戴辉[1]2001年在《β-G前体药对β-G基因转染人胆管癌细胞系QBC939杀伤作用及旁观者效应》文中研究指明胆管细胞癌目前是一种不可治愈性的恶性肿瘤，早期诊断率低，治疗手段主要包括手术、化疗、放疗，但疗效均不够理想。且许多患者的死亡原因并不是肿瘤复发转移，而是胆道梗阻。因此提高局部肿瘤治疗的效率，保证胆道通畅是目前提高胆管癌生存率的有效方法。自杀基因疗法是有效治疗肿瘤且有临床应用潜能的治疗策略之一。葡萄糖醛酸苷酶（β-Glucuronidiase，βG）是溶酶体中的酸性水解酶，参与机体的生理、病理及药物代谢等过程。它能够特异性水解葡萄糖醛酸苷糖甙键，释放出葡萄糖醛酸和配基。βG在ADEPT（抗体导向酶/前体药疗法）的应用研究中，已证实其前体药对肿瘤的选择性杀伤作用。将ADEPT与基因治疗相结合，就有可能产生新的能够定向实施分子化疗的方法，用βG的相应前体药处理，有可能阻止βG表达肿瘤的异常增殖行为，为胆管癌的治疗寻找一条新的有效途径。本研究利用重组逆转录病毒载体，通过脂质体介导将βG基因转染人胆管癌细胞株QBC939，用其不同浓度的前体药-葡萄糖醛酸化表阿霉素[Epi-bus]处理，探索β-G基因/β-G前体药系统对人胆管癌细胞的杀伤作用及旁观者效应，从而建立一种新的自杀基因系统。目的 探讨β-G基因/β-G前体药-葡萄糖醛酸化表阿霉素[Epi-bus]系统对人胆管癌细胞株QBC939的杀伤作用及旁观者效应。方法1 重组逆转录病毒载体的构建与鉴定一①载体的构建 将pG基因插入逆转录病毒载体pDOR喇eo中，通过基因重组构建成表达载体pDOR－p G。②质粒的提取和鉴定 表达载体pDOR小 G，逆转录病毒载体pDOR喇eo质粒经转化感受态细菌后，接种于含氨芋青霉素 （7 u g／ml）的 LB培养基中，置 37C振荡过夜。小量提取质粒载体，分别用 ECORI、Bgi 11双酶切鉴定。2 逆转录病毒表达载体介导的pG基因在胆管癌细胞系①QBC939内的鉴定及表达。②脂质体转染胆管癌细胞及阳性细胞克隆筛选 门）细胞培养 （2）G4浓度的确定 确定最低全部杀死细胞的浓度。（培养 10－14d） （3）阳性克隆筛选：抗 G4细胞集落生长。扩大并传代培养，筛选出的G418抗性细胞分另u命名为 QBC939－0 G和 QBC939－PDOR。③pG在细胞内表达的兔疫组化、免疫荧光、原位杂交检测3 转基因胆管癌细胞形态观察及对Epi衍生物的反应①转基回胆管癌细胞的形态学观察②形态学超微结构观察③MTT法检测Epi代谢物对转基因胆管癌的作用。以pDOR－p G为目的基因，利用阳离子脂质体将其转入人胆管癌细胞株QBC939后，力入不同浓度的即i＊LIS，分别于 24。48、72 ’J＼时后 MTT法检测对转基因细胞的杀伤作用；己转染基因的细胞与未转染的细胞按1：l，1：2，…．．1：9的不同比例进行混合，分别加入20LI叮L（终浓度为0．2929几）Epi七，MTT法检测其旁观者效应。结果 免疫组织化学、兔疫荧光、原位杂交、电镜、免疫电镜等证实pDOR－pG在转基因细胞中的表达及定位；BG基因在转染细胞的转录情况，QBC939－p G转染细胞中，除胞浆内大量杂交信号外，胞核内、核膜均可见明显RNA杂交信号，说明其mRNA转录活性增强。MTT法测定示p心前体药－葡萄糖醛酸化表阿霉素＊pi上SS］对 QBC939中DOR小 G细胞有显着的 －3－一抑制增殖作用并随浓度梯度变化，且对未转染pG基回人胆管癌细胞无明显毒性o＞0刀5）。Epi上 在转染／未转染胆管癌细胞1：6的混合比率即可产生明显的旁观者效应。结论 p乃基因／pG前体药系统可以引入自杀基因系统，可能作为胆道肿瘤基因治疗的一种新方法，为双自杀基因治疗肿瘤及减少肿瘤细胞对治疗药物的耐药性提供了新的实践模式，为寻找新的抗肿瘤疫苗奠定了理论基础。
戴辉, 窦科峰, 李开宗, 高志清, 仇凯[2]2001年在《β-葡萄糖醛酸酶前药对β-G基因转染人胆管癌细胞的作用》文中研究表明0 引言胆管细胞癌目前是一种不可治愈性的恶性肿瘤,早期诊断率低,治疗手段主要包括手术、化疗、放疗,但疗效均不够理想.许多患者的死亡原因并不是肿瘤复发转移,而是胆道梗阻,因此提高局部肿瘤治疗的效率,保证胆道通畅是目前提高胆管癌生存率的有效方法.自杀基因疗法是有效治疗肿瘤且有临床应用潜能的治疗策略之一.本研究利用重组逆转录病毒载体,通过脂质体介导将βG 基因转染人胆管癌细胞株QBC939,用其不同浓度的前体药-葡萄糖醛酸化表阿霉素[Epi-bus]处理,探索βG 基因/βG 前体药系统对人胆管癌细胞的杀伤作用及旁观者效应,从而建立一种新的自杀基因系统.
参考文献：
[1]. β-G前体药对β-G基因转染人胆管癌细胞系QBC939杀伤作用及旁观者效应[D]. 戴辉. 第四军医大学. 2001
[2]. β-葡萄糖醛酸酶前药对β-G基因转染人胆管癌细胞的作用[J]. 戴辉, 窦科峰, 李开宗, 高志清, 仇凯. 世界华人消化杂志. 2001