一、泰泽菌PCR检测方法的建立及初步应用（论文文献综述）
邢进,冯育芳,王洪,张雪青,高强,岳秉飞,付瑞[1]（2021）在《2013—2020年7次实验动物病原菌项目国际比对结果分析》文中研究说明目的通过评估自身检测能力,促进国内实验动物能力验证活动的开展和检测水平的提高。方法中国食品药品检定研究院于2013—2020年共7次参加国际实验动物科学理事会（International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS）实验动物检测能力验证活动[即诊断实验室性能评估程序（Performance Evaluation Program for Diagnostic Laboratories,PEP）]（简称"国际比对"）。PEP活动中,通过培养、生化鉴定、PCR和测序等方法对PEP病原菌样品开展检测,并对国际比对结果进行总结分析。结果 7次国际比对能力验证活动共检测40份样品,涉及27种病原菌,结果符合率分别为8/8、2/2、5/8、9/9、5/5、6/7和1/1;其中病原检测33项,抗体检测7项。国内各项标准中尚缺少辛氏鲍特菌、黏质沙雷菌、乳腺炎棒状杆菌、CAR（Cilia-associated respiratory）杆菌、小鼠放线杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、产酸克雷伯杆菌、无乳链球菌和致病性大肠埃希菌共9种病原菌的检测项目。结论通过参加国际比对活动,发现了国内外标准差异以及自身急需提升的检测能力,希望早日与国际接轨。
赵巧雅,宋丹丹,刘丽萍,郭效珍,刘存霞,盛媛,史玉颖,黄兵[2]（2021）在《兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用》文中研究指明兔轮状病毒（lapine rotavirus, LaRV）和兔肠冠状病毒（rabbit enteric coronavirus, RECV）是引起兔腹泻的重要病原,2种病毒引起的仔兔腹泻症状极为相似。为建立能同时鉴别LaRV、RECV的方法,根据LaRV和RECV基因组的保守区段设计2对特异性引物,预期特异性扩增LaRV和RECV的片段大小分别为291 bp和163 bp,经优化反应条件,成功建立了LaRV和RECV的双重RT-PCR检测方法。特异性检测结果显示,能特异性的扩增出LaRV和RECV的目的条带,与兔瘟、大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌、泰泽菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌均无交叉反应;LaRV和RECV的最低检出限分别为2.73×105,1.22×104拷贝/μL,在相同条件下重复可获得一致的结果。对采自山东部分地区的107份兔腹泻样品的检测结果显示,LaRV和RECV的阳性率分别为10.28%和7.48%,两者与单一RT-PCR检测结果相一致。结果表明,所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确的对LaRV和RECV单一或混合感染的样品进行检测,为LaRV和RECV的鉴别诊断和流行病学调查提供新的技术手段。
冯洁[3]（2019）在《肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立与初步应用及其小鼠感染模型的构建》文中研究指明肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus,Hhepaticus）是一种革兰氏阴性、微需氧、螺旋弯曲状细菌,呈世界性分布,可感染多种哺乳动物,主要以隐性感染方式定殖于动物消化道,可引起慢性肝炎、盲肠结肠炎、胆管炎甚至诱发肝癌、肝胆管腺瘤、结肠癌等病变。不仅严重危害动物健康,影响动物试验、干扰实验结果,还可能危及公共卫生安全,是啮齿类实验动物重要的致病菌之一。建立快速、精准、适宜推广的肝螺杆菌检测体系,将有助于实验动物微生物质量控制以及实验动物标准化和规范化进程的推进。研究发现,在人类肝炎、肝癌等相关临床标本中可检测到肝螺杆菌特异性16S rRNA序列,肝螺杆菌感染小鼠引起的疾病进程、组织病理特征与人类慢性肝病和肠炎非常相似,提示肝螺杆菌与人类消化道疾病可能相关。因此,构建肝螺杆菌感染小鼠模型将有助于深入探索人类相关疾病致病机制,为相关研究及特异性药物筛选提供工具。鉴于肝螺杆菌在人工培养基中难以生长,本研究建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法,并采用该方法对上海市实验动物生产许可证单位的大鼠、小鼠开展了流行病学调查。通过人工感染方式构建了肝螺杆菌感染BALB/c小鼠模型,从免疫学、组织病理学、肠道菌群结构等角度研究肝螺杆菌感染引起的宿主损伤。1肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立鞭毛蛋白是肝螺杆菌重要的毒力因子,具有高度的保守性。本文根据H hepaticus的fal B基因保守区域设计一组特异性引物,包含一对外引物F3、B3,一对内引物FIP、BIP和一条环引物LB。经过条件优化、特异性和敏感性分析,建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法特异性良好,仅能检测出Hhepaticus,其他常见细菌未见特异性扩增。检出的最低模板量为86.9 fg/μL,是普通PCR所需模板量的1/10。与现有技术相比,该方法不受培养条件和检测仪器的限制,具备简便、快捷、特异、灵敏的优势,适宜基层的推广应用,适用于实验动物、相关动物源性生物制品、细菌培养物及实验动物环境中H hepaticus的检测,为Hhepaticus的快速检测和实验动物质量控制提供了技术支撑。2上海地区实验大鼠、小鼠肝螺杆菌LAMP检测与分析采用建立的LAMP方法对近年来上海市实验动物生产许可证单位实验大鼠、小鼠进行H hepaticus检测。共检测1492只动物（清洁级大鼠54只,SPF级大鼠200只,清洁级小鼠267只,SPF级小鼠971只）,且受检动物均饲养于屏障系统。结果显示,2014、2016、2017年所涉动物设施均存在不同程度的污染,清洁级动物所在设施污染率分别为75.00%、75.00%、40.00%,SPF级动物所在设施污染率分别为66.67%、23.08%、50.00%。动物的总阳性率为8.65%,2014～2017年分别为11.85%、3.51%、10.71%。大鼠总阳性率为5.91%,2014～2017年分别为2.78%、3.85%、13.24%,清洁级、SPF级大鼠的阳性率分别为9.26%、5.00%;小鼠总阳性率为9.21%,2014～2017年分别为15.69%、3.44%、10.42%,清洁级、SPF级小鼠的阳性率分别为8.24%、9.47%。对阳性动物按不同品系进一步归类,结果显示阳性率相对较高的品系有基因工程、BALB/c、ICR、KM等。总体而言,大鼠、小鼠均有不同程度的阳性检出率,不同年份、不同级别间差异不大,未见明显规律。调查结果为进一步补充、完善啮齿类实验动物螺杆菌流行病学资料和我国实验动物的微生物学质量控制提供了参考和数据。3肝螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的建立及评价通过灌胃、腹腔注射接种方式造模,每只小鼠接种0.2 mL标准菌株悬液（1×109 CFU/mL）,连续接种3次,每次间隔48h。结果显示,H.hepaticus感染可引起小鼠体重显着下降、白细胞显着升高（P<0.01）。于造模后2w,4w,6w,8w,12w,16w,20w,24w采集血液和脏器标本,测定小鼠体重、白细胞、血清ALT和AST水平变化,检测细菌在体内的定殖分布规律,并对宿主细胞因子表达水平以及组织病理学进行分析。感染小鼠血清AST（P<0.001）和ALT（P<0.01）水平显着升高,且呈持续上升趋势。组织分布检测结果表明,接种后2w所有小鼠盲肠均能检测到H.hepaticus;接种后6w肝脏首次检测出阳性,接种后8w肝脏呈现100%阳性;灌胃组和腹腔注射组胃组织分别于接种后8 w和16 w可检测到阳性;其余组织均未能检测出阳性。由此可见Hhepaticus进入小鼠体内最先在肠道定殖,随着感染时间的延长可在肝脏、胃等组织中定殖。组织病理学分析显示,感染鼠肝细胞可见明显空泡变性、脂肪变性、灶性坏死、炎性细胞浸润,胃部可见黏膜上皮细胞呈乳头状增生增厚,不同部位肠道组织可见水肿、充血、黏膜层变性、坏死、糜烂,炎性细胞浸润,随着感染时间的延长病变程度增加,其它组织未见明显病变。细胞因子检测结果显示,感染组小鼠IL-6、TNF-α、IL-1β表达水平显着上调（P<0.001）,表明H.hepaticus可促进BALB/c小鼠肝组织细胞炎性因子表达。Hhepaticus感染小鼠模型的构建为进一步研究其致病机制以及人类相关疾病提供了工具。4肝螺杆菌感染BALB/c小鼠肠道菌群结构分析根据细菌16S rDNA基因V4-V5可变区片段设计引物接头进行PCR扩增,采用Illumina高通量测序技术对H hepaticus感染小鼠的肠道菌群特征进行运算分类单位（operational taxonomic unit,OTU）聚类、多样性、群落结构组成及差异性分析以及代谢功能预测等。结果表明,实验组动物的肠道菌群多样性显着低于对照组（P<0.01）。实验组和对照组OTU数目分别为89和209,两组共有73个OTU。在门水平,实验组和对照组菌群序列均分属于7个菌门,两组样本中拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）均为丰度最高的两个门。两组样本共有5个门重叠,又分别有2个独有的门,实验组独有疣微菌门（Verrucomicrobia）和 Epsilonbacteraeota,对照组独有软壁菌门（Tenericutes）和蓝藻菌门（Cyanobacteria）。在属水平,两组样本共检测到74个属,实验组样本隶属45个属,对照组样本隶属64个属,其中两组共有35个属,实验组独有10个属,对照组独有29个属,实验组拟杆菌属、Muribaculaceae、毛螺菌属、布劳特菌属（Blautia）、Rumini clostridium等含量相对较高。线性判别分析（linear discriminant analysis Effect Size,LEfSe）显示,在门的水平仅Epsilonbacteraeota存在显着性差异;在属的水平有31个属存在显着性差异,实验组拟杆菌属、梭菌属、黄杆菌属、瘤胃球菌属、克雷伯菌属、肠球菌属和螺杆菌属等的丰度显着高于对照组,而毛螺菌科NK4A136group、颤螺旋菌属、普雷沃菌属、肠杆菌属、理研菌科RC9gutgroup丰度则显着低于对照组。上述结果表明H.hepaticus感染可引起小鼠肠道菌群的群落丰富度和多样性明显降低,为揭示H hepaticus与宿主肠道菌群的调控机制提供了资料。
宋悦,赵权,黄燕,米荣升,游艳敏,贾海燕,程龙,张烨华,张晓丽,韩先干,陈兆国[4]（2017）在《隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较》文中研究说明为筛选一种检测谱广、敏感性好、特异性高的隐孢子虫实时荧光定量PCR法,对JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法三种隐孢子虫实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了检测,并与基于18S r DNA序列的套式PCR方法进行了比较。结果显示,以10倍倍比稀释的含有微小隐孢子虫18S r DNA基因片段的重组质粒为模板,成功地建立了三种实时荧光定量PCR方法;敏感性试验显示,JVAP18S法和Csp18S法最低可检测0.1个卵囊,而CRU18S法最低只能检测到1个卵囊,但他们均比套式PCR方法敏感;特异性试验结果显示,三种实时荧光定量PCR法均可检测微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）、泰泽隐孢子虫（Cryptosporidium tyzzeri）和贝氏隐孢子虫（Cryptosporidium baileyi）,而其他属寄生虫和细菌DNA的检测结果均为阴性;重复性试验结果显示,JVAP18S法、Csp18S法和CRU18S法的批内变异系数分别为0.69%2.68%、0.11%4.93%、0.04%2.89%,批间变异系数分别为0.52%5.75%、2.09%5.13%、1.15%3.71%;对50份小鼠田间粪便样品检测结果显示,JVAP18S法检测的阳性率为84.00%,显着高于套式PCR法检测的64.00%的阳性率。上述结果表明,三种实时荧光定量PCR法均能有效检测隐孢子虫,比较而言,JVAP18S法敏感性高、特异性强、重复性好,尤其适合于隐孢子虫含量较少的样品检测。
高正琴,岳秉飞[5]（2017）在《白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析》文中研究表明目的建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析。方法针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性。对1185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定。对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验。结果研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100%。该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位。该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2%。测试中相关系数、斜率和效率没有显着变化,表明该方法稳定性好,精密度高。将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证。整个检测过程可在2 h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法。应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示:这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性。结论本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查。
祝岩波,王俊霞[6]（2017）在《实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价》文中指出泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒是实验动物重要的致病病原体,可引起呼吸系统、消化系统疾病,对动物的生产和动物实验可产生不良影响。本文对上述国家检测标准规定必须检测且有检测难度的三种病原体进行方法学总结,以获得更好特异性和敏感性的诊断方法,提出传统方法初检、PCR方法复检的方法以提高检测结果的准确性和可靠性。
高正琴,岳秉飞[7]（2017）在《白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析》文中研究说明目的建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析。方法:针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性。对1185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定。对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验。结果:研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100%。该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位。该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2%。测试中相关系数、斜率和效率没有显着变化,表明该方法稳定性好,精密度高。将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证。整个检测过程可在2h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法。应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1 185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示:这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性。结论:本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查。
高正琴,岳秉飞[8]（2017）在《白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析》文中研究表明目的:建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析。方法:针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性。对1 185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定。对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验。结果:研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100%。该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位。该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2%。测试中相关系数、斜率和效率没有显着变化,表明该方法稳定性好,精密度高。将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证。整个检测过程可在2 h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法。应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1 185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示:这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性。结论:本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查。
宋悦[9]（2017）在《六种隐孢子虫抗原的免疫保护效果研究》文中研究指明隐孢子虫（Cryptosporidium）是一种全球流行的重要人兽共患寄生原虫,具有广泛的宿主。隐孢子虫病目前是仅次于轮状病毒的第二大致腹泻疾病,每年有80万5岁以下儿童死于隐孢子虫引起的腹泻。尽管许多学者对其生物学特性、致病机理、免疫和基因组学等多个领域进行了研究,也取得了显着的成绩,但仍存在很多的问题和不足,隐孢子虫病至今尚无有效的治疗药物和疫苗。本研究对JVAP18S、Csp18S和CRU18S 3种隐孢子虫TaqMan实时荧光定量PCR方法的敏感性、特异性和重复性进行了比较。结果显示,3种方法均能有效检测隐孢子虫,其中JVAP18S法敏感性更高、特异性更强、重复性更好,适合于动物粪便中隐孢子虫卵囊的定量检测。ICR小鼠人工感染泰泽隐孢子虫后,第3 d开始排出卵囊,第9 d达高峰,21 d出现第二个高峰,至30 d仍有排出。构建了泰泽隐孢子虫子孢子表面抗原CP15基因的原核表达载体,实现了该基因的可溶表达,表达产物具有良好的免疫活性,其免疫血清与微小隐孢子虫抗原存在交叉反应。对rCP15、rCpSushi、rCP41制备的亚单位疫苗,以及pVAX-CpCTL10、pVAX-TH10和pVAX-CP15 3种核酸疫苗对ICR小鼠的免疫保护效果进行了比较。结果显示,6种疫苗均诱导产生了特异性的体液和细胞免疫反应,小鼠血清IgG抗体,IL-4、IL-17、INF-γ和TNF细胞因子,CD4+和CD8+淋巴细胞含量,以及脾淋巴细胞增值水平均有不同程度的提高。人工感染后各免疫组小鼠排卵囊量显着减少,其中pVAX-CpCTL10、rCP41和rCpSushi组减卵率分别达58.34%、53.78%和51.52%,表明6组疫苗免疫均对小鼠隐孢子虫感染有良好的保护效果。
祝岩波,王俊霞[10]（2017）在《实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价》文中研究表明泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒是实验动物重要的致病病原体,可引起呼吸系统、消化系统疾病,对动物的生产和动物实验可产生不良影响。本文对上述国家检测标准规定必须检测且有检测难度的三种病原体进行方法学总结,以获得更好特异性和敏感性的诊断方法;提出传统方法初检、PCR方法复检的方法以提高检测结果的准确性和可靠性。
二、泰泽菌PCR检测方法的建立及初步应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、泰泽菌PCR检测方法的建立及初步应用（论文提纲范文）
（1）2013—2020年7次实验动物病原菌项目国际比对结果分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 培养基和试剂 |
| 1.2 仪器设备 |
| 1.3 PEP样品 |
| 1.4 样品培养 |
| 1.5 抗体检测 |
| 1.6 核酸检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 预期结果 |
| 2.2 不符合项目 |
| 3 讨论 |
（2）兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品、病毒及菌株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 引物设计与合成 |
| 1.4 核酸提取及反转录 |
| 1.5 PCR扩增 |
| 1.6 特异性试验 |
| 1.7 敏感性试验 |
| 1.8 临床样品检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 双重RT-PCR体系的构建及优化 |
| 2.2 特异性试验 |
| 2.3 敏感性试验 |
| 2.4 临床样本检测 |
| 3 讨论 |
（3）肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立与初步应用及其小鼠感染模型的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 肝螺杆菌研究进展 |
| 1 病原特性 |
| 1.1 分类学 |
| 1.2 形态特征 |
| 1.3 培养特性 |
| 2 流行病学 |
| 3 致病机理 |
| 3.1 鞭毛蛋白 |
| 3.2 尿素酶 |
| 3.3 黏附素 |
| 3.4 细胞致死性膨胀毒素 |
| 3.5 毒力岛 |
| 4 致病性 |
| 4.1 肝脏疾病 |
| 4.2 肠道疾病 |
| 4.3 与人类疾病的关联 |
| 4.4 对试验的干扰 |
| 5 检测方法 |
| 5.1 分离培养法 |
| 5.2 组织化学法 |
| 5.3 血清学方法 |
| 5.4 PCR方法 |
| 6 预防控制 |
| 第二章 国内外实验大小鼠细菌学检测项目与检测方法的评价 |
| 1 检测内容(项目) |
| 2 检测方法 |
| 3 结语 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验菌株 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 模板制备 |
| 2.2 引物设计与合成 |
| 2.3 LAMP检测体系建立与优化 |
| 2.4 结果判定 |
| 2.5 LAMP特异性检测 |
| 2.6 LAMP灵敏度检测 |
| 2.7 临床应用验证 |
| 3 结果 |
| 3.1 LAMP检测方法的建立 |
| 3.2 LAMP特异性检测 |
| 3.3 LAMP灵敏度检测 |
| 3.4 临床应用验证结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 上海地区实验大鼠、小鼠肝螺杆菌LAMP检测与分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 样品来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 样品处理 |
| 2.2 LAMP检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 设施污染分析 |
| 3.2 病原检测结果分析 |
| 4 讨论 |
| 第三章 肝螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的建立及评价 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 菌株 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 培养基配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 菌悬液制备 |
| 2.2 小鼠H.hepaticus感染模型的建立 |
| 2.3 菌株分离与鉴定 |
| 2.4 血液生化指标检测 |
| 2.5 细菌组织分布检测 |
| 2.6 组织病理学检查 |
| 2.7 肝组织相关细胞因子表达检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠体重、精神、粪便状况检查 |
| 3.2 细菌分离与鉴定 |
| 3.3 血液白细胞数检查 |
| 3.4 血液生化指标检测 |
| 3.5 组织分布检测 |
| 3.6 组织病理学观察 |
| 3.7 细胞因子表达水平检测 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 肝螺杆菌感染BALB/c小鼠肠道菌群结构分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 取材 |
| 2.2 DNA抽提 |
| 2.3 PCR扩增 |
| 2.4 文库构建 |
| 2.5 高通量测序 |
| 2.6 生物信息学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 多样性分析 |
| 3.2 细菌群落结构分析 |
| 3.3 物种丰度差异性分析 |
| 3.4 肠道菌群定量PCR检测 |
| 3.5 代谢功能预测分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、申请专利 |
（4）隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 虫株、菌株和DNA |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 微小隐孢子虫卵囊DNA的提取 |
| 1.4 微小隐孢子虫18S r DNA重组质粒的制备 |
| 1.5 标准曲线的绘制 |
| 1.5.1 JVAP18S法 |
| 1.5.2 Csp18S法 |
| 1.5.3 CRU18S法 |
| 1.6 敏感性试验 |
| 1.7 特异性试验 |
| 1.8 重复性试验 |
| 1.9 JVAP18S法的田间初步应用 |
| 2 结果 |
| 2.1 微小隐孢子虫18S r DNA重组质粒的构建 |
| 2.2 标准曲线的绘制 |
| 2.3 敏感性试验 |
| 2.4 特异性试验 |
| 2.5 重复性试验 |
| 2.6 田间样品初步应用 |
| 3 讨论 |
（8）白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和参考株及质粒标准品 |
| 1.2 临床标本中白色念珠菌分离和抗真菌药物敏感性试验分析及DNA提取 |
| 1.3 白色念珠菌Taq Man-MGB探针和RTFQ-PCR引物设计及反应体系优化 |
| 1.4 白色念珠菌Taq Man-MGB探针RTFQ-PCR标准曲线的构建、特异性、灵敏度试验 |
| 1.5 白色念珠菌Taq Man-MGB探针RTFQ-PCR重复性和稳定性试验 |
| 1.6 白色念珠菌Taq Man-MGB探针RTFQ-PCR和普通PCR检测临床标本 |
| 2 结果 |
| 2.1 白色念珠菌Taq Man-MGB探针RTFQ-PCR标准曲线、特异性、灵敏度试验 |
| 2.2 白色念珠菌Taq Man-MGB探针RTFQ-PCR重复性和稳定性分析 |
| 2.3 临床标本中白色念珠菌的定量检测结果 |
| 2.4 白色念珠菌临床分离株药敏分析 |
| 3 讨论 |
（9）六种隐孢子虫抗原的免疫保护效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 隐孢子虫病的免疫学研究 |
| 1.1 体液免疫 |
| 1.2 细胞免疫 |
| 第二章 隐孢子虫抗原研究 |
| 2.1 子孢子表面蛋白CP15 |
| 2.2 Sushi结构域 |
| 2.3 卵囊壁蛋白CP41 |
| 2.4 延伸因子 1α（EF-1α） |
| 第三章 实时荧光定量PCR检测方法的研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 三种隐孢子虫定量检测方法的比较及在小鼠感染模型中的应用 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果： |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 泰泽隐孢子虫CP15基因的原核表达及抗血清制备 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 六种隐孢子虫抗原保护效果比较 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（10）实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价（论文提纲范文）
| 1 泰泽氏菌 (Tyzzer's organism或Clostridium piliforme或Bacillus piliformis) 的检测 |
| 2 肺支原体 (Mycoplasma pulmonis) 的检测 |
| 3 兔出血症病毒 (Rabbit haemorrhagic disease virus) 的检测 |
四、泰泽菌PCR检测方法的建立及初步应用（论文参考文献）
- [1]2013—2020年7次实验动物病原菌项目国际比对结果分析[J]. 邢进,冯育芳,王洪,张雪青,高强,岳秉飞,付瑞. 实验动物与比较医学, 2021(06)
- [2]兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 赵巧雅,宋丹丹,刘丽萍,郭效珍,刘存霞,盛媛,史玉颖,黄兵. 中国兽医学报, 2021(07)
- [3]肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立与初步应用及其小鼠感染模型的构建[D]. 冯洁. 扬州大学, 2019(06)
- [4]隐孢子虫三种实时荧光定量PCR检测方法的比较[J]. 宋悦,赵权,黄燕,米荣升,游艳敏,贾海燕,程龙,张烨华,张晓丽,韩先干,陈兆国. 中国动物传染病学报, 2017(06)
- [5]白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析[A]. 高正琴,岳秉飞. 第十三届中国实验动物科学年会论文集, 2017
- [6]实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价[A]. 祝岩波,王俊霞. 2017年第十五届中国北方实验动物科技年会论文集, 2017
- [7]白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析[A]. 高正琴,岳秉飞. 2017年第十五届中国北方实验动物科技年会论文集, 2017
- [8]白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析[J]. 高正琴,岳秉飞. 药物分析杂志, 2017(06)
- [9]六种隐孢子虫抗原的免疫保护效果研究[D]. 宋悦. 吉林农业大学, 2017(02)
- [10]实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价[J]. 祝岩波,王俊霞. 实验动物科学, 2017(02)