孙林[1]2003年在《新城疫病毒血凝素—神经氨酸酶模拟表位及其免疫生物学特性研究》文中提出新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽类的一种急性传染病，被国际兽疫局列为对畜禽危害最大的A类传染病之一。目前已获得多株NDV血凝素—神经氨酸酶(HN)的基因核苷酸序列，但对其抗原模拟表位的研究还鲜有报道。 本研究以生物素标记的NDV HN单抗M22为分子探针，应用亲和筛选法从噬菌体12肽库中筛选出了该单抗所识别的模拟表位。经过叁轮亲和筛选、洗脱、扩增后，在富集试验、投入产出比试验中均证实阳性克隆明显富集。从第叁轮筛选洗脱物中，随机挑取纯化20个分隔明显的单个克隆，经夹心ELISA测定有4个克隆与McAb有较高的结合特性。通过竞争ELISA进一步证实NDV可竞争性地抑制其中一个噬菌体克隆CLONE 20与M22的结合，其抑制率达到67.3％，提取阳性克隆CLONE 20的ssDNA，电泳鉴定后测序，得到展示肽的序列为SWFHHHQARAPM。 用软件分析比较展示肽与新城疫F48E8、La Sota毒株HN序列的同源性，推断WF和QAR在HN的抗原性中起主要作用。同时用在线蛋白分析工具预测F48E8、La Sota毒株HN的抗原表位，展示肽有部分序列位于预测表位内。 动物试验表明CLONE 20能诱导SPF鸡、BALB／c小鼠产生一定水平的特异抗体。以CLONE 20加佐剂免疫的SPF鸡，叁免后HI几何平均效价为1：5.1，ELISA几何平均效价为1：78.2。仅用CLONE 20免疫的SPF鸡，叁免后HI几何平均效价为1：3.3，ELISA几何平均效价为1：26.4。而阴性对照组和健康对照组SPF鸡均没有产生HI、ELISA效价。经统计学分析，SPF鸡免疫组HI和ELISA效价明显高于阴性对照组、健康对照组。同时免疫组中，使用佐剂组与不使用佐剂组差异不显着。 以CLONE 20加佐剂免疫的BALB／c小鼠，叁免后HI几何平均效价为1：3.7，扬州大学硕士学位论文ELISA几何平均效价为l:59.7。仅用CLONE20免疫的BALB/c小鼠，叁免后Hl几何平均效价为1:2.7，ELISA几何平均效价为l:52.0。而阴性对照组和健康对照组BALB/c小鼠均没有产生HI、ELISA效价。经统计学分析，BALB/。小鼠免疫组Hl和EUSA效价明显高于阴性对照组、健康对照组。而免疫组中，使用佐剂组与不使用佐剂组差异不显着。 综上所述，本研究筛选到的多肤SwFHHHQARApM是NDv HN单抗M22所识别的模拟表位，该表位具有良好的免疫生物学特性。这为进一步研究1引闪抗原分子的结构与功能、1刃N抗原免疫机制提供了新材料，为研发新城疫模拟表位疫一苗奠定了重要基础。
孙林, 焦新安, 刘文博, 潘志明, 黄金林[2]2004年在《从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位》文中进行了进一步梳理以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过叁轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。
参考文献：
[1]. 新城疫病毒血凝素—神经氨酸酶模拟表位及其免疫生物学特性研究[D]. 孙林. 扬州大学. 2003
[2]. 从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位[J]. 孙林, 焦新安, 刘文博, 潘志明, 黄金林. 中国预防兽医学报. 2004