张得胜 （福建医科大学附属第一医院 福建福州 350001）
【摘要】目的 探讨以高效液相色谱法对药品制剂中维生素A的含量进行测定的效果。方法 选择高效液相色谱仪对维生素AD滴剂进行测定，以探讨其在测定维生素A含量中的效果。结果 研究发现，采用高效液相色谱法进行测定，可有效分析维生素AD滴剂中所含有的维生素A，其处于120～125.5μg/dL的浓度范围时，呈现出良好的线性关系，其中r2为0.9996，平均回收率高达99.89％，相对标准偏差（RSD）低于2％。结论 在测定药品制剂中所含有的维生素A时应用高效液相色谱法，在回收率、重现性等方面可取的满意的结果，并且该方法具有灵敏度高、易于操作等多种优点，值得推广。
【关键词】高效液相色谱法 药品制剂 维生素A
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0168-02
维生素A属于维持人体正常生理功能的一项必要微量元素。对于人体而言，维生素A可起到多种作用，例如保护上皮组织、保护视力、预防癌症、增强免疫力等多种作用[1]。所以，一旦人体内缺乏维生素A这一微量元素，极有可能对人体产生一定的不良影响，例如抗感染能力下降，易于产生消化道感染以及呼吸道感染，视力下降等。对于疾病的临床诊治而言，血清维生素A含量的测定属于一种重要的诊断方法，而现阶段，在维生素测定中，较常采用高效液相色谱法进行测定。基于此，本次研究采用高效液相色谱法对维生素AD滴剂当中所含有的维生素A进行测定，以探讨该测定方法的效果。
1.测定方法
1.1测定所用药品、试剂以及仪器的选择
仪器方面：美国Waters公司的紫外检测器与高效液相色谱仪，南京仪器厂的漩涡器，美国惠普公司的离心机；药品方面：美国Sigma公司的维生素A标准品；试剂方面：以双蒸水作为实验用水，以正己烷、乙醇作为分析纯，以甲醇作为色谱纯；
1.2预处理
采用蒸馏水与甲醇各500μL对SPE柱进行过滤后加入样品，接着采用3ml蒸馏水+3ml比例为6:4的甲醇-水来洗涤柱子，并以甲醇、氯仿等将洗脱的维生素A进行收集。
1.3色谱条件设置
采用Kromasil色谱柱100-5C18作为分析柱，其规格为150mm× 43mm,5μm；柱温设置为30℃；检测波长设置为270nm；进样量为20μL；流动相为甲醇：酒精，两者的比例为80:20；每分钟流速设置为0.5ml；
1.4校准曲线的制备
采用乙醇稀释维生素A的储备液，溶液0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，采用10ml的容量瓶装置，加入流动相稀释并摇匀，接着，加入10μL配置好的溶液，将两者均匀混合，以高效液相色谱仪进行测定。取得A=776.02C+13.25，r=0.9996这一回归方程。线性范围：1.20～2.83mg/ml。
2.测定结果
2.1回收率的测定结果
研究以处方工艺为依据，根据处方量加入维生素A与维生素D，配制成维生素AD滴剂后记录色谱，并对回收率进行计算，详情见表1。
2.2稳定性以及精密度的试验情况
在稳定性以及精密度的测试上，以维生素A作为实验样品，通过校准曲线对实际浓度进行计算，维生素A为0.1835％。取出相同的样品，分别在初始、2小时、4小时以及6小时这几个时间段做进样测定，维生素A为0.0768％，其中样品是在6h内达到稳定。
2.3维生素A的含量测定
研究取出10μL的维生素AD滴剂作为检测样品，将其注入高效液相色谱分析仪中，通过计算得出，维生素A的含量约为（0.39±0.04）mg/ml。
3.讨论
维生素A属于微量元素的一种，人类在维持正常生命活动的过程中，维生素A起到必不可少的作用。其中，维生素A在人体内具有十分广泛的作用靶点，其对人体内多个系统均可发挥效应，例如免疫系统、神经系统、生殖系统、呼吸系统以及消化系统[2]。维生素A也可称为视黄醇，人们在保持正常视力与预防夜盲症中，维生素A起到十分重要的作用，同时人体骨骼在生长发育期间，维生素A也起到一定的作用。除此之外，维生素A还具有多种功能，例如：①预防癌症；②增强机体免疫力；③促进体内铁的吸收以及转运；④优化糖蛋白的合成；⑤维持机体上体组织结构；
相关医学研究发现，人体缺乏维生素A这一微量元素时，有可能会引起多种不良后果，例如以患上腹泻、呼吸道感染以及中耳炎。当身体具有伤口时，维生素A的缺少会延长伤口的愈合时间，并且伤口处会有色素沉着，形成瘢痕[3]。另外，还有相关的医学研究表明，维生素A有利于胆固醇的降低，并且对于动脉粥样硬化的发生发展可起到一定的抑制作用[4]。其中维生素A含量的测定，对于临床诊治工作具有十分重要的意义。
高效液相色谱法具有多种优点，例如精确度高、稳定性佳、重复性良好、分析速度快、灵敏度高等。该方法通过微量加样器，在加样系统中注入经过提纯处理的样品，进而启动高压泵，从而带流动相进入色谱柱，样品通过在色谱柱的固定相以及流动相之间进行多次交换，通过根据物质的各项系数（如流动相以及固定相之间的分配系数、分子极性大小、电荷数目等）进行分离，通过检测后以峰面积对含量进行计算。本次研究通过采用高效液相色谱法对维生素A的含量进行测定。结果显示，在维生素A含量的测定中应用高效液相色谱法，可有效消除辅料所带来的干扰，提高测量结果的准确性。但因为维生素A具有见光易分解易氧化的特性，因此在测定期间的各个环节均需要严格避光，例如样品处理环节、样品提出环节、样品测定环节等。其次，研究在测定期间选择甲醇作为流动相，使得药品制剂中规定维生素A可迅速达到基线分离。另外，柱温对于分离效果的影响较小。样本经过处理后，稳定性较好，并且在重现性上取得了满意的结果。相关医学研究在维生素A的测定过程中，以正己烷提取蒸干发对样本进行处理，然而该方法较为复杂，不易操作[5]。而本次研究中所应用的高效液相色谱法，不仅易于操作，其测定结果的准确性也较好。
4.结论
综上所诉，在药品制剂维生素A含量的测定中应用高效液相色谱法，测定过程简单方便，测定结果准确性高，值得推广应用。
表1：维生素A回收率的分析结果
参考文献
[1]苏佳妍,岳青阳,于大海,牛剑钊.维生素A含量测定方法的研究[J].山西医药杂志,2010,09(06):557-558.??
[2]颜景超,任国谱,安静,张晓雷.高效液相色谱法测定乳制品中维生素A的研究进展[J].中国乳品工业,2011,03(09):43-46.
[3]阳利龙,银雪花,祝文兵,何周康.HPLC测定血清中25-羟基维生素D_3和维生素A及应用[J].儿科药学杂志,2010,05(03):41-43.??
[4]郑凤家,别明江,孙成均.DLPME-HPLC同时测定微量人血清中的维生素A和E[J].现代预防医学,2011,04(08):1522-1524.??
[5]刁娟娟,田兰,孙炜,李新霞.高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E、C的含量[J].化学通报,2010,11(09):826-831.??
论文作者:张得胜
论文发表刊物:《医药前沿》2013年12月第34期供稿
论文发表时间:2014-1-15
标签：维生素论文; 高效论文; 液相论文; 含量论文; 色谱论文; 样品论文; 滴剂论文; 《医药前沿》2013年12月第34期供稿论文;