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【摘要】目的：分析研讨姜黄素对人眼Tonon氏囊成纤维细胞增殖和凋亡的影响，为临床治疗青光眼等疾病探索新方向。方法：用姜黄素0ug/ml-80ug/ml体外所培养出得人眼Tenon囊成纤维细胞，培养时姜黄素浓度不同，观察时间为24h-96h，分析其对人眼Tenon氏囊成纤维细胞所造成的影响。结果：姜黄素浓度为10ug/ml或以上时，对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖有抑制作用（P<0.05），且因时间延长和药物浓度增高，抑制强度也有所加大（P<0.05）。结论：体外培养人眼Tenon氏囊成纤维细胞增殖会一定程度上受姜黄素的影响。
【关键字】人眼Tenon氏囊成纤维细胞；姜黄素；凋亡；增殖；体外培养
各眼科工作人员为提升手术治疗成功率，一直坚持寻找更为有效、安全抑制纤维细胞增殖的方式。此研究采用论著方式，意在解决以上问题。具体报告如下：
1. 材料和方法
1.1 主要设备和材料
试剂：由SIGMA公司提供姜黄素、博士德公司提供单克隆抗体vimentin和显色试剂DAB、Dojindo公司提供CCK-8。
主要设备：酶标仪（Wellscan MK3）、光学倒置显微镜（MPS-30）、德国Zeiss手术显微镜、CO2培养箱（Heraeus BB16）。
1.2方法
培养、鉴定人眼Tenon囊成纤维细胞：眼球结膜下Tenon囊标本为我院青光眼手术所切除的病理组织，原代接用组织块培养法，实验用3-6代细胞[1]。细胞培养方法为常规方法，用组织学、活体显微镜观察细胞，并拍照记录。HE染色用盖玻片培养方式进行，Vimentin染色方式做细胞鉴定处理。
实验方法：用胎牛血清10%高糖DMEM和Tenon囊成纤维细胞备制细胞悬液（250个/ml），细胞悬液加入到各孔，100ul/孔，接种在96孔培养板，共4块，培养时间为24h。细胞长出单层时，分别加入浓度不同的姜黄素（10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml），并设对照（仅加入培养液）。再把胎牛血清10%DMEM高糖100ul和10ul培养基CCK8加入到培养箱中[2-3]，培养时间为3h。用酶标仪测定450nm各孔OD指数。重复三次。
1.3 指标判定
（对照A值-实验A值）/对照A值×100%。
1.4统计学方法
此研究中研究所得的计量资料用统计学软件（SPSS13.0版本）分析，表示方式为（t，±s），其抑制时间和浓度关系用单因素方差方式进行处理。
2.结果
2.1 生物特性鉴定和体外培养
用显微镜可观察到细胞生物特性和形态特征，原代培养组织块在7天后，细胞会发生游离，胞体透亮、狭长，胞浆形状为椭圆形、核圆形，胞膜清晰，梭形，且繁殖速度较快，细胞增殖融合时间大约为2周-3周，细胞靠近、边长，走行为旋涡状或放射状。
2.2 对人眼Tenon氏囊成纤维细胞增殖影响
姜黄素浓度为10ug/ml或以上时，对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖有抑制作用（P<0.05），且因时间延长和药物浓度增高，抑制强度也有所加大（P<0.05）。详见下表2：
3.讨论
全球范围中，临床眼科疾病中占比第二位的则为青光眼疾病，此疾病存在不可逆性，而临床治疗青光眼疾病的一个重要方式则为滤过手术，将小梁组织切除，进而建立滤过通路，让房水可外流，将眼压降低，残存视力功能得到保存。但此手术方式失败率较高，大约可达到10-30%，追究其失败原因主要为滤过口部位纤维细胞发生迁移、增殖，进而造成滤过通率发生纤维瘢痕化，堵塞通道，此也为青光眼疾病治疗和研究所面临的一个难题，手术过程中给予抗增殖类药物可提升手术成功率，如丝裂霉素药物，但此药物存在毒副作用，存在使用局限性。姜黄属于姜科姜黄属草本植物之一[4]，疗效具有多种性。姜黄素对PKCε表达禅产生抑制作用，诱导SLF出现凋亡。有研究也将大鼠作为研讨对象，结果表明姜黄素可抑制MLF，有时间和剂量依赖性[5]。姜黄素均可抑制各组织中纤维细胞。但目前对姜黄素对人眼Tenon囊成纤维细胞所造成的抑制作用，仍然不明确的分子机制。部分学者认为此可能和细胞生长因子和信号传导存在关系，如COX-2、iNOS活性被抑制，NF-kappaB下调有关。综上，体外培养人眼Tenon氏囊成纤维细胞增殖会一定程度上受姜黄素的影响。
【参考文献】
[1]殷秋菊,吴一湘,于莉等.姜黄素对人胚胎干细胞向视网膜色素上皮样细胞定向诱导效率的促进作用[J].中华实验眼科杂志,2015,33(9):774-780.
[2]胡艳红,黄秀榕,祁明信等.姜黄素抑制人晶状体上皮细胞增生过程中蛋白激酶通路的信号转导变化[J].中华实验眼科杂志,2015,33(6):507-511.
[3]裴涌,郝旭红,孙晓楠等.姜黄素在缺氧致视网膜神经节细胞氧化应激损伤中的作用及机制[J].中国医科大学学报,2016,45(3):227-229.
[4] 周欣, 李章万, 王道平,等. 姜科姜黄属植物有效成分的研究[J]. 分析测试学报, 2004, 23(6):53-56.
[5] 高蔚, ZHANG De-ping, 华云峰. 姜黄素对大鼠肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2008, 24(14):2393-2396.
论文作者:梁兵 杨国华
论文发表刊物:《中国医学人文》2017年第4期
论文发表时间:2017/7/18
标签：姜黄论文; 细胞论文; 纤维论文; 抑制论文; 对人论文; 浓度论文; 青光眼论文; 《中国医学人文》2017年第4期论文;