黄群华[1]1999年在《血小板源生长因子及其受体在低氧性肺血管平滑肌细胞增殖中的调节作用及其分子机制探讨》文中认为近年来人们逐渐认识到肺血管构型重建是慢性低氧性肺动脉高压的重要发病学环节。肺血管构型重建包括肺血管壁细胞的增生、肥大，细胞外间质成分(肢原，弹力蛋白)堆积，部分非肌性化小动脉变成肌性化小动脉。这些变化使肺动脉高压得以维持。通常认为肺血管构型重建是继发于肺动脉高压稍后期的改变。其间有无生长因子参与平滑肌细胞增殖的调控作用?血小板源生长因子(PDGF)有否参与?目前，此方面的细胞分子生物学机制还了解不多。 PDGF是间质源性细胞的促有丝分裂因子，刺激细胞外基质成分的产生，并促进血管收缩。它不仅可由血小板产生，而且可由血管内皮、巨噬细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞等多种类型细胞产生。PDGF在低氧性肺动脉高压中的作用的研究开展不多。本研究运用整体、细胞、超微结构及分子水平相结合的方法，系统地观察了在低氧时，PDGF对肺动脉血管平滑肌细胞(PASMC)增殖的调控作用。肝素是一种细胞生长抑制剂，作用机理一直不清楚，本研究通过实验明确肝素是否可通过抑制PDGF的作用而奏效，并有可能为低氧性肺动脉高压的防治开辟一新途径。 实验分三部分： 1．低氧、PDGF及其受体的基因表达与PASMC增殖作用三者相互关系的探讨 (1)原位杂交检测PDGF-A，B链和PDGF-α、β受体的基因表达 PDGF-A链mRNA在低氧3d时达峰值，B链mRNA则随低氧时间的延长呈升高的趋势直至观察的第14d。低氧3d时，PDGF-α受体mRNA一度下降，至低氧7d时骤升达峰值，β受体mRNA的变化趋势同B链，随低氧时间的延长，呈逐渐升高的趋势。 肝素对低氧3d的PDGF-A链和低氧7，14d的B链以及低氧7，14dPDGF-α、β受体mRNA的表达量增多有明显的缓解作用。 (2)低氧对PASMC产生PDGF的生物活性和PDGF受体蛋白表达的影响 收集PASMC的条件培养基，进行PDGF的生物学活性的检测。低氧12h组的PASMC产生的PDGF活性显著高于常氧对照组，是对照组的1.38倍。低氧24h组的PDGF活性虽高于常氧对照组，但低于低氧12h组。
李锦春[2]2006年在《间歇光照、呋喃苯胺酸、维生素C对肉鸡PHS的预防及其机理研究》文中认为尽管国内外已对肉鸡肺动脉高压综合征(pulmonary hypertension syndrome，PHS)又称肉鸡腹水综合征(ascites)进行了多年研究，但它仍然是使世界养禽业遭受重大经济损失的一个疾病。全世界每年约有4％的肉鸡死于PHS，造成高达10亿美元的损失。由于肉鸡PHS是一个多因性疾病，药物防治有局限性并且存在残留的问题。早期限饲可以降低PHS发病率，但会引起应激。控制光照能降低肉鸡PHS发病率和应激，并且方便、省电，但公认效果显著的1小时明：3小时暗的措施在国内难以执行和推广。寻求一种易行的控光措施更具有实际意义。由于对控制光照防治肉鸡PHS的机理尚不完全明了，方案的选择存在很大盲目性，因此，首先要清楚控制光照防治PHS的作用机制。关于控制光照防治肉鸡PHS的报道主要是观察对生产性能和PHS发病率的影响，而对其机理仅从缺氧状况、红细胞比容、血液中甲状腺素、生长激素和糖皮质激素方面进行了研究。肺血管重构导致肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)持续发展并难以逆转，是哺乳动物PH的重要病理基础。PHS肉鸡也发生了肺动脉重构，但是其在肉鸡PHS的发生过程中是否占据与哺乳动物肺血管重构同等重要的地位，机制如何?控制光照降低PHS发病率的作用机理是否与肺血管形态改变有关，尚不清楚。因此，本文从氧自由基、血小板源生长因子-β受体(PDGF-βR)、蛋白激酶C-α(PKCα)及增殖细胞核抗原(PCNA)等变化入手，在体内和体外两个层次上探讨间歇光照对肉鸡肺血管重构的影响及其分子生物学机制，为指导生产实践提供理论依据。试验Ⅰ间歇光照对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡PHS的防治效果及其对肉鸡肺血管重构的影响。320羽肉鸡随机分为4组：常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。记录PHS发病数、体重和耗料量，测定肺动脉的管壁面积与血管总面积之比(WA／TA)、平均中膜厚度(mMTPA)等指标。结果环境低温使PHS发病率升高，反映血管重构指标的WA／TA和mMTPA值也显著升高，而间歇光照能够有效地降低寒冷诱发的PHS发病率和上述各项值。控制光照期间间歇光照组肉鸡体重低于低温对照组，但最终体重和料重比与之无显著差异。在肉鸡生长早期实施间歇光照制度能够有效降低低温诱发的PHS发病率，抑制肺小动脉重构可能是其重要机理之一。试验Ⅱ间歇光照对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响。观察控制光照对低温诱导的肉鸡PHS发病率及体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响。320羽肉鸡随机分为四个组。常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。低温显著升高了PHS发病率、右心全心比(RV／TV)、肺厚壁末稍血管百分率(TWPV％)和丙二醛(MDA)，而使血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性降低。控制光照使SOD活性升高而显著降低了PHS发病率、RV／TV、TWPV％和MDA。减轻体内脂质过氧化作用，提高机体抗氧化酶的活性和减轻以非肌型肺动脉肌型化为特征肺血管重构，可能是间歇光照降低肉鸡PHS发病率的部分机制。试验Ⅲ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PKCα表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉蛋白激酶Cα(PKCα)表达的影响及其与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组。常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。测定RV／TV、MDA、SOD、WA／TA、mMTPA、红细胞压积(PCV)；采用免疫组化方法标记肺动脉PKCα，以OD值代表PKCα的表达。结果环境低温使肉鸡PHS发病率升高，RV／TV、WA／TA、mMTPA、MDA值和肺细小动脉PKCα的OD值显著升高，而间歇光照能够有效地降低寒冷诱发的PHS发病率和上述指标。肺小动脉PKCα的表达从23日龄起与mMTPA和WA／TA呈正相关，并且具有显著性。寒冷诱使肉鸡肺小动脉PKCα表达的上调可能参与了肺血管重构的形成过程，间歇光照抑制肺血管重构可能与PKCα下调有关。试验Ⅳ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PDGF-β受体表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉PDGF-β受体表达的影响，及其与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组，常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。测定PCV、WA／TA和mMTPA等指标；采用免疫组化方法标记肺动脉PDGF-β受体，以OD值代表PDGF-β受体的表达。结果环境低温使PDGF-β受体表达上调，WA／TA和mMTPA值也显著升高，而间歇光照明显抑制血管重构，并且使肺动脉PDGF-D受体的OD值降低。PDGF-β受体的表达从23日龄开始与mMTPA和WA／TA呈正相关，并且具有显著性。PDGF-β受体表达上调可能与低温所致肺小动脉重构有密切关系，而间歇光照减轻肉鸡肺血管重构可能与抑制PDGF-β受体表达有关。试验Ⅴ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PCNA表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，并探讨PCNA与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组，常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9 d～30 d分别在夜间停止光照0、3、5 h，以后恢复连续光照。测定WA／TA和mMTPA等指标；采用免疫组化方法标记PCNA，图像分析软件分别计数每条血管中膜PCNA阳性细胞数和细胞总数，求出百分数即为增殖指数(PI)。结果环境低温使肺动脉的WA／TA和mMTPA值和PCNA值显著升高，而间歇光照能够有效地减轻寒冷诱发的肺动脉重构和PCNA值。在肉鸡快速生长的早期采用间歇光照能够抑制寒冷所致的肺血管重构可能与抑制肺动脉平滑肌细胞增殖有关。试验Ⅵ添加呋喃苯胺酸对低温诱导的肉鸡肺动脉高压综合征的发病率及肺血管重构的影响。观察在低温环境下呋喃苯胺酸对肉鸡PHS的防治效果及其对肺血管重构的影响。240羽肉鸡于14 d时随机分为A、B和C三组分置于两个鸡舍。A组按常规饲养，B组和C组采取低温诱发PHS，并从30 d至44 d B组不添加药物而C组于日粮中添加0.015％的呋喃苯胺酸。记录每周PHS发病数、体重。定期测定RV／TV、PCV、WA／TA和mMTPA等各项值。结果饲料中添加呋喃苯胺酸降低了寒冷诱发的PHS发病率。B组RV／TV、WA／TA和mMTPA值显著升高，而C组使之降低，并在44 d差异显著；C组体重显著低于B组。降低肺动脉压，抑制以肺动脉壁肥厚为特征的血管重构可能是呋喃苯胺酸有效降低低温所致PHS发病率的部分机制。试验Ⅶ维生素C对常温下肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响。观察在常温环境下维生素C对肉鸡PHS的防治效果及其对肺血管重构的影响。150羽肉鸡于21 d时随机分为C、T1和T2组，按常规饲养，C组不添加药物，T1组和T2组分别从21 d至37 d在饲料中添加维生素C 200 mg／kg和500 mg／kg。统计PHS的死亡数并定期称重。测定RV／TV、PCV、MDA、SOD、WA／TA和mMTPA等指标。结果与对照组相比，T1组PHS死亡率和RV／TV值显著降低，80-200微米肺动脉WA／TA和mMTPA值显著降低，PCV和MDA值极显著降低。T2组PHS死亡率与对照组相同，PCV值显著降低，50-80微米肺动脉的WA／TA和mMTPA值极显著高于对照组，MDA水平极显著高于对照组而SOD值显著降低。降低PCV值、清除体内过多的氧自由基及减轻肺血管重构可能是低剂量维生素C有效防治PHS的部分机制，而使氧自由基产生增多，导致肺血管重构可能是高剂量VC防治PHS失败的部分原因试验Ⅷ蛋白激酶C抑制剂Calphostin C对PDGF-BB诱导的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响．探讨蛋白激酶C抑制剂Calphostin C对血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导的肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。肉鸡肺动脉平滑肌细胞体外培养，用PDGF-BB刺激PASMC，采用细胞记数法和流式细胞仪测定Calphostin C对PASMC增殖的影响．结果Calphostin C显著地抑制PDGF-BB诱使的PASMC增殖，使细胞生长停滞于G_0／G_1期。蛋白激酶C抑制剂Calphostin C抑制了PASMC增殖，提示PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞增殖与PKC信号传导通道有关，Calphostin C可能作为防治肺血管重构的一种药物。试验ⅨX／X0体系作用的肺动脉内皮细胞条件培养液对内鸡肺动脉平滑肌细胞的促增殖作用及褪黑激素对其的影响。观察黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(xanthine-xanthineoxidase，X-XO)条件培养液对肉鸡肺血管平滑肌细胞是否有促增殖作用，及褪黑激素能否抑制其增殖。肉鸡肺动脉平滑肌细胞与X／XO内皮细胞条件培养液共培养刺激PASMC，采用流式细胞仪测定X／XO条件培养液和褪黑激素对PASMC增殖的影响，并检测培养液中的丙二醛(MDA)含量。与正常内皮细胞条件培养基相比，X／XO条件培养基促使PASMC发生增殖，并从G_0／G_1期进入S和G_2／M期，其培养液中MDA含量显著高于对照组；当预先加入褪黑激素时，抑制了X／XO条件培养液的促平滑肌细胞增殖作用，G_0／G_1期细胞比例提高，而S期、G_2／M期细胞减少。褪黑激素组细胞培养液中MDA含量显著低于X／XO模型组。清除培养液中的氧自由基可能是褪黑激素抑制X／XO条件培养液诱导肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖的机制之一。
路政[3]2016年在《miR-17通过靶向mitofusin 2调控缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡》文中研究说明背景:肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种与肺血管痉挛、肺血管重塑及肺血栓形成导致的肺血管阻力增加紧密相关的异常血流动力学疾病,若未及时治疗,病情进行性发展可发生右心衰竭而死亡。其发病机制涉及细胞异常、分子介质和遗传因素等多个途径,肺血管内皮细胞功能受损、肺血管收缩反应增强和血管重建、炎症和免疫失调等参与形成,多种血管活性物质失衡促进其发生。低氧性肺动脉收缩(hypoxic pulmonary artery vasoconstriction,HPV)和低氧性肺血管重建(hypoxic pulmonary vascular remodeling,HPVR)是PAH的主要病理生理变化,特别是肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的增殖起了重要的作用,尽管PAH发病机制未完全明确,目前增殖与凋亡的失平衡(尤其是PASMCs)越来越受到重视,并成为研究的热点。微小RNA(micro RNA,miRNA)是在真核细胞中广泛存在的非编码、高度保守、单链、小分子RNA(长度约22个氨基酸),能够通过完全和(或)部分互补的原则结合靶基因m RNA的3’UTR区域碱基调控靶基因的表达,从而参与调控个体发育、分化、增殖及凋亡等生命活动。人类基因组中有300多个miRNA基因簇,miR-17家族又叫miR-106b家族,是由6个序列相似、结构相仿、种子序列相同(AAAGUGCU)、物种间高度保守的成熟体miRNA组成,许多研究表明其中miR-17家族由于参与哺乳动物心、肺、免疫系统等器官发育并与实体肿瘤的发生紧密相关而受到广泛关注。线粒体融合蛋白2(mitofusin2,Mfn2)是线粒体融合蛋白家族的成员,不仅是维持线粒体正常形态和发挥必要分子特征的重要元素,同时还具有调节细胞增殖、分化、凋亡和信号转导等功能的作用,研究发现Mfn2可以抑制PI3K/Akt信号通路,使线粒体外膜通透性增高,激活线粒体凋亡途径,促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells VSCMs)凋亡。Mfn2在心血管疾病中对VSCMs增殖发挥重要作用且被深入研究,那么其对低氧性肺动脉高压中PASMCs是否具有同样作用还不清楚。近年来有研究发现miR-17可通过PDLIM5或BMPR2等下调miR-17的表达来调控细胞的增殖或凋亡,参与肺动脉平滑肌细胞的调控,从而导致肺动脉高压的发生。然而miR-17在肺动脉高压疾病中参与的研究多是动物模型水平,miR-17及Mfn2在低氧诱导的动物肺动脉高压模型中发挥着重要作用,然而miR-17是否可以通过靶向调节Mfn2在人离体肺动脉平滑肌细胞模型等临床研究中发挥作用并未报道。因此,我们推测miR-17的表达下调可能通过靶向调节Mfn2的表达从而抑制PASMCs的增殖并延缓肺动脉高压的发生。目的该课题拟以肺动脉高压患者的肺组织标本和低氧诱导肺动脉平滑肌细胞为材料,模拟PAH的慢性缺氧过程,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)分别检测miR-17和Mfn2蛋白在肺动脉高压(PAH)患者肺组织及正常肺组织中的表达水平,通过双荧光素酶报告实验验证miR-17与靶基因的作用位点,探索miR-17及其靶基因对缺氧PASMCs的增殖、凋亡及相关蛋白的影响。方法1.为了模拟PAH的慢性缺氧过程,我们把PASMCs在低氧(即3%O2、5%CO2、92%氮气)的条件下培养48 h,然后收取细胞,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Blot技术检测正常和缺氧处理的PASMCs miR-17和Mfn2表达水平。2.在缺氧处理的PASMCs中,运用脂质体转染技术转染化学合成的anti-miR-17和anti-miR-NC,在低氧条件下培养48 h后收取细胞进行q RT-PCR实验检测miR-17表达水平,通过噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖活性,进行western blot实验检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell Nuclear Antigen,PCNA)的表达情况;进行流式细胞术检测肺动脉平滑肌细胞凋亡情况,并且检测凋亡相关蛋白Caspase-3的活性,研究miR-17表达抑制对肺动脉平滑肌细胞细胞增殖、凋亡的影响。3.在肺动脉平滑肌细胞转染miR-NC、miR-17 mimics、anti-miR-NC和anti-miR-17,48 h后收取细胞,荧光素酶报告基因实验验证miR-17和Mfn2m RNA3’UTR的结合情况,运用western blot检测miR-17 mimics、anti-miR-17对Mfn2蛋白表达的影响。为了进一步验证miR-17对低氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖、凋亡的调控机制,我们在肺动脉平滑肌细胞转染si Mfn2抑制内源性Mfn2蛋白的表达,观察si Mfn2对anti-miR-17增殖抑制和凋亡促进作用的影响,运用western blot检测PCNA以及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果1.和正常肺组织样本相比,miR-17在肺动脉高压患者肺组织中的表达明显增多,而Mfn2蛋白表达水平下调。q RT-PCR和western blot检测结果显示,和常氧处理的肺组织对照组相比,缺氧处理组细胞miR-17表达量上升,Mfn2蛋白表达降低。2.和anti-miR-NC对照组细胞相比,转染anti-miR-17的肺动脉平滑肌细胞增殖活性明显降低。转染miR-17抑制剂anti-miR-17后,PCNA的蛋白表达水平下降。相比anti-miR-NC对照组,anti-miR-17组细胞凋亡率和Caspase-3活性明显升高。3.与共转染miR-NC和Mfn2-3’UTR报告基因载体组相比,共转染miR-17mimics和Mfn2-3’UTR报告基因载体后,萤火虫荧光素酶活性明显降低。与共转染miR-NC和Mfn2-Mut-3’UTR报告基因载体组相比,共转染miR-17 mimics和Mfn2-Mut-3’UTR报告基因载体后,萤火虫荧光素酶活性没有明显变化,miR-17对萤火虫荧光素酶活性的抑制作用消失。转染miR-17 mimics的细胞,Mfn2蛋白表达水平明显降低,而转染anti-miR-17后,Mfn2蛋白表达水平明显上调。在PASMCs转染anti-miR-17和si Mfn2,抑制miR-17和内源性Mfn2蛋白的表达,观察肺动脉平滑肌细胞增殖、凋亡的变化。和anti-miR-NC+si NC组细胞相比,anti-miR-17+si Mfn2组细胞增殖活性降低,增殖蛋白PCNA表达降低,细胞凋亡率和Caspase-3活性上升,凋亡相关蛋白Caspas-3表达升高。结论1.miR-17在缺氧肺动脉平滑肌细胞和肺动脉高压患者肺组织表达上调,而Mfn2表达下调。2.降低miR-17的表达能够抑制低氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖,促进肺动脉平滑肌细胞凋亡。3.miR-17通过靶向调控Mfn2基因表达,调控低氧条件下肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡。综上所述,miR-17/Mfn2调控途径是缺氧诱导肺动脉平滑肌细胞过度增殖和凋亡减少的重要调节机制,miR-17可能成为防治肺动脉高压的潜在治疗靶点。
魏丽[4]2016年在《橙皮素对血小板源性生长因子-BB所致肺动脉平滑肌细胞增殖的作用研究》文中认为背景：肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension, PAH)是指处于安静状态下肺动脉平均压>25mmHg。它是由不同病因和发病机制引起的在多种临床疾病中均可出现的以肺血管阻力持续升高为特点的临床综合征。研究认为,肺动脉高压时肺血管可以出现下述诸如内膜增生,中膜肥厚,外膜增殖、纤维变性,小血管闭塞,血栓形成,炎症细胞浸润等等改变。在这之中,肺动脉平滑肌细胞(pulmonary aterial smooth muscle cells, PASMCs)的异常过度的增殖在肺血管的重构中起到关键作用。长期持续的肺动脉高压最终会导致右心室衰竭甚至死亡,尽管本病对健康水平可造成严重影响,但目前肺动脉高压的常用药物均只能改善患者的症状而不能延缓其发展进程。因此寻找能够阻滞甚至逆转肺动脉平滑肌细胞异常增殖的物质,探索新的治疗手段,对提高肺动脉高压患者的治疗效果和生活质量具有重要的价值。目的：建立血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖细胞模型,并通过使用不同浓度的橙皮素进行干预,探讨橙皮素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其相关机制,为肺血管重构的防治寻找新药物。方法：选择体重处于150-200 g的SD大鼠,分离肺动脉,选用0.2%I型胶原酶消化法分离肺动脉平滑肌细胞。应用20ng/ml PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞增殖创建细胞模型。应用不同浓度橙皮素干预(12.5、25、50、100μmol/L),通过CCK-8及BRDU法于12、24、48小时检测PASMCs的增殖和DNA合成；不同浓度橙皮素(12.5、25、50、100μmol/L)处理PASMCs于12、24、48小时后通过0.4%浓度的台盼蓝染色法检测细胞存活率；予100μmol/L橙皮素干预PDGF-BB刺激肺动脉平滑肌细胞24小时后,采用流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR (RT-PCR)检测细胞周期相关性蛋白D1,细胞周期相关性蛋白E,CDK2.CDK4和细胞周期激酶抑制蛋白p27等细胞周期相关调控蛋白mRNA的表达；用100μmol/L橙皮素干预PDGF-BB刺激的肺动脉平滑肌细胞,于作用后5、10、15分钟应用Western Blotting的方法来检测比较总的以及磷酸化的ERK1/2,p38, JNK, AKT,糖原合酶激酶3β(GSK3β)。结果：CCK-8和BRDU法检测结果表明橙皮素能够抑制PDGF-BB刺激的PASMCs增殖及DNA的合成,并且这种抑制作用具有时间依赖性和浓度依赖性。台盼蓝染色的结果表明本实验应用的各浓度组(12.5,25,50, 100μmol/L)橙皮素对处理过后的PASMCs其存活率没有显著的毒性作用；流式细胞仪分析结果表明100μmol/L橙皮素能够使G0/G1期细胞增多(62.0±0.6%-69.7±0.3%),S期细胞减少(25.7±0.9%-17.7±1.2%),抑制细胞周期于G0/G1-S期,Real Time PCR结果表明橙皮素对细胞周期的抑制作用与下调细胞周期蛋白D1,细胞周期蛋白E,CDK2, CDK4和上调P27的mRNA表达有关；进一步研究表明100μmol/L橙皮素能够抑制AKT/GSK3β和p38信号通路的磷酸化,而对ERK1/2和JNK信号通路无明显影响。结论：橙皮素可以抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,橙皮素的抑制作用是通过下调细胞周期相关性蛋白D1,细胞周期相关性蛋白E,CDK2,CDK4及上调细胞周期激酶抑制性蛋白P27的mRNA表达,将细胞周期阻滞于G0/G1-S期来实现,进一步研究提示这种抑制作用与抑制AKT/GSK3β和p38信号通路的磷酸化水平有关。橙皮素有潜力成为临床治疗肺动脉高压的药物。
夏世金[5]2006年在《腺病毒介导Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制探讨》文中指出背景和目的:肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)由收缩表型向合成表型转变,并从中膜迁移于内膜大量增殖,是低氧性肺动脉高压(HPH)肺血管结构重建(PVSR)的基本病理变化。PASMCs的增殖加速和凋亡减慢可以视为PVSR血管内膜过度增生的演变核心。以PASMCs增殖和凋亡为切入点,探讨HPH的发病机制,寻求HPH有效防治策略已成为目前研究前沿的重点和热点。有关生长因子、生长因子受体及其信号传导通路在PASMCs的生物学行为异常中的作用研究较为深入。但关于核转录因子如何将这些信号进行整合并启动级联调节反应的研究尚欠缺。Gax基因是近年来发现的调节血管平滑肌细胞生物学行为的核转录因子基因之一。研究证实Gax(growth-arrest homeobox)基因是一个主要存在于心血管系统的同源盒基因,同源盒基因在胚胎发育中调节细胞的生长、分化和迁移。增强Gax基因表达可以抑制心血管平滑肌细胞的增殖并诱导其凋亡。以往的研究侧重于Gax基因在心血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用,而有关Gax基因在肺动脉平滑肌细胞中的作用研究,目前亦尚欠缺。此外,研究侧重于Gax基因对血管平滑肌增殖的影响,对其诱导细胞凋亡的研究亦显不足。鉴于肺动脉平滑肌细胞与心血管平滑肌细胞的生物学特性具有相似性,我们推测增强Gax基因表达对低氧性PASMCs可能也有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。因此,本实验首先观察正常大鼠PASMCs中是否有Gax基因表达,以及低氧对PASMCs中Gax基因表达是否有影响;其次通过携带Gax基因的重组腺病毒载体转染体外培养的大鼠PASMCs,观察增强Gax基因表达对常氧和低氧条件下PASMCs增殖和凋亡的影响,以及原癌基因和凋亡相关基因表达的变化,探讨Gax基因在低氧性PASMCs增殖和凋亡中的作用和机制。方法:1.采用组织块贴壁法,显微镜观察和α-SM-actin免疫细胞化学方法原代培养和鉴定大鼠PASMCs。2.TR-PCR、免疫细胞化学和Western blot法检测常氧和低氧条件下PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达的变化。
潘家强[6]2005年在《早期限饲、肉鸡肺小动脉重构和肺动脉高压综合征关系的研究》文中提出通过大型临床防病试验,探索出了一套既能够有效防治肉鸡肺动脉高压综合征(pulmonary hypertension syndrome,PHS),又不影响肉鸡生产性能和胴体品质的早期限饲措施;应用细胞化学染色、免疫组织化学染色等技术,对比研究限饲组肉鸡和非限饲组肉鸡在肺血管显微形态、各型肺小血管占位比例以及体內一氧化氮(nitric oxide.NO)、脂质过氧化物水平和抗氧化酶活性的差异;并应用细胞培养、免疫细胞化学染色等技术,观察黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶自由基发生系统和NO供体硝普钠对体外培养的肉鸡肺动脉內皮细胞和平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,从而在体内和体外两个层次、整体和细胞两个水平上阐明了早期限饲、肉鸡肺小动脉重构和肺动脉高压综合征之间的关系,为通过早期限饲防制肉鸡PHS提供了理论依据。 试验Ⅰ 早期限饲对肉鸡肺动脉高压综合征发病率、肉鸡生产性能和腹脂率的影响。采用低温诱发肉鸡PHS,对比观察不同的早期限饲方法对于常温和低温条件下PHS的发病率、肉鸡生产性能和胴体品质的影响。在试验一中,限饲处理组肉鸡分别于7～14日龄或7～21日龄每天给料8h,对照组肉鸡全程自由采食。在试验二中,限饲组肉鸡分别于7～14日龄给予对照组肉鸡前一天饲料消耗量的60%或80%,对照组肉鸡自由采食。试验结果显示早期限饲能够降低肉鸡PHS的发病率,在低温条件下尤其明显;早期限饲改善了饲料效率,也未对肉鸡的胴体品质产生显著的影响,且适当限饲并不影响肉鸡的最终上市体重。这表明早期限饲是一种有效的控制肉鸡PHS的方法,值得在实际生产中推广应用。 试验Ⅱ 早期限饲降低肉鸡PHS发病率机理的研究:Ⅰ.对肉鸡肺血管重构的影响。观察早期限饲对常温和低温饲养条件下PHS的防治效果及对肉鸡肺小动脉显微形态学的影响。试验过程中连续采集肺组织进行弹力纤维染色,应用计算机图像分析系统测定肺小动脉平均中膜厚度(mMTPA)和相对中膜面积(WA/TA),计数肌性动脉(MA)、部
杨继兵[7]2003年在《肺压平复方治疗低氧性肺动脉高压的研究》文中认为目的：论文系统探导了低氧性肺动脉高压的机制，回顾了中西医防治HPH的理论知识，认为HPH是COPD的严重并发症，而HPH是加重肺源性心脏病的重要环节；肺虚痰瘀为COPD继发HPH的主要中医病机。肺压平复方由导师金妙文总结多年中西医结合临床经验，针对上述基本病理改变,进行组方,通过临床观察进一步探讨其作用机理。方法：低氧性肺动脉高压症患者随机分为两组，28例用肺压平复方治疗，19例用硝苯地平治疗，两组进行观察对比。结果：平均肺动脉压、全血粘度、血浆粘度、纤维蛋白原及红细胞压积、动脉血二氧化碳分压较治疗前明显降低(P＜0.05),动脉血氧分压明显提高(P＜0.05),疗效和硝苯地平组疗效相近(P＞0.05)，症状体征积分改善明显优于对照组。结论：结果提示中药复方制剂肺压平复方能降低缺氧性肺动脉高压,改善缺氧和血液流变学状态。具有进一步研究开发前景。
罗颖[8]2006年在《VEGF、Flk-1在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用》文中研究表明研究背景及目的： 肺动脉高压是临床上许多常见疾病的严重并发症之一，同时也是多病因、迄今发病机制仍不清楚的一种疾病。肺血管重塑是肺动脉高压的主要病理变化特征，慢性低氧是引起肺血管重塑的最常见因素之一。 血管内皮生长因子(VEGF)通过其特异性受体，尤其是KDR／Flk-1引起细胞增殖，目前研究发现，VEGF不仅对内皮细胞而且对血管平滑肌细胞，上皮细胞，成纤维细胞及肿瘤细胞都有增殖作用。 除了血管内皮细胞分泌血管活性成份以旁分泌的方式调节血管平滑肌舒缩和增殖外，血管平滑肌细胞本身也能以自分泌的方式产生许多血管活性成份。研究表明，肺血管内皮细胞通过旁分泌VEGF在低氧性肺动脉高压(HPH)的发生中起重要作用，但低氧能否通过影响平滑肌细胞自分泌VEGF而参与低氧性肺血管收缩和结构重建尚未见报道。 本研究通过观察整体动物低氧情况下及体外低氧培养的PASMCs增殖情况及VEGF，Flk-1表达变化，探讨PASMCs能否自分泌VEGF，VEGF在低氧性PASMCs增殖中的作用及其机制。
梁洪华[9]2017年在《萝卜硫素对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移影响的研究》文中研究说明目的肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是临床上的一种较为常见的疾病,其病因十分复杂,可由多种心、肺或肺血管疾病等引起。肺血管阻力升高是PH的重要特征。肺血管重塑是肺血管阻力增加的一个重要病理学因素,而血管平滑肌细胞异常增殖和迁移是血管重塑的重要病理基础。慢性缺氧可以使肺血管收缩、血管壁的张力增高,另外缺氧时肺内会产生很多种细胞因子及生长因子,可以直接作用刺激血管壁平滑肌细胞以及内膜弹力纤维增生,最终导致肺血管阻力增高。舒张肺血管、缓解肺血管重塑是目前临床药物治疗PH的重要措施。本研究通过设计缺氧细胞实验模型,探讨萝卜硫素是否对肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移存在抑制作用,为肺动脉高压的药物治疗提供参考信息。方法购买原代人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC),常规培养、传代,选取4-6代处于对数生长期生长状态良好的细胞用于实验。1.MTT法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC增殖的影响。随机将实验分为6组:实验组A往细胞加入0.5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组D往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组E往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按实验分组加入对应的药物后,放进缺氧环境内培养12h、24h、48h、72h后,用MTT法检测细胞的吸光度(OD值),然后计算出HPASMC的增殖抑制率。2.用Transwell小室法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC的迁移情况。随机将实验分为5组:实验组A往细胞加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组D往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物,将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。用Transwell小室的方法,最后得出各组HPASMC的迁移数。3.用Western Blot法测定萝卜硫素对缺氧HPASMC p38蛋白的表达情况。随机将实验分为4组:实验组A往细胞加入1μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预,实验组C往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预,对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物,将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。常规提取细胞总蛋白,按Western Blot法得到p38蛋白和β-Actin蛋白的灰度条带。最后对凝胶图像进行分析得到p38蛋白的相对表达量。结果1.MTT法检测HPASMC增殖结果显示,实验组A、B、C、D、E的HPASMC的细胞增殖抑制率均比对照组高(P<0.05);对于细胞增殖抑制率,实验组A比对照组高(P<0.05),实验组B比实验组A高(P<0.05),实验组C比实验组B高(P<0.05),实验组D比实验组C高(P<0.05),实验组E比实验组D高(P<0.05)。各个浓度组内,24h细胞增殖抑制率比12h高(P<0.05),48h的比24h的高(P<0.05),72h的比48h的高(P<0.05)。2.Transwell小室法检测HPASMC迁移的结果显示,药物干预48h后,实验组A、B、C、D的HPASMC迁移数均比对照组少(P<0.05);对于细胞迁移数,实验组A比对照组少(P<0.05),实验组B比实验组A少(P<0.05),实验组C比实验组B少(P<0.05),实验组D比实验组C少(P<0.05)。3.Western Blot法测定HPASMC中p38蛋白表达的结果显示,药物干预48h后,实验组A、B、C人肺动脉平滑肌细胞p38蛋白的表达均比实验组增少(P<0.05);细胞内p38蛋白的表达量,实验组A比对照组少(P<0.05),实验组B比实验组A少(P<0.05),实验组C比实验组B少(P<0.05)。结论萝卜硫素可以明显抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移,并可抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的p38蛋白表达。
孙立红[10]2003年在《肾上腺髓质素、C型利钠肽、神经肽Y与缺氧性肺动脉高压的关系研究》文中研究表明目的 研究缺氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)患者血浆肾上腺髓质素(Adrenomedullin，ADM)、C型利钠肽(C-type natriuretic peptide，CNP)和神经肽Y(Neuropeptide Y，NPY)的水平变化，探讨ADM、CNP、NPY与缺氧性肺动脉高压的关系以揭示缺氧性肺动脉高压的发病机制。 方法 选择慢性阻塞性肺病(COPD)并肺动脉高压、肺心病患者30例和正常对照组20例，用放免法测定血浆ADM、CNP、NPY的含量，并同时测定其血氧分压和肺动脉压力。 结果 ①血浆ADM、CNP、NPY的含量在研究组均高于对照组(t′＝10.04，13.66，7.19；P＜0.01)。②血浆ADM、CNP、NPY与氧分压呈负相关(r＝—0.75，—0.77，—0.67；P＜0.01)。③血浆ADM、CNP、NPY与肺动脉压呈正相关(r＝0.77，0.79，0.73；P＜0.01)。④血浆ADM与CNP呈正相关关系(r＝0.7l；P＜0.01)。血浆ADM与NPY呈正相关关系(r＝0.49；P＜0.01)。血浆CNP与NPY呈正相关关系(r=0.69；P＜0.01)。 结论 ①ADM、CNP、NPY参与了缺氧性肺动脉高压发生、发展的病理生理过程。②ADM、CNP、NPY的水平与缺氧程度成正比。③ADM、CNP、NPY的水平与缺氧性肺动脉高压的程度成正相关。④ADM、CNP、NPY三者之间通过复杂的调节机制，相互存在一定正相关。⑤在缺氧性肺动脉高压中，收缩血管与舒张血管因子均升高，二者比例可能决定肺动脉高压的发生、发展。⑥收缩与舒张血管因子不仅参与了HPH的早期缺氧性肺血管收缩阶段，而且参与了HPH的至关重要的最后阶段缺氧性肺血管重塑的形成。因此，COPD由低氧引起的众多血管因子的异常是缺氧性肺动脉高压形成的主要原因，这为今后预防和治疗COPD引起低氧性肺动脉高压提供了理论依据。
参考文献：
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[3]. miR-17通过靶向mitofusin 2调控缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡[D]. 路政. 郑州大学. 2016
[4]. 橙皮素对血小板源性生长因子-BB所致肺动脉平滑肌细胞增殖的作用研究[D]. 魏丽. 武汉大学. 2016
[5]. 腺病毒介导Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制探讨[D]. 夏世金. 第三军医大学. 2006
[6]. 早期限饲、肉鸡肺小动脉重构和肺动脉高压综合征关系的研究[D]. 潘家强. 南京农业大学. 2005
[7]. 肺压平复方治疗低氧性肺动脉高压的研究[D]. 杨继兵. 南京中医药大学. 2003
[8]. VEGF、Flk-1在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用[D]. 罗颖. 第四军医大学. 2006
[9]. 萝卜硫素对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移影响的研究[D]. 梁洪华. 广西医科大学. 2017
[10]. 肾上腺髓质素、C型利钠肽、神经肽Y与缺氧性肺动脉高压的关系研究[D]. 孙立红. 青岛大学. 2003
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