湖南省长沙市第一医院 检验科 410000
【摘 要】目的：分析在肺结核患者肺泡灌洗液诊断中采用不同检测办法对结核杆菌的诊断意义。方法：回顾性分析我院2017年8月至2018年7月就诊的32例肺结核患者肺泡灌洗液资料，确诊26例，纳入实验组；另同期选取26例非肺结核患者纳入对照组，2组研究对象均实施肺泡灌洗液涂片法、聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术，对肺结核杆菌进行同步检测。结果：以上3种检测方法对实验组结核杆菌的诊断阳性率依次为46.15%（12/26）、76.92%（20/26）、96.15%（25/26），对比肺泡灌洗液涂片法诊断结核杆菌阳性率，其他2种检测方法均明显更高，对比聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术诊断结核杆菌阳性率，差异均明显（P＜0.05）。结论：膜-反向斑点杂交技术可准确诊断结核杆菌，临床优势诸多，可快速、简单的进行肺结核杆菌基因型分辨，临床意义重大。
【关键词】肺结核；肺泡灌洗液；不同检测办法；结核杆菌
肺结核在临床上常见，属于慢性传染病，诱病原因是结核杆菌感染，发病率、耐药率均逐年增加，对于多重耐药性结核杆菌来说，可对患者健康造成严重损害并增加社会负担、医疗费用[1]。本组探究中，选取了52例研究对象，分析了在肺结核患者肺泡灌洗液诊断中采用不同检测办法对结核杆菌的诊断意义。
1 资料与方法
1.1资料
对我院2017年8月至2018年7月就诊的32例肺结核患者肺泡灌洗液资料进行回顾性分析，确诊26例（实验组），男女比例14：12，年龄35岁至59岁，中位年龄48.6岁；另同期选取26例非肺结核患者纳入对照组，包括支气管扩张患者及肺炎患者，例数分别是14：12，男女比例13：13，年龄29岁至60岁，中位年龄48.0岁。所有研究对象均知情同意。
1.2方法
均利用肺泡灌洗液涂片法、聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术对肺结核杆菌进行同步检测。
根据病变部位为研究对象选择灌洗肺段并将OlympusBF-260型电子支气管镜顶端置于患者肺段支气管开口位置，经活检孔注入利多卡因（2%），剂量为2ml，为研究对象提供肺段局麻处理，然后，注入5ml至10ml温度在37℃的生理盐水，为研究对象实施2次至3次的肺部重复灌洗[2]，收集15ml左右肺泡灌洗液。
采集标本后立即送检实施肺泡灌洗液涂片法检测，实施改良齐-尼氏抗酸染色处理，然后利用显微镜进行细致观察，在100个视野中，若发现3个至9个结核杆菌，判定阳性。
抽取0.5ml灌洗液混合0.5ul氢氧化钠溶液进行聚合酶链反应，常温下，静止放置40min后实施离心处理，离心处理速度及时间分别是10000r/min、5min，去除上清液，利用生理盐水实施清洗处理并离心处理5min，将上清液去除后添加50ul提取液进行振荡处理，采用100℃对其进行10min煮沸处理，在4℃环境中将其离心处理5min，取模板进行扩增处理。加15ul反应液混合物及0.2ulTaq酶并在封顶时使用20ul石蜡油[3]，制备TB-DNA模板时加入5ul上清液，扩增速度是10000r/min，扩增温度分别是55℃、77℃及90℃，分别扩增30s、30s、60s，循环次数为35次，电泳时取20ml聚合酶链反应扩增液，若见橙黄色荧光带，判定阳性。
膜-反向斑点杂交技术：将氢氧化钠稀释灌洗液进行离心处理，浓度、体积比、离心处理速度、离心处理时间分别是4%、1：4/15000r/min、5min，将悬浮物留取并加入生理盐水（1ml），充分混匀，洗涤，使用20g/L蛋白酶K50ul消化，在沸水浴中灭活蛋白酶K。在样本中加入液苯酚、异戊醇、氯仿并采用15000r/min离心速度进行5min离心处理，取上清液、裂解液[4]，在室温下进行混合，时间为1h，加入裂解液、无水乙醇并采用12000r/min速度进行离心10min处理，将上清液去除后加入20ul灭菌注射用水，实施扩增DNA模板处理。
1.3统计学办法
本组使用SPSS19.0软件，计量资料行t检验（均数±标准差），计数资料行X2检验（率），P＜0.05，统计学意义存在。
2 结果
肺泡灌洗液涂片法、聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术检测方法对实验组结核杆菌的诊断阳性率依次为46.15%（12/26）、76.92%（20/26）、96.15%（25/26），对比肺泡灌洗液涂片法诊断结核杆菌阳性率，其他2种检测方法均明显更高，X2=5.2000，15.8342。对比聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术诊断结核杆菌阳性率，差异均明显（P＜0.05），X2=4.1270。分析对照组数据，发现肺泡灌洗液涂片法诊断结核杆菌阳性率存在误诊。
表1 2组诊断结核杆菌阳性率对比
3 讨论
目前，临床上主要利用细菌培养来有效诊断肺结核疾病，属于金标准，但是，临床劣势包括灵敏性低、周期较长及生物安全性要求高等[5]，临床应用受到了限制，在实施肺泡灌洗液抗酸染色检测结核杆菌操作中，要求标本浓度高，因此，临床上经过了探讨和研究，提出了肺泡灌洗液涂片法、聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术，有利于结核杆菌诊断，有助于肺结核疾病的有效防治[6]。聚合酶链反应具有高特异度及灵敏度，但是，较为容易出现污染现象。膜-反向斑点杂交技术可有机结合基因扩增及分子杂交，可对病原微生物进行准确、快速诊断。
本组研究结果：3种检测方法对实验组结核杆菌的诊断阳性率依次为46.15%（12/26）、76.92%（20/26）、96.15%（25/26）。
综上，利用膜-反向斑点杂交技术可准确诊断结核杆菌，可快速、简单的进行肺结核杆菌基因型分辨且临床意义重大。后续探讨中，需对肺泡灌洗液涂片法、聚合酶链反应、膜-反向斑点杂交技术检测方法灵敏度、特异度、符合率及阴性预测值、阳性预测值等实施POC曲线分析，增加本组研究临床指导意义。
参考文献：
[1]蒋莎莉，梁伟军，朱德茂，等. 不同检测方法对肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌的诊断价值[J]. 中南大学学报（医学版)，2017，42（6)：647-651.
[2]杨睿. 3种不同支气管肺泡灌洗液结核杆菌检测方法在涂阴肺结核诊断中的对比分析[J]. 中国现代药物应用，2016（6)：35-36.
[3]蒋莎莉，朱德茂，罗海军，等. 肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌检测的方法学评价[J]. 广东医学，2017，38（1)：102-104.
[4]唐怡敏，张培泽，叶涛生，等. 三种方法检测痰液和肺泡灌洗液中结核分枝杆菌阳性率的比较[J]. 结核病与肺部健康杂志，2016，5（3)：237-239.
[5]牛波，刘建华，曹丽洁，等. 三种方法检测儿童肺泡灌洗液中结核分枝杆菌结果分析[J]. 皖南医学院学报，2016（1)：41-43.
[6]陈贤豪，杨守峰，张抱一，等. 灌洗液不同检测方法在支气管结核诊断中的价值[J]. 实用医学杂志，2017，33（1)：124-126.
论文作者:王斌
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2018年5期
论文发表时间:2018/10/8
标签：肺泡论文; 结核杆菌论文; 肺结核论文; 灌洗论文; 涂片论文; 斑点论文; 患者论文; 《中国结合医学杂志》2018年5期论文;