（成都中医药大学附属医院 四川成都 610072）
【摘要】目的：通过微卫星位点的分析，了解散发性结直肠癌中的微卫星不稳定性的阳性率，并探讨其与临床病理特点的关系。方法：收集131例结直肠癌的血液和肿瘤标本，分离DNA，荧光标记引物后通过PCR扩增，并在DNA测序仪上进行毛细管电泳，Genescan软件收集扩增片段进行分析。结果：131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与患者的年龄，肿瘤的大小相关（P<0.05），而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异(P>0.05)。结论：根据MSI对散发性大肠癌进行分类有重要的理论和实际意义。
【关键词】散发性结直肠癌；微卫星不稳定；病理特点
【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）22-0025-02
Microsatellite instability of sporadic colorectal cancer and its clinicopathological significance
The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072,Sichuan,China
【Abstract】Objective To investigate the incidence of microsatellite instability(MSI) in sporadic colorectal cancer and the association with clinicopathological character. Methods The blood and tumor samples of 131 cases of colorectal cancer were collected. Genomic DNA was extracted from tumor tissues and matched blood. Microsatellite analysis was performed using fluorescent PCR followed by fragment analysis on automatic DNA sequencer with Genescan software.Results 27 out of 131 samples was MSI-H and significantly associated with patient age and tumor size(P<0.05),but not tumor site, stage nor differentiation(P>0.05). Conclusion The classification of sporadic CRC according to MSI may be of importance both theoretically and practically.
【Key words】 Sporadic colorectal cancer; Microsatellite instability; Clinicopathological feature
大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展是一个多基因多步骤的复杂过程，其中涉及到癌基因的激活和抑癌基因的失活。基因遗传不稳定性如微卫星不稳定（microsatellite instability，MSI）可能是产生突变，导致肿瘤发生、发展的重要分子事件。本研究就最近收治的散发性大肠癌的MSI水平进行检测，并探讨其临床病理生物学特征。
1.资料与方法
1.1 病例收集
收集成都中能够医药大学附属医院病理科2015年-2016年诊断的散发性结直肠癌131例，术前均未经过化疗，其中男性68例，女性63例，年龄27～92岁。病变部位分为近端结肠39例，远端结肠21例，直肠71例。肿瘤术后病理类型：HE染色，3例缺失，有11例为黏液腺癌，2例低分化腺癌，其余115例为管状腺癌。高分化5例，中分化114例，低分化11例。
1.2 DNA的提取
采用TIANGEN的血液/细胞组织基因组DNA提取试剂盒（目录号DP304-03），严格安装说明书提取血液和肿瘤组织DNA。提取后在Nanodrop 2000微量紫外分光光度计上进行浓度及波峰测试，并进行DNA电泳。
1.3 微卫星位点的分析
1.3.1聚合酶链反应（PCR）：BAT-25，BAT-26引物序列见表1，由上海生工生物有限公司合成。各引物上游标记荧光染料FAM。PCR反应体系：模板DNA2μl，10×BUFFER2μl，上游引物（10μmol/L)1，下游引物（10μmol/L）1，dNTP（1.25mmol/L）2μl，TaqDNA Polymerase0.2μl，加去离子水补足至20μl PCR循环体系。95预变性2分钟，95变性30秒，55退火30秒，72延伸30秒，40个循环，然后72延伸7分钟，12结束。
1.3.2 PCR扩增产物检测及结果判断 在ABIPRISM3730DNA测序仪上面，按仪器说明将扩增产物进行毛细管凝胶电泳，由genescan软件进行数据收集和处理。如果肿瘤PCR产物与正常血液PCR产物比较，出现扩增片段碱基延长或者缩短，或者电泳图形状的改变，判定为MSI。如果2个或者以上位点改变则为高度MSI（high frequency MSI，MSI-H），只有1个位点有长度变化者为低度MSI(low frequency MSI，MSI-L)，无任何位点变化称为 MSS（microstatellite stable，MSS)。
1.4 统计方法
以SPSS 18.0统计软件进行处理，使用卡方检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 MSI在结直肠癌中的检测结果
131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与患者的年龄，肿瘤的大小相关（P＜0.05），而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异（P＞0.05）。具体见表2。
3.讨论
微卫星是指DNA基因组中小于10个核苷酸的简单重复序列，又称短串联重复（short tandem repeat,STR），是一种遍布于人类基因组的重复序列，一般为2～6个碱基重复，如（CA）n、（GT）n、（CAG）n等，尤以(CA)n重复序列最为常见。其长度由重复单位的拷贝数决定，是一类呈高度多态的遗传标记。目前普遍认为MSI通过改变DNA结构或通过与特异性蛋白质结合而发挥其基因调控作用。微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）是指由于复制错误（replication error，RER）引起的简单重复序列的增加或丢失。在同一个体的正常组织比较下，肿瘤组织内的微卫星重复单位可以发生增多或减少而造成长度改变，从而在同一位点上出现不同于正常组织的等位片段，即称为MSI[1]。MSI是由于错配修复基因（mismatch-repair gene）失活导致DNA 复制错误的一种表现。
本实验结果显示，131例结直肠癌中27例（20.6%）为MSI-H阳性，30例（22.9%）为MSI-L，75例（57.3%）为MSS。MSI与年龄、肿瘤的大小有关，而在性别、发病部位、肿瘤分化程度方面差异无统计学差异（P＞0.05）。这与文献报道一致[2-3]。
MSI与常规病理在判断结直肠癌预后之间还有一定的矛盾，在传统病理中黏液腺癌和低分化腺癌提示预后不良，而大多数表达MSI-H者为黏液腺癌和低分化腺癌[4]，而从MSI角度来判，MSI-H者是预后良好的象征[5]。许多研究报道MSI是一个独立的预后因素[6-7]并且年轻的直肠癌患者预后往往较年长者好[8]。由于本次实验的直肠癌患者均为2015年至2016年成都地区的肿瘤病人，可能具有一定的地域，时间局限性，但同样也反映了结直肠癌的变化。由于本次实验均为最新的病例，所以未进行生存分析，这将是我们下一步研究的内容。
【参考文献】
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论文作者:罗波
论文发表刊物:《心理医生》2016年22期
论文发表时间:2016/11/29
标签：肿瘤论文; 腺癌论文; 引物论文; 病理论文; 结直肠癌论文; 基因论文; 差异论文; 《心理医生》2016年22期论文;