湖南省职业病防治院 湖南长沙 410007
【摘 要】目的：探讨牛磺酸对染硅尘大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及其凋亡抑制作用。方法：选取18只雌性SD大鼠，将其分为模型组、牛磺酸组和对照组三组，每组各6只大鼠。3组大鼠均在麻醉状态下给予支气管灌注染尘，在此基础上对照组大鼠给予支气管灌注生理盐水；模型组大鼠给予支气管内灌注SiO2粉尘悬液；牛磺酸组大鼠在模型组处理基础上，每天给予腹腔注射浓度为牛磺酸。建立大鼠矽肺模型，测定鼠肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平、计算大鼠肺泡巨噬细胞（AM）凋亡指数、检测凋亡AM的DNA断裂情况。结果：大鼠肺BALF）中的TNF-α水平从高到低依次为模型组、牛磺酸组和对照组，两两组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。大鼠BALF中的AM凋亡指数从高到低依次为模型组、牛磺酸组和对照组，两两组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。模型组、牛磺酸组和对照组大鼠凋亡肺泡AM琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂结果分别为：出现凋亡细胞特征性的DNA梯度条带、出现较弱的DNA梯度条带、未出现明显的DNA梯度条带。结论：牛磺酸能够通过抑制肺组织内TNF-α的表达，来发挥抑制肺泡巨噬细胞凋亡的作用。但是，对于具体的相关基因的变化情况等还需进一步的深入研究明确。
【关键词】牛磺酸；染硅尘大鼠；肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage，AM）；肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）；凋亡
矽肺发病的靶细胞是肺泡巨噬细胞（AM），当粉尘细胞进入到患者的肺泡巨噬细胞内后，会将其激活，从而促使其释放出包括活性氧、细胞因子等在内的大量的细胞活性物质，从而导致患者的肺泡结构遭到损伤，最终导致患者的肺组织发生纤维化【1】。因此，矽肺对人类的健康危害较大，临床一直致力于积极探索能够抑制矽肺患者肺组织纤维化的方法。临床研究表明，肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达在矽肺的发展过程中具有重要的促进作用。牛磺酸被临床研究发现具有良好的抗纤维化作用【2】。笔者就对牛磺酸对染硅尘大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及其凋亡抑制作用进行了实验研究，以期为矽肺的临床治疗研究提供理论参考。
1资料与方法
选取18只雌性SD大鼠，将其分为模型组、牛磺酸组和对照组三组，每组各6只大鼠。3组大鼠均在麻醉状态下给予支气管灌注染尘，在此基础上对照组大鼠给予支气管内灌注生理盐水1ml；模型组大鼠给予支气管内灌注浓度为50g/L的SiO2粉尘悬液1ml；牛磺酸组大鼠在模型组处理基础上，每天给予腹腔注射浓度为牛磺酸1ml/只。3组大鼠的饲养时间均为1个月。1个月饲养时间结束后，采用气管暴露法建立大鼠矽肺模型，分别搜集各组大鼠的肺泡灌洗液（BALF），并分离其中的肺泡巨噬细胞（AM）。应用ELISA法对大鼠肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平进行测定；采取TUNEL法对大鼠的肺泡巨噬细胞（AM）凋亡情况进行检测，并计算肺泡巨噬细胞（AM）凋亡指数；应用琼脂糖凝胶电泳法对凋亡肺泡巨噬细胞（AM）的DNA断裂情况进行检测【3】。通过对3组大鼠的实验数据进行分析，来探讨牛磺酸对染硅尘大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及其凋亡抑制作用。
1.2统计学方法
本组实验中测定数据均采用SPSS17.0软件进行分析，其中计量资料采取（ ）形式进行表示，多组间比较采用单因素方差进行，其中以p＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1三组大鼠BALF中的TNF-α表达水平及AM凋亡指数对比
大鼠肺泡灌洗液（BALF）中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平从高到低依次为模型组、牛磺酸组和对照组，两两组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。显微镜下可见大鼠肺泡巨噬细胞（AM）核发生固缩，不规则，被染成棕黄色。其中模型组和牛磺酸组大鼠肺泡巨噬细胞（AM）凋亡数显著多于对照组，比较差异具有统计学意义（P<0.05）；大鼠肺泡灌洗液（BALF）中的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）凋亡指数从高到低依次为模型组、牛磺酸组和对照组，两组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。具体研究数据见表1所示。
2.2三组大鼠肺凋亡肺泡巨噬细胞（AM）的DNA断裂检测结果
模型组、牛磺酸组和对照组大鼠凋亡肺泡巨噬细胞（AM）琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂结果分别为：出现凋亡细胞特征性的DNA梯度条带、出现较弱的DNA梯度条带、未出现明显的DNA梯度条带。
3讨论
牛磺酸即2-氨基乙磺酸，是一种含硫的β-氨基酸，该物质是一种机体内源性抗损伤和细胞保护物质。牛磺酸通过下调TGF的表达来发挥抑制成纤维细胞的表型转化，从而大鼠的肺纤维起到干预作用。牛磺酸还可以通过抑制氧化应激反应，下调促凋亡基因的表达来抑制细胞的凋亡【4】。本次研究结果提示出，牛磺酸能够通过抑制肺组织内肿瘤坏死因子α的表达，来发挥抑制肺泡巨噬细胞凋亡的作用。但是，对于具体的相关基因的变化情况等还需临床进行进一步的大样本深入研究来进行明确。
参考文献：
[1]鲍含诚，范雪云.尘肺病[M].煤炭工业出版社，2010：62-65.
[2]于伟璇，白珊珊，赵静.矽肺纤维化发生发展过程中CXCL11功能的实验研究［J/CD].中华临床医师杂志：电子版，2014，8（7）：1283-1287.
[3]Sharawy MH，El-Agamy DS，Shalaby AA，et al.Protective effects of methyl palmitate against silica-induced pulmonary fibrosis in rats[J].Int Immunopharmacol，2013，16（2）191-198.
[4]Małgorzata Karbownik-Lewińska，A Kokoszko-Bilska.Oxidative damage to macromolecules in the thyroid-experimental evidence[J].Thyroid Research，2012，5（1）：25.
*通讯作者：
姓名：赖燕 出生年：1967年 11月 性别：女 籍贯：湖南长沙 职称：主任医师
工作单位：湖南省职业病防治院职业病科
第一作者：
姓名：袁娟 出生年：1981年 1月 性别：女 籍贯：湖南长沙 职称：副主任医师
工作单位：湖南省职业病防治院职业病科
[基金项目]湖南省科技厅科研项目（硅尘诱导大鼠巨噬细胞凋亡的实验研究）
论文作者:袁娟,赖燕
论文发表刊物:《航空军医》2016年3期
论文发表时间:2016/5/26
标签：肺泡论文; 牛磺酸论文; 大鼠论文; 凋亡论文; 巨噬细胞论文; 矽肺论文; 模型论文; 《航空军医》2016年3期论文;