磁珠DNA自动提取系统在法医检验中的应用研究
刘桂涛 徐兴驰
满洲里市公安局刑事科学技术室，内蒙古 满洲里 021400
摘 要 ：目的 ：探究在法医检验中选择磁珠DNA 自动提取系统后的应用效果。方法 ：数字表随机选择样本共计180例，均为已饮用的饮料瓶。其中60例为有机组，60例为Chelex 组，另有60例为磁珠组，根据方法分别选择材料完成DNA 提纯。探究提纯后的DNA 提取液的信息，并进行对比讨论。结果 ：在提取效果显著占比、提取量和紫外OD 值260nm /280nm 上对比，磁珠组均优于另外两组，差异显著(P <0.05)。结论 ：磁珠DNA 自动提纯系统辅助法医完成DNA 检测工作时，提纯效果较好，DNA 数量较多，临床值得推广。
关键词 ：磁珠法；DNA 自动提取系统；法医检验；应用效果
近年来在犯罪现场，根据嫌疑人遗留的物品进行DNA的提纯并检测是非常关键的，这对锁定嫌疑人信息是至关重要的[1]。一般来说，嫌疑人在接触现场的物品后，皮肤、粘膜会有脱落的细胞，会遗留在物品上，进行提取，检测获得结果后，能够作为生物证物辅助案件侦破[2]。当前法医使用的DNA检验材料提纯方法包括了：有机溶剂提取法、磁珠法、Chelex法以及超敏DNA提取法等。就此笔者对不同方法展开研究，资料如下：
一、资料与方法
(一)一般资料
数字表随机选择样本共计180例，均为已饮用的饮料瓶。其中60例为有机组，60例为Chelex组，另有60例为磁珠组，根据方法分别选择材料完成DNA提纯。探究提纯后的DNA提取液的信息，并进行对比讨论。本次分析的样本均为同一环境下处理，放置时间一致。
(二)方法
所有检验材料均进行脱落细胞提取。饮料瓶和烟蒂选择医用棉签，行干湿两步进行提取，衣物则是选择脱落细胞粘取器完成提取。根据分组，分别完成提取和纯化。
Chelex组：脱落细胞置无菌水浸泡30min后，13000r/min离心8min，取100μL沉淀中加入3μL的蛋白酶K，水浴30min，温度56℃，后煮沸8min再次离心5min，上清液保存在冷藏箱中。
磁珠组：根据试剂盒说明说完成纯化，以磁珠DNA自动提取系统完成提取，均参考说明书完成。
有机组：脱落细胞加入无菌水、3μL蛋白酶K，温度56℃下水浴24h，混合液置离心机离心5min，操作2次后，加入50%平衡酚和50%的氯仿的混合液，重复操作两次后，加入约3倍的-20℃的无水乙醇，冷冻箱中静置30min，以75%乙醇洗涤两次离心两次，56℃烘干沉淀，加入50μL的无菌水溶解后置冷藏箱备用。
对三组提取效果、DNA提取量、紫外检测结果进行统计。提取效果上，以≥9个基因座为效果显著。
本次研究的指标均以芝加哥SPSS22.0专业医学数据软件展开计算，计数数据从%中分析，以x2检测；计量数据从(标准值±方差)分析，行T检测。若P<0.05则数据有统计学意义。
提取效果显著占比：Chelex组占比23%(14/60)，有机组占比17%(10/60)，磁珠组占比30%(18/60)，磁珠组优于另外两组，分别和另外两组行统计学分析，差异显著
(三)指标观察[3]
2015年下半年，煤炭行业形势更加严峻，煤炭企业经济运行面临的压力进一步增大。在这种条件下，对风选项目的推进工作更加迫切，进一步优化项目方案并缩减项目总投资成为风选项目实施关键所在。
(四)统计学方法
DNA均选择美国Perkin-Elmer公司生产的9700扩增仪完成扩增，再行电泳检测，分析实际效果。在紫外分光光度仪中以260nm、280nm下进行波长OD值检测。
提取量：Chelex组(38.7±5.91)，有机组(21.7±8.3)，磁珠组(42.1±8.6)，磁珠组优于另外两组，差异显著(T1=5.612，T2=6.511，P=0.018，0.031)。
二、结果
（一）经济平稳增长。2005年以来德国经济逐渐向好，其中，2006年经济增速达3.7%，为自1991年以来最高水平。金融危机后德国经济率先复苏，2010年经济增速达4.08%，成为欧元区经济“领头羊”。2012年欧债危机爆发后，德国经济增速短时下滑，但仍高于欧盟其他发达国家。2017年德国GDP增长2.2%，创2011年以来最高水平。
首先打开Shadow 数据属性表，选中值为 1的栅格，再选择 [转换工具][由栅格转出][栅格转面]工具，打开工具对话框，完成矢量转换，如图11。
紫外OD值260nm/280nm：Chelex组1.252，有机组1.102，磁珠组1.382，磁珠组优于另外两组，差异显著(T1=，6.812，T2=7.717，P=0.008，0.003)。
三、讨论
恶劣的刑事案件中，嫌疑人一般反侦察意识较高，会将自己留下的明显生物标记清除干净，这需要法医根据不同DNA提纯将现场遗留的，与罪犯有接触的检验材料进行提取并纯化，为现场案件的破获提供重要的、关键的证物。在这样的背景下，如何从微量的检验材料中获得充足的证据完成检验，锁定DNA信息对法医而言的非常重要的。本次重点对三种方法进行研究[4]。
案发现场一般会有不同类型的检验材料，常见的包括：手套、门把手、水杯或瓶子、脚印等等，材料的质地不同，载有犯罪嫌疑人的脱落细胞数量会有一定的差异。当前法医对生物接触类的证物研究资料较为不完善，处理方法不同对检验结果也会有直接的影响。本次选择同一环境下的不同材质进行研究，研究结果发现：选择Chelex-100的操作方法完成检验，成本低、耗时短、效率高、灵敏度低，且污染严重的材料不适合这种研究方法。有机法相对而言更适用于腐烂程度较大的检验材料，再结合Chelex-100的操作方法可获得较好的提取效果。主要是酚和氯仿对变性蛋白质有溶解作用，加入蛋白酶K后，离心，最后扩增效果较好。但有机法中使用的有机溶剂毒性明显，职业危害较大，且溶剂完全清洗干净较为困难，后续提纯效果受到一定影响。磁珠法相对以上两种方法，最显著的特点是灵敏度较好，本次研究还发现，其在提取效果上，大于9的基因数明显更多，可获得的提取量更多，且行紫外分光光度检测时OD值也非常高，这主要是因为：裂解液能够将脱落的细胞破裂，通过磁珠将DNA分子吸附在表面，再进行磁场化排除蛋白质，回收磁珠，表面DNA进行洗涤后提纯，在量和效果上就表现得更为显著。
许多民族都有自己的英雄史诗，但大多数的英雄都是对单个英雄人物的成长或事迹进行叙述，从而塑造单个的英雄形象，《雷万春打虎记》则通过描写雷万春为中心，通过多线索交错推进的艺术表现手法，在塑造雷万春英雄形象的同时，还描摹出了钟景祺、雷海青、蓝济云、雷天然等一批在国家危难之际涌现的畲族英雄群像。在马克思、恩格斯对史诗的论述中,他们认为史诗是民族精神的结晶,是人类在特定时代创造的高不可及的艺术范本,是特定历史时代的产物。[4]英雄史诗是一定历史时代的人们生活的全景反映，而《雷万春打虎记》则是对唐代畲家英雄儿女的全景式传奇反映。
综上，磁珠DNA自动提纯系统辅助法医完成DNA检测工作时，提纯效果较好，DNA数量较多，临床值得推广。
参考文献
[1] 董连勇，杨柳，魏伟.不同接触DNA检材提取纯化方法在法医学中的应用价值比较[J].基因组学与应用生物学，2016，35(10)：2592-2596.
[2] 李林，路俊雷，李雪彤，etal.一种基于自动化工作站的疑难微量法医物证DNA提取试剂盒及其方法，2016，34(3)：6.
[3] 杨电，陈俊璋，李越.擦拭直扩法和粘取磁珠法检测衣物脱落细胞DNA的比较[J].法医学杂志，2017，78(5)：538-539.
[4] 韩海军，伊海，杨敏，etal.磁珠法自动化纯化现场检材DNA方法研究[J].中国法医学杂志，2017，32(1)：9-12.
中图分类号 ：D
文献标识码： A
文章编号： 2095-4379-(2019)04-0168-02
作者简介 ：刘桂涛(1981-)，男，汉族，本科，满洲里市公安局刑事科学技术室，主检法医师，研究方向：法医物证；徐兴驰(1993-)，男，汉族，本科，满洲里市公安局刑事科学技术室，法医师，研究方向：法医物证检验鉴定。
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