1.湖南中医药高等专科学校附属第一医院 湖南株洲 412000；2.株洲市食品药品检验所 湖南株洲 412000
【摘 要】目的：采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷的含量，评价胶囊质量。方法：取10个批次的黄七胶囊，高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定，乙醇-水（38：62）为流动相，漂移管温度105℃，流速2.7L/min，关闭撞击器，理论塔板数按照黄芪甲苷计算不低于4000，进样量10μl。配置供试品溶液、对照品溶液，建立回归方程、有效性考察。标准曲线法测定各个批次黄七胶囊剂中黄芪甲苷的含量。结果：线性回归：Y=1.8835X＋1.0633，r=0.9995，线性范围0.0966～0.4852mg/ml，精密度试验RSD%（n=10）＜1.5%，重复性检测RSD%（n=10）=0.715%＜2%，稳定性考察RAD%（n=8）=0.052%，平均加样回收率为100.02%，RSD%（n=8）=0.07%。10个批次黄七胶囊的黄芪甲苷的含量在0.622～0.642mg/粒，均达到胶囊质量评价标准限定范围，均值（0.631±0.005）mg/粒，变异系数为0.8%，符合国家标准，黄七胶囊的黄芪甲苷的含量稳定。结论：黄七胶囊的质量较好，其中主要有效成分黄芪甲苷的含量稳定。
【关键词】黄七胶囊；黄芪甲苷；高效液相色谱；蒸发光散射法
黄七胶囊是一种中成药，现代医学证实其用于缺血性疾病如脑卒中的治疗，可有效的减轻缺血缺氧损伤[1]。黄七胶囊的主要成分为黄芪、三七，黄芪甲苷是其主要有效成分，药物的剂量直接影响胶囊的功效的发挥[2]。本文采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷的含量，评价胶囊质量。
1材料与方法
1.1试验药物
黄七胶囊，10个批次（20171002、20171006、20171112、20171116、20171012、20171211、20171220、20171026、20171114、20171125）。
1.2仪器与试剂
主要包括Water 515高效液相色谱仪，Alltech 500蒸发散射检测器，紫外检测器，紫外-可见光分光光度计，固相萃取真空装置，色谱工作站。乙腈、异丙醇（色谱纯），纯化水等。黄芪甲苷（含量测定用，批号110745-201341）对照品，由中国药品生物制品检定所提供。
1.3方法
1.3.1 溶液的准备
（1）供试品溶液：取胶囊10粒，去除胶囊衣，倒出其中内容物入10ml的试管中，充分混匀，电子天平称量1.00g，置入100ml锥形瓶中，精密量取75%甲醇25ml，浸没药品，静置12h，精密称重，超声处理30min，置冷，称重，采用75%甲醇补充损失重量，摇匀，减压，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液。
（2）对照品溶液：精密称取黄芪甲苷标准品12.5mg置25ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，超声振摇，制得0.5mg/ml黄芪甲苷对照溶液。
1.3.2 检测方法
十二烷基硅烷键合硅胶作为填充器，蒸发光散射器检测。乙醇-水（38：62）为流动相，漂移管温度105℃，流速2.7L/min，关闭撞击器，理论塔板数按照黄芪甲苷计算不低于4000，进样量10μl。
（1）回归方程以及有效性考察：首先进行专属性考察，在前文提到的检测条件下，单纯的检测标准品、仅含有三七的对照药品溶液，进样10μl，结果显示，对照品溶液中出峰较好，在含有三七的对照药品在相应的位置上未出峰，专属性良好。
对照品、供试品、阴性对照品色谱图如下图1-3。
图3 阴性对照品溶液
而后进行线性关系考察，取获得的对照品溶液，精密称取置入2、4、6、8、10ml容量瓶中，加甲醇溶液稀释到刻度，摇匀，制得梯度浓度系列的对照品溶液，在色谱条件下进样，进样量10μl，测定峰面积。以峰面积（Y）的自然对数作为因变量，对照品溶液的进样量（X）自然对数作为因变量，绘制标准曲线，进行重复性、精密度、加样回收、稳定性考察。
（2）含量检测：取10个批次的黄七胶囊，按照前文所述的黄芪甲苷检测方法，制备供试品溶液，记录各供试品的峰面积，采用标准曲线法检测黄芪甲苷含量。
2 结果
线性回归：Y=1.8835X＋1.0633，r=0.9995，线性范围0.0966～0.4852mg/ml。精密度试验，结果显示RSD%（n=10）＜1.5%，提示精密度良好，重复性检测显示RSD%（n=10）=0.715%＜2%，提示重复性良好。稳定性考察，分别取样放置0、3、6、9、12、18、24、48h取样检测，结果显示RAD%（n=8）=0.052%，提示稳定性较好。加样回收试验显示，平均加样回收率为100.02%，RSD%（n=8）=0.07%，提示准确度良好。
10个批次黄七胶囊的黄芪甲苷的含量在0.622～0.642mg/粒，均达到胶囊质量评价标准限定范围，均值（0.631±0.005）mg/粒，变异系数为0.8%，符合国家标准，黄七胶囊的黄芪甲苷的含量稳定。
3 讨论
黄七胶囊是一种新上市的中成药，有关的研究并不多见，从其配方来看，其中主要成分为黄芪、三七，主要用于治疗缺血性血管疾病，同时具有增强耐缺氧能力、抗疲劳、调节阴阳等作用。黄芪甲苷是胶囊的主要有效成分，与三七皂苷可发挥协同作用起效。黄七胶囊中黄芪是君药，用量大，其主要有效成分的含量直接以影响药效，对控制制剂的质量具有重要意义[3]。
目前可供选择的药物含量检测方法较多，如薄层色谱法、色-质联用技术、紫外分光光度法等，各有优劣。高效液相色谱法是公认的测定单一含量最理想的方法，黄芪甲苷溶于水，研究中的胶囊剂有比较复杂的底物，需要采用甲醇提取等净化技术，同时受到传统的胶囊制剂制造工艺影响，组分还有其他复杂的成分，可以采用超声等方法萃取。旋转蒸发仪，主要由雾化器、加热漂移管、光散射池组成，在光散射池中，样品颗粒散射光源发出的光被检测产生电信号。高效液相色谱法-蒸发光散射检测法基本成熟，流动相、分析纯获取容易，流动相为水、乙醇，胶囊中的其他成分不会干扰黄芪甲苷的测定，理论塔板数按照黄芪甲苷计算不低于4000，最低检出限可以达到0.02μg/ml。
从检验方法学评价来看，精密度试验RSD%（n=10）＜1.5%，重复性检测RSD%（n=10）=0.715%＜2%，稳定性考察RAD%（n=8）=0.052%，平均加样回收率为100.02%，RSD%（n=8）=0.07%。都达到较高的水平，提示方法较好，可作为黄七胶囊黄芪甲苷的检测方法。对供试品检测结果显示，黄芪甲苷的含量在0.622～0.642mg/粒，均值变异系数0.8%，符合国家标准，胶囊剂的黄芪甲苷的含量稳定。另有学者测定了黄七胶囊中的人参皂苷、三七皂苷的含量，结果较好，质量达标[4]。
在实际检测过程中，检验的质量还受到其他因素的影响：①载气气压、雾化器、流动相组成以及流速等；②被分析物的浓度和体积质量；③光源发出的光和波长；④光电倍增敏灵敏度、入射光的强度。在进行检测需要充分的校正。，确认仪器设备的工作状态。
小结：
黄七胶囊的质量较好，其中主要有效成分黄芪甲苷的含量稳定，检测时做好质量控制。
参考文献：
[1]黄小平，王蓓，邱咏园，等.黄芪甲苷和三七的主要有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后脑组织能量代谢的影响[J].中草药，2014，45（02）：220-226.
[2]杜鹏，顿宝生，杨新杰，等.高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷的含量[J].世界中医药，2018，13（02）：460-463.
[3]叶绘晟，唐文均，龚志强，等.HPLC法测定泰痹颗粒Ⅱ号中虎杖苷、葛根素、黄芪甲苷含量[J].中药新药与临床药理，2018，29（02）：184-188.
[4]彭修娟，杜志德，顿宝生，等.高效液相色谱法测定黄七胶囊中人参皂苷Rg_1、Rb_1及三七皂苷R_1的含量[J].世界中医药，2018，13（01）：207-210.
论文作者:胡雪来1,刘水平2
论文发表刊物:《中国蒙医药》2018年第5期
论文发表时间:2018/7/27
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