（南昌三三四医院检验科 江西 南昌 330020）
【摘要】 目的：在全自动生化仪上降低同型半胱氨酸试剂用量，并对改变后的测试性能进行性能评价。方法：参照CLSI EP5-A2，EP17-A、EP6A等文件，评价试剂用量降低后试验的精密度、准确度及偏倚、线性范围。结果：本实验中精密度实验结果显示血清测试几个浓度的CV均低于规定的10%，符合文件要求；线性范围为1.9～40mmol/L，符合厂家说明书和临床检测要求；同型半胱氨酸在不同体积时回收率分别为94%、89%、88%，准确度良好。结论：在全自动生化仪对成本较高的试剂，如同型半胱氨酸，降低试剂用量。但应严格进行性能评价。评价通过后，才能运用于临床。从而在确保医疗质量的前提下取得较好的经济效益。
【关键词】 全自动生化分析仪；同型半胱氨酸；试剂用量；性能评价
【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）26-0186-02
开放式大型全自动生化分析仪支持项目分析参数的设置，理论上只要样品试剂体积比不变，测试结果应该不变。国内厂家试剂种类繁多，相对于全自动生化仪大多为非配套试剂。厂家通过实验，为用户提供了各类全自动生化仪的参数。根据实验室管理办法的要求，实验室对所有分析项目的仪器和试剂均应进行性能验证及方法学评价后，方可应用于日常工作，特别是改变了厂家的参数后。如果在仪器允许的一定范围内调低样品用量将会大大降低试剂用量。因为反应总体积在120～400ul左右，有很大降低试剂用量的空间。我们对同型半胱氨酸（HCY）进行降低1/4试剂用量的试验，评估降低试剂用量后准确度和精密度以及敏感度、线性范围。与改变试剂用量前的分析性能进行比较，判断是否存在性能的差异和改变。
1.材料与方法
1.1研究对象
本实验室已经开展的同型半胱氨酸检测。在厂家提供的分析参数基础上降低1/4吸样量和试剂用量。把厂家样品吸样量由13μl降为9.8μl；R1由240μl降为180μl；R2由65μl降为49μl.。
1.2仪器与试剂
全自动生化仪AU680（美国 BECKMAN COULTER 公司），HCY试剂为北京利德曼生物有限公司，批号：309171I；校准品为厂家提供，浓度值为9.8μmol/L和33.8μmol/L，批号均为：309171G，采用两点定标。HCY质控品浓度为30μmol/L,由厂家提供，批号：309171Q。
1.3 标本采集
无抗凝剂真空负压管采集患者清晨空腹血3毫升，室温放置0.5小时，3000转/min离心5分钟。
1.4 统计学方法
使用SPSS 16.0。与原试剂用量性能比较采用t检验，比较P值，P＜0.05为差异有显著性，P＜0.01为差异非常显著。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
2.实验与结果
2.1 精密度试验
按照CLSI EP5-A2分别用蒸馏水配制浓度为2、15、30mmol/L的HCY溶液分装40支[1]，批内当天检测，批间冰冻（-20℃）保存。选取当天住院部患者HCY结果与2、15、30相近者血清，3～5管混合，当天测试20次，其余冰冻（-20℃）保存于40支冰冻管中。与降低试剂用量之前批内CV比较。
2.2 灵敏度检测
依照CLSI EP17-A文件进行[2]。用蒸馏水分别配制浓度为1.0、1.3、1.6、1.9的同型半胱氨酸溶液0.5毫升，分装并冷冻（-20℃）待测；同时，取病人混合标本，同型半胱氨酸浓度大约为20左右，用生理盐水稀释成不同浓度的低值标本，每管0.5毫升冰冻待测。测定方式：连续5天，每个标本重复4次，汇总统计监测结果。分别计算各个浓度的CV、相对偏倚(RB)及总误差。公式为RB=(重复测定的平均值—理论值)/理论值。总误差TE=RB的绝对值+2*CV。以厂家试剂盒说明允许的标准为参照，根据检测结果统计分析，同型半胱氨酸溶液LoQ=1.5,血标本为1.6。与厂家试验基本一致。
2.3 线性范围
根据CLSI EP6-A标准步骤[3]，以浓度为40mm0l/L的标准品为基础，按比例配制浓度分别为1.5、3、6、12、16、20、24、28、32、36、40mmol/L范围在1～40的标本11个，按浓度高低编为1～11号，分别按1～11、11～1、1～11顺序测定三次，取均值。然后以比例系数为横坐标、浓度为纵坐标作图，绘制回归曲线。
运用统计软件计算回归方程为Y=10.46X－2.01。结合LoQ试验，本试剂盒线性范围为1.9～40mmol/L。
2.4 回收试验
用同型半胱氨酸浓度为40mmol/L的质控品按体积比1：4、1:8、1:10比例加入到已知测定值的三份同一患者血清中，测定后计算回收率分别为94%、89%、88%。
3.讨论
目前国内全自动生化仪还是以进口为主，除罗氏为封闭试剂外，其他基本都是开放试剂。由于仪器与试剂的不配套，所以一定要进行性能评价。厂家为了确保质量和经济利益，往往将试剂用量调到仪器设置的上限附近，虽保证了质量，但是也造成了一定的浪费。在仪器允许的范围内，降低样品和试剂使用量，有利于节约成本。对结果影响必须通过较严格认证[4]，以确保改变用量后的检测性能和厂家说明书中基本一致，并且要保证室内质控在控[5]。本科实验室在按比例调低了同型半胱氨酸测试样品与试剂的进行了精密度等一系列试验，均与降低试剂用量之前及厂家实验结果无显著差异。而且，降低试剂用量可以减少试剂对反应杯的污染，不仅节约了试剂还可延长比色杯寿命[6]。可以用在其他价格昂贵或污染较大的项目上，例如肌酐、镁测定，但都需要实验室进一步验证[7]。
检验质量是第一位的。实验室各项检测包括生化等项目参数改变后，要根据ISO15189及实验室管理办法的要求，严格验证误差的大小是否在可接受范围内[8]。和节约试剂相比，检验质量更加重要。所以，不要轻易改变试剂厂家规定用量；如果改变，需要严格执行验证的各项试验，通过认真试验确保误差在可接受范围，从而确保检验质量。
【参考文献】
[1] CLSI EP5-A2 Evaluation of precision performance of qnantitative measurement methods;approved guideline-second edition[S].Clinical and Laboratory Standards Institute,2004.
[2] CLSI EP17-A. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation [S].Clinical and Laboratory Standards Institute,2004.
[3] CLSI EP6-A. Evaluation of precision performance of qnantitative measurement methods;approved guideline-second edition[S].Clinical and Laboratory Standards Institute,2003.
[4]冯仁丰.定量检测系统分析性能精密度.临床实验室，2013,7（7）83.
[5]高宁.检验医学与临床2015年23期3492-3493,3496页.
[6]王霞.黑龙江医药2015年02期286-288页.
[7]石亚玲，姚细安，黄继德.医药前沿2015年11期77-78页.
[8]钱士匀.检验医学高级教程 485-489.
论文作者:王志,刘水桂
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第26期
论文发表时间:2016/9/12
标签：试剂论文; 用量论文; 半胱氨酸论文; 浓度论文; 厂家论文; 性能论文; 精密度论文; 《医药前沿》2016年9月第26期论文;