bacillus safensis FO-036b(T)相似度为97%,B.XZ18-1与Bacillus thuringiensis HD-771相似度为100%。3.分离的对敏感小菜蛾具有毒杀活性的菌株中,B.XZ18-1尤为突出。对B.XZ18-1进行一系列摇瓶发酵发现,在最佳摇瓶培养条件(种子液种龄10h,发酵温度30℃,接种量2%,摇床转速200r/min,初始pH值6.5～7.5,摇床转速200r/min)下发酵48 h,活菌数和活芽孢数分别可达到2.71×109CFU/mL和8.75×108CFU/mL,晶体蛋白含量为18.5mg/mL。设计正交试验7因素3水平,以确定菌株B.XZ18-1的发酵培养基最优组分：葡萄糖0.3%、玉米粉1.5%、豆饼粉1.5%、鱼粉1.0%、酵母粉1.5%、K2HPO40.3%、CaCl22.0%。
苏旭东, 张杰, 檀建新, 宋福平[6]2006年在《苏云金芽孢杆菌及其δ-内毒素基因的分类与鉴定》文中研究指明苏云金芽孢杆菌作为重要的杀虫微生物在生物防治中发挥了巨大作用。其分类鉴定对于研究资源的多样性、快速筛选优良菌株、预测其杀虫活性、分离克隆新的Btδ-内毒素基因等方面具有重要意义。本文对Bt菌株的分类、δ-内毒素基因分类、鉴定方法进行了分析讨论。
吴会贤[7]2007年在《苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定》文中研究表明本研究从河北各地区，东北地区，四川九寨沟，云南的昆明和丽江的林地和农田采集土壤187份，分离出Bt野生菌株76株，伴孢晶体类型有菱形、方形、球型，充分体现了我国菌株资源的多样性。筛出Bt菌株的土样共有14份，筛出率为7.5％。利用18对鉴定cry基因型的通用引物对以上76株菌和本室保存的57株菌进行了PCR和PCR-RFLP鉴定：含有cry1型基因的菌株有76株，含有cry2基因型的菌株有13株，含有cry7基因型的菌株有2株，含有cry8基因型的菌株有30株，含有cry9基因型的菌株有6株，含有cry1Ⅰ基因型的菌株有20株，含有cry30基因型的菌株有1株，含有cry32基因型的菌株有1株，含有cry40基因型的菌株有1株。有21株未鉴定出基因型。133株野生菌株的伴孢晶体SDS-PAGE分析结果表明：13株同时含有cry1型基因和cry2型基因的菌株表达130kDa和60kDa的蛋白，其伴孢晶体为菱形和方形；38株只含有cry1Ac基因型的菌株，都表达了130kDa的蛋白，其伴孢晶体为菱形，细小菱形，方菱形，菱形和方形。30株含有cry8基因型的菌株，表达了130kDa的蛋白，伴孢晶体为球型。菌株PCR产物测序结果的同源分析表明：新菌株CY1的基因与模式基因(GenBank：U04367)的同源性为99.09％，可以推测出菌株CY1可能是一株含有cry7Ab基因的新菌株，对鞘翅目害虫有杀虫活性。根据模式菌株BTS137J的基因序列(GenBank：M64478)使用Premier Primier5软件设计了Cry7-2F／Cry7-2S，Cry7-12F／Cry7-13S，Cry7-3F／Cry7-3S叁对引物用于扩增菌株CY1的全长序列。得到了1569bp，2132bp，1306bp的产物。含有cry8基因的30株菌株经过酶切分析基因型都为cry8Ea。可以预测这些菌株可能对鞘翅目害虫有活性。WFS-97和WFS-12分别含有cry30和cry40的基因，两菌株应该对双翅目害虫具有杀虫活性。这些基因与已知基因的同源性均低于95％，所以根据新的命名法，这几个基因可能为在第二分类等级上有差异的新基因。部分菌株对棉铃虫和小菜蛾做了生物活性测定，对于已得到鉴定结果的菌株，其杀虫活性与预测的杀虫活性相一致。
苏旭东[8]2005年在《苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定》文中研究表明本研究从海南、云南的热带和亚热带原始森林及周边地区采集土壤683份,分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株92株,伴孢晶体类型有菱形、方形、球形、椭球形、无定形等,充分体现了我国菌株资源的多样性。在41份出土Bt的土壤中,32份(78%)采自原始森林,14.6%土壤取自森林草地,7.4%属于大田土壤。通过对土壤资源、气候、海拔等地理特征分析,总结出了Bt资源的分布规律:热带、亚热带Bt分离率高,温带其次,寒带分布数量有限;植被覆盖率高的地区,生态条件优越,Bt分离率高;昆虫种类和数量丰富的地区,Bt的种类和数量丰富;高山地区(海拔高于3000米,尤为高山草甸),Bt含量极少。土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多;Bt在山坡阳面比阴面分布广。同时用26对可鉴定31种cry基因型引物对以上92株菌和我国东北地区的34株菌进行了PCR-RFLP分析鉴定:含有cry1型基因的菌株58株,含有cry2型基因的菌株32株,含有cry8型基因的菌株12株,含有cry9型基因的菌株3株,含有cry11型基因的菌株12株,含有cry30型基因的菌株14株,含有cry40型基因的菌株1株。有42株菌未鉴定出基因型。126株野生菌株的伴孢晶体SDS-PAGE分析结表明:32株同时含有cry1型基因和cry2型基因的菌株表达130 kDa和60 kDa的蛋白,其伴孢晶体为菱形;在36株表达130 kDa蛋白的菌株中,24株仅含有cry1型基因,伴孢晶体为菱形;12株含有cry8Ea基因,伴孢晶体为球形。 菌株Y41同时含有一个新型cry30基因和一个新型cry40基因,这种基因组合在国内外系首次发现。两个基因的部分序列分别被克隆、测序(cry30型基因得到1422 bp长度的序列,cry40型基因得到1382 bp长度的序列)。其中,cry30型基因与模式基因cry30Aa和cry30Ba的同源性分别为72%和73%,cry40型基因与模式基因cry40Aa和cry40Bb分别保持93%和36%的同源性。在菌株Z2-34中一个新cry30基因被同时发现,得到的1419 bp的序列与模式基因cry30Aa和cry30Ba的同源性分别为89%和76%。而菌株Y41和菌株Z2-34中的两个新cry30基因的同源性为73%。以上叁个基因的部分序列已在GenBank登记注册(Accession numbers分别为AY817147、AY817148、AY916046)。 生物活性测定结果表明菌株Y41和菌株Z2-34对伊蚊有毒效,LC_(50)分别是10.8433μg·mL~(-1)和7.2317μg·mL~(-1)。菌株Z34-28含有一个cry11Bb基因和cry30Aa基因,对伊蚊的LC_(50)是27.3787μg·mL~(-1)。42株没有鉴定出基因型的菌株对小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、二化螟、粘虫、拟谷盗、黄粉虫均无毒力。
林琳[9]2009年在《苏云金芽孢杆菌的分离和鉴定研究》文中研究表明农业虫害在全球范围内对农作物造成的损害,是农作物减产的最主要因素之一。由于苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)对大多数农业害虫都具有特异的杀虫活性,并且,对人畜安全,不污染环境。目前,己成为世界上产量最多、应用最广泛的微生物杀虫剂。Bt的主要杀虫活性与其携带的编码ICPs(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)的cry基因密切相关,因此,cry基因工程研究便成为近几年研究的热点。到目前为止,国际上已经克隆了476种杀虫蛋白基因,但是随着Bt应用的不断扩大,Bt ICPs基因均在不同程度上引发了昆虫的抗性,寻找新的菌株和基因是解决昆虫抗性问题的有效途径之一。本研究从全国19个省份采集了276份土样,利用温度筛选法并结合复红染色鉴定苏云金杆菌,共分离获得苏云金芽孢杆菌144株。对所分离的菌株进行了生理生化鉴定,有91株菌已经确定其亚种。再利用10对引物对所分离菌株进行cry/cyt基因的鉴定,有66株菌含有cry/cyt基因。在此基础上利用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,将17个cry7/cry8基因分为四类,将13个cry11基因分为两类。本研究还对cry基因的分布规律和多样性,以及基因型和杀虫活性之间的关系进行了综合分析,这对于新基因型的发现、杀虫活性的预测,以及Bt资源的开发和利用均具有重要的意义。
徐馨竹[10]2017年在《黑龙江省苏云金杆菌的分离及新型cry基因的克隆与表达》文中研究说明夜蛾科(Noctuidae)害虫种类多且危害广,发生周期长,给农业生产带来极大损失。目前夜蛾科害虫的治理仍以化学防治为主,化学农药长期大量施用造成的“3R”问题,使生态环境日趋恶化,也使得有害生物的绿色防控成为众望所归。苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)以其杀虫专一性强、环境友好等特点,在害虫生物防治中得到大量应用,但随着Bt大面积的推广应用,田间抗性种群也不断产生,因此,不断挖掘新的Bt菌株,筛选出高效、广谱的cry基因尤为重要。本研究利用醋酸钠选择筛选法从黑龙江省不同类型的土壤中分离出苏云金杆菌,并对其基因型进行了鉴定,以棉铃虫(Helicoverpa armigera Hubner)、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae Linnaeus)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)为靶标,检测了菌株对夜蛾科害虫的生物活性,并对高毒力菌株的新基因进行了克隆与表达,获得以下实验结果:从黑龙江省不同地区采集的352土样中分离出Bt菌株46株,出菌率为13.6%,其中哈尔滨等地区的黑土与伊春等地区的暗棕壤分离出来的Bt菌株最多,出菌率分别占18.81%和18.83%;其次是加格达奇等地区针叶林土和齐齐哈尔等地区的草甸土,出菌率分别占7.89%与9.52%,佳木斯市风沙土的出菌率为2.38%,大庆等地区的盐碱地并没有分离出Bt菌株。通过光学显微镜镜检观察,分离株的伴孢晶体形态不一,主要以长菱形、钝菱形等不同类型的菱形为主,还存在不规则形、球形、镶嵌形等一些晶体类型,部分分离株还可观察到几种形态晶体共存的现象。采用PCR-RFLP鉴定体系,利用10对通用引物筛选出cry1、cry2、cry8以及cry9四种基因型。其中,检测出cry1类基因的菌株共34株,检出率最高,占73.91%,其次是存在cry2类基因的菌株共计18株,4株检测出cry8类基因,6株存在cry9类基因。有16株菌株仅有单一的cry1或cry2基因,其他呈现基因组合形式,如cry1+cry2型、cry1+cry2+cry9型等多种类型。有9株分离株并未检测出基因型,占总数的19.57%,却有蛋白表达,分析原因可能是鉴定引物数量较少而未检测出杀虫基因型亦或是有未知杀虫基因存在。通过SDS-PAGE方法,分析了Bt分离株的Cry蛋白表达的杀虫晶体量,发现分子量在130 kDa、90 kDa、70 kDa以及60 kDa的蛋白量最为丰富。13株仅有cry1型基因的菌株蛋白表达量约为130 kDa;3株仅有cry2型基因的菌株蛋白表达量约为60 kDa-70 kDa;兼有cry1型、cry2型基因的菌株其伴孢晶体为菱形,表达ICPs分子量大小为130 kDa和60 k Da;存在多种基因型的菌株蛋白表达大小多样,多为130 k Da和60 kDa;未鉴定出cry基因型的菌株却检测出了表达的蛋白,而且蛋白的表达量大小不一。本研究克隆获得了cry1Ab36与cry2Ab35两个新基因(登录号分别为KY440260和KY501107),均来自对夜蛾科害虫有较高杀虫活性的菌株HT2。对cry1Ab36与cry2Ab35基因进行了克隆与分析,结果表明:cry1Ab36基因开放阅读框共3546 bp,编码1181个氨基酸,分子量133.52 k Da,等电点为4.98;cry2Ab35读码框为1902 bp,编码633个氨基酸,分子量70.72 k Da,等电点为8.73,都具有叁个典型的结构域,不含有信号肽。经由SDS-PAGE分析、Western blot验证均证:cry2Ab35基因在大肠杆菌内成功表达了70 kDa左右蛋白,其上清液和沉淀均有蛋白的表达,说明该蛋白有部分溶解现象。
参考文献：
[1]. 苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究及应用[D]. 刘旭光. 中国农业科学院. 2004
[2]. 苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究[J]. 刘旭光, 宋福平, 文思远, 王升启, 黄大昉. 中国农业科学. 2004
[3]. 雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源研究和杀虫基因的克隆[D]. 李云艳. 四川农业大学. 2008
[4]. 海南热带原始雨林区苏云金芽孢杆菌收鉴及cry基因的鉴定[D]. 张文飞. 广西大学. 2007
[5]. 西藏土壤苏云金芽孢杆菌菌株分离及基因型鉴定研究[D]. 谷有芳. 黑龙江大学. 2014
[6]. 苏云金芽孢杆菌及其δ-内毒素基因的分类与鉴定[J]. 苏旭东, 张杰, 檀建新, 宋福平. 植物保护. 2006
[7]. 苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定[D]. 吴会贤. 河北农业大学. 2007
[8]. 苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定[D]. 苏旭东. 河北农业大学. 2005
[9]. 苏云金芽孢杆菌的分离和鉴定研究[D]. 林琳. 黑龙江大学. 2009
[10]. 黑龙江省苏云金杆菌的分离及新型cry基因的克隆与表达[D]. 徐馨竹. 东北农业大学. 2017