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【摘 要】随着科学技术不断发展，我国多重PCR技术也得到了较快发展，并在食品微生物检测中进行了有效应用。食品在人们日常生活具有重要作用，是人们生存的基本条件，在民生问题中，食品安全问题占重要地位，所以社会和人们对食品安全的重视度也在逐渐加强。但是随着食品种类不断增多，许多生产厂家为了提高自身经济效益，并没有注重食品的安全性，从而对人们的正常生活造成较大影响。本文通过对多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展进行深入探讨，提出了一些有效的建议。
【关键词】多重PCR技术；食品；微生物
随着我国社会经济不断发展，食品种类也越来越多，食品安全问题也越来越突出。食品是人们生存的基本条件，在民生问题中占有重要地位，社会和人们对食品安全问题越来越重视，所以如何提高食品安全性成为相关部门面临的重大问题。多重PCR技术能够对食品中的微生物进行检测，防止对人体有害的微生物进入食品，从而提高食品安全性，多重PCR技术的应用对食品行业的发展有着重要作用，保障了人们的身体健康。
一、食品中有害微生物概要
（一）有害微生物运作形式
在实际生活中，由于微生物的种类较多，且都有着不同的特性，所以其对人体造成危害的形式也不同，本文主要对如下三种形式进行阐述：首先是食源性中毒形式，食源性中毒指的是在食品中，某些有害微生物不断生长，并产生毒素，经人体食用后，就会出现中毒迹象。由于人们在食用这种物品时，其已经产生了毒素，所以在实际生活中，其发病时间较快、症状较明显[1]。其次是食源性感染形式，当人们食用带有有害微生物的食品后，微生物就会在人体内进行生长并繁殖，最终对人体造成感染。食源性感性是在人体食用带有有害微生物的食品后缓慢形成的，所以其发病时间较慢，初始症状并不明显。最后是中毒性感染形式，中毒性感染既包括食源性感染的特征，也包含食源性中毒的特征，在中毒性感染形式中，有害微生物会在人体内生长、繁殖，并产生毒素，最终对人体造成损害。
（二）有害微生物种类及特性
在实际生活中，有害微生物的种类较多，其中在食源性病菌中，主要病原为肠道致病菌，动物性食品一般是引起中毒的主要食物。在我国相关法律法规中，主要设定的微生物指标包括大肠杆菌、致病菌和霉菌、菌落总数TPC以及酵母菌计数[2]。在一般情况下，检测人员主要对志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等致病菌进行检测，主要特征如下：
1、金黄色葡萄球菌
在葡萄球菌属中，金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，当其存在于人体中时，会导致人体出现感染症状，最终出现多种疾病。金黄色葡萄球菌生存的空间很广，可通过多种途径对食品造成污染，主要包括食品工作人员带菌、食品销售人员带菌等，在这些途径中，金黄色葡萄球菌就会进入食品，并对食品造成污染，当人们食用了带金黄色葡萄球菌的食品后，就会出现多种病症。
2、大肠杆菌
在一定温度和一定时间内，大肠杆菌能够对乳糖进行发酵，并产酸产气，属于革兰氏阴性无芽胞杆菌，其主要生存环境是人畜粪便。大肠杆菌主要包括两种形式，一是肠杆菌科中肠杆菌数，二是大肠埃希式杆菌属，这两种形式的菌属都会对人体的生命健康造成破坏[3]。在实际生活中，大肠杆菌也属于粪便污染指标菌，当工作人员对食品中大肠杆菌进行检测时，主要通过粪便污染指标对食品中大肠杆菌的存在进行判断，当粪便污染指标较高时，证明食品中大肠杆菌含量较高，污染程度高，对人体危害较大；当粪便污染指标较低时，证明食品中大肠杆菌含量较低，污染程度低，对人体危害较小。
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3、李斯特菌
在实际生活中，李斯特菌的数量较多，而且其危害性较大，当人们食用带有李斯特菌的食物后，如果出现较严重的中毒迹象，就会对人体脑组织和血液造成感染，最终危害人们生命健康。李斯特菌的种类较多，主要包括格氏李斯特菌、单核细胞增生李斯特菌、西尔李斯特菌、威尔斯李斯特菌、默氏李斯特菌、英诺克李斯特菌以及绵羊李斯特菌，虽然其种类较多，但是会对人体造成危害的只有单核细胞增生李斯特菌[4]。单核细胞增生李斯特菌的数量较多，而且有着较强的生存能力及繁殖能力，当人体感染单核细胞增生李斯特菌后，就会引发败血症以及脑膜炎等多种疾病。
二、多重PCR技术在食品微生物检测中的应用
多重PCR技术是PCR技术的一种，将两对以上的引物加入同一个PCR反应体系中，并产生多个核酸片段的PCR反应就是多重PCR反应，在一般情况下，PCR反应与多重PCR反应有着相同的反应原理和操作过程。在实际应用过程中，多重PCR技术有许多特性，首先是高效性，多种PCR能够在同一PCR反应管里对多种病原微生物进行准确检测，能够对多型目的基因进行分型，而且有着较强的检测能力，能从很小的样品中准确检测出多种病原微生物，方便工作人员对这些病原微生物进行处理。其次是综合性，在实际检测过程中，其能够对多种病原微生物同时进行检测，包括肠道致病性细菌、无芽孢厌氧菌、肝炎肠毒以及战伤感染细菌等，这种特性能够对工作人员的检测工作起到很大作用。最后，其能降低检测成本，由于多重PCR检测技术能够在同一试管中对多种病原微生物进行检测，即提高了工作人员的检测效率，而且有效降低了检测成本，为工作人员的检测工作带来了较大便利。
当工作人员对多重PCR技术进行应用时，必须将目的条带按大小进行分类，最终通过琼脂糖凝胶对目的条带进行扩增检测。在实际检测工作中，为了防止目的条带因在不同引物下的扩增效率不同或者其长度过长导致PCR反应条件存在差异，工作人员必须确保目的条带长度必须小于700bp，最大片段小于400bp[5]。在检测过程中，为了提高检测准确度，工作人员一般会应用实时定量PCR技术检测目的条带，这种方法能够准确定量，有着较高的灵敏度。当工作人员应用实时定量PCR技术进行检测时，不必进行分析操作，所以能够防止产物之间出现污染，为工作人员的检测工作带来了极大便利。当工作人员进行实时定量荧光探针PCR检测工作时，如果进行多重PCR反应，就必须将荧光染料在每个探针中进行标记，但是在实际情况中，荧光染料有着较高的价格，对操作技术也有着较高要求，在这种情况下，工作人员可以使用非特异性荧光染料，其能够较好解决这种问题。非特异性荧光染料能够与DNA双链中的小沟进行结合，通过多种作用发出荧光，由于目的条带的扩增数量与荧光信号强度成正比，所以工作人员可以利用这种特性对多重荧光探针PCR中的问题进行有效解决。定时定量PCR检测技术有着较高的效率，而且成本较低，有着广泛的实用性，为工作人员的食品检测工作能够带来较大便利。
结束语
多重PCR技术在食品微生物检测中具有较好的应用前景，其能够对食品中的多种有害微生物进行检测，并且有着较高的检测效率，节约了检测成本，保障了食品的安全性。由于食品是人们生存的基本条件，对人们的日常生活有着重大影响，所以相关技术人员必须深入研究多重PCR技术，解决其存在问题，有效进行优化，更好保障食品安全。
参考文献：
[1]刘潇忆，张彧，陈历俊等.原料乳中微生物检测技术的研究进展[J].中国食品添加剂，2013，（2）：169-174.
[2]吴海华.多重PCR快速检测技术在食品致病微生物检测中的应用[J].现代食品，2015，（17）：43-45.
[3]肖剑.分子生物学技术在食品微生物检测中的应用[J].广西轻工业，2011，27（3）：10-12.
[4]张冲.基于RNA的PCR技术对食品中沙门氏菌与金黄葡萄球菌的检测[D].石河子大学，2012.
[5]翁思聪.多重PCR检测水产品中四种食源性致病菌的研究与检测试剂盒的开发[D].浙江工商大学，2011.
论文作者:李征莉
论文发表刊物:《航空军医》2016年第5期
论文发表时间:2016/6/7
标签：李斯特论文; 微生物论文; 食品论文; 大肠杆菌论文; 工作人员论文; 技术论文; 葡萄球菌论文; 《航空军医》2016年第5期论文;